本文關(guān)鍵詞：中藥“十八反”：白芍、丹參與藜蘆配伍相互作用及藥理作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：中醫(yī)藥是我國(guó)的傳統(tǒng)文化瑰寶,歷史悠久。中藥“十八反”是中藥藥性理論的重要組成部分,傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為“十八反”中相反的藥物配伍使用時(shí)會(huì)導(dǎo)致毒副作用增加或藥效降低,屬于中藥配伍禁忌的范疇。藜蘆(Veratrum nigrum L)與白芍(Radix Paeoniae Alba.)為相反的藥對(duì)之一,因此,在數(shù)千年的用藥過程中被禁止合用。然而,歷代醫(yī)家亦有用其治療疾病,安全有效未見毒性反應(yīng)者,部分學(xué)者認(rèn)為“十八反”藥物配伍合用仍可治療一些疾病。因此本文通過探索中藥“十八反”中藜蘆-白芍配伍使用對(duì)動(dòng)物毒性的影響及其與物質(zhì)基礎(chǔ)的相關(guān)性,試圖揭示藜蘆-白芍配伍后增毒、減效的禁忌條件及化學(xué)本質(zhì),試圖說明其產(chǎn)生毒性作用的機(jī)制,明確組成—?jiǎng)┝俊镔|(zhì)—毒效的關(guān)聯(lián)性。通過小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn),我們得到了藜蘆的毒性劑量(LD50)為2.566g/kg,并且發(fā)現(xiàn)當(dāng)藜蘆：白芍在8：1、1：1比例配伍時(shí),合煎液毒性增加。通過UPLC-TOF-MS技術(shù)以及Masslynx軟件分析各組物質(zhì)成分變化,結(jié)果顯示：藜蘆用量均相同,但合煎液中藜蘆主要生物堿成分含量卻發(fā)生明顯改變,藜蘆主要生物堿溶出變化趨勢(shì)與急性毒性實(shí)驗(yàn)中小鼠死亡率趨勢(shì)呈現(xiàn)出高度正向相關(guān)性。當(dāng)白芍劑量小于或相當(dāng)于藜蘆劑量的配比時(shí),白芍可增加藜蘆主要成分的溶出,從而致毒、增毒；當(dāng)白芍劑量高于藜蘆劑量時(shí),白芍則抑制藜蘆主要生物堿的溶出,在藜蘆-白芍1：1合煎的配伍組合條件下,白芍-藜蘆合煎液的致毒、增毒作用最為顯著。丹參(Salvia miltiorrhiza radix)作為“十八反”中的一個(gè)重要的常用中藥,在世界范圍內(nèi)被用于治療心血管疾病、代謝性疾病、肝炎、炎癥性腸病等。丹參酮ⅡA是唇形科植物丹參中的主要天然活性成分之一,因其顯著的藥理活性而廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐,市場(chǎng)上已經(jīng)有丹參提取物制作的的各種劑型藥品,主要的藥理作用有：具有抗炎、抗高血壓、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用。細(xì)胞色素P450廣泛參與藥物代謝及機(jī)體的生理病理過程,并且可產(chǎn)生藥物間相互作用,而PXR作為P450酶的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控子,具有重要的生理病理學(xué)意義。因此我們研究丹參酮ⅡA與PXR的相關(guān)性,旨在揭示丹參酮ⅡA產(chǎn)生藥物之間相互作用的機(jī)制。利用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PXR-CYP3A報(bào)告基因的HepG2工程細(xì)胞株,對(duì)“十八反”中藥物主要成分進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA具有顯著的PXR-CYP3A4誘導(dǎo)能力,且在20μM,48 h最為顯著。利用HepG2細(xì)胞和LS174T細(xì)胞,采用EMSA, qRT-PCR, Western blot等分子生物學(xué)技術(shù),結(jié)合在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),我們探討以下三個(gè)科學(xué)問題：1：丹參酮ⅡA誘導(dǎo)CYP3A是否由PXR介導(dǎo),即丹參酮ⅡA是否為PXR激動(dòng)劑;2：丹參酮ⅡA治療代謝性疾病,對(duì)LCA誘導(dǎo)的膽汁淤積型肝損傷治療作用是否有PXR的參與；3：丹參酮ⅡA作為PXR的激動(dòng)劑,是否可產(chǎn)生治療ⅠBD的作用。體外實(shí)驗(yàn)初步探索丹參主要效應(yīng)成分丹參酮ⅡA對(duì)PXR靶點(diǎn)的誘導(dǎo)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)表明,丹參酮ⅡA可劑量依賴性的誘導(dǎo)PXR、CYP3A4的表達(dá),誘導(dǎo)效應(yīng)始于PXR與CYP3A4調(diào)控區(qū)的結(jié)合階段,且對(duì)CYP3A4的激活作用是通過PXR介導(dǎo)的。石膽酸LCA為二級(jí)膽汁酸,可因在體內(nèi)的蓄積而引起膽汁淤積型肝損傷,。研究顯示,在生理狀態(tài)下,LCA可通過激活PXR而誘導(dǎo)CYP3A的表達(dá),加速LCA轉(zhuǎn)化為親水的羥基化的LCA,促進(jìn)其排出體外,減少由于膽汁淤積造成的肝損傷,維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)。實(shí)驗(yàn)通過動(dòng)物病理模型,丹參酮ⅡA可濃度依賴性防治LCA引起的膽汁淤積型肝損傷,結(jié)合PXR低表達(dá)小鼠實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論,丹參酮ⅡA防治LCA引起膽汁淤積型肝損傷可能部分通過上調(diào)PXR及Cyp3a11,Cyp3a13和MDR1α的表達(dá),從而增加對(duì)LCA的代謝,產(chǎn)生肝臟保護(hù)作用。