目的:通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究黃芪注射液對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注模型是否具有保護(hù)作用以及保護(hù)作用的機(jī)理。方法:采用Zivin法,建立大鼠脊髓缺血再灌注模型。33只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組,n=3)、缺血再灌注組(B組,n=15)、黃芪組(C組,n=15)。A組只進(jìn)行麻醉和開腹手術(shù)操作,不阻斷腹主動(dòng)脈,麻醉前腹腔給予0.9%氯化鈉注射液;B組麻醉前腹腔給予0.9%氯化鈉注射