此外,古方就有丹參治療結(jié)腸炎的記載,現(xiàn)代研究也報(bào)道了丹參酮ⅡA對(duì)結(jié)腸炎的治療作用,目前,PXR作為結(jié)腸炎的一個(gè)最新治療靶點(diǎn),已得到了廣泛的關(guān)注。我們通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),丹參酮ⅡA治療ⅠBD與炎癥機(jī)制和PXR靶點(diǎn)相關(guān),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及PXR沉默小鼠實(shí)驗(yàn)表明,給予丹參酮ⅡA后,PXR低表達(dá)小鼠對(duì)DSS誘發(fā)的小鼠ⅠBD治療效果顯著低于野生型小鼠。丹參酮ⅡA對(duì)DSS誘發(fā)的ⅠBD治療作用,部分是由PXR介導(dǎo)的上調(diào)代謝酶和下調(diào)炎癥介質(zhì)介導(dǎo)的。實(shí)驗(yàn)證明了丹參酮ⅡA通過調(diào)控PXR,可預(yù)防及治療LCA所致的膽汁淤積型肝損傷以及對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD,證明了PXR在丹參酮ⅡA在肝保護(hù)和IBD治療中具有的重要作用。我們的新的發(fā)現(xiàn)有助于丹參酮ⅡA及其衍生物作為PXR配體在人類IBD的治療中的潛在作用。本課題創(chuàng)造性的將配伍化學(xué)成分改變與毒性變化進(jìn)行關(guān)聯(lián),挖掘與毒性密切相關(guān)的貢獻(xiàn)成分及其變化,屬方法學(xué)創(chuàng)新。挖掘出對(duì)毒性貢獻(xiàn)大的毒性生物堿可能是藜蘆與反藥特定比例配伍后毒性增強(qiáng)主要化學(xué)標(biāo)志物。課題還將將基于藥物相互作用的篩選體系運(yùn)用到中藥配伍相互作用中,對(duì)配伍藥物單體成分篩選,間接反映其是否具有CYP3A的誘導(dǎo)特性,是對(duì)中藥毒性研究領(lǐng)域的拓展。此外,PXR在毒理學(xué)領(lǐng)域特別是藥物相互作用具有重要作用外,在機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)代謝以及維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)具有重要作用,本研究拓展了PXR受體藥理學(xué)研究,有助于發(fā)現(xiàn)更多的具有PXR激活特性和藥理活性的天然產(chǎn)物。
【關(guān)鍵詞】：十八反 藜蘆 白芍 丹參酮ⅡA 急性毒性 UPLC-TOF-MS 孕烷X受體 炎性腸病 葡聚糖硫酸鈉 石膽酸 膽汁淤積型肝損傷
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-15
• 第一部分 中藥“十八反”:與藜蘆配伍白芍的毒性特征與機(jī)理研究15-43
• 第一節(jié)：藜蘆、白芍單煎液急性毒性實(shí)驗(yàn)17-27
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-26
• 4 討論26-27
• 第二節(jié)：藜蘆配伍白芍的毒性特征與機(jī)理研究27-43
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法28-31
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-41
• 4 討論41-43
• 第二部分：丹參與藜蘆配伍相互作用及藥理作用研究43-98
• 第一節(jié)：丹參酮ⅡA對(duì)石膽酸所致小鼠膽汁淤積型肝損傷的保護(hù)作用45-71
• 1 實(shí)驗(yàn)材料48-50
• 2 實(shí)驗(yàn)方法50-56
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-69
• 4 討論69-71
• 第二節(jié)：丹參酮ⅡA對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的治療作用療效觀察71-98
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料74
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法74-78
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果78-96
• 4 討論96-98
• 參考文獻(xiàn)98-111
• 致謝111-113
• 個(gè)人簡(jiǎn)介113-115
• 綜述 淺析中藥“十八反”中“諸參辛芍叛藜蘆”配伍禁忌115-124
• 參考文獻(xiàn)119-124
• 附錄：論著124-125
• 附件125-172

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王宇光;王升啟;高月;;PXR受體調(diào)控的CYP3A誘導(dǎo)及其在藥物代謝中的重要意義[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

2 范欣生;尚爾鑫;陶靜;華浩明;楊環(huán);段金廒;;“十八反”同方配伍探討[J];中醫(yī)雜志;2011年12期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李國(guó)棟;藜蘆生物堿降壓作用及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];延邊大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：中藥“十八反”：白芍、丹參與藜蘆配伍相互作用及藥理作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：281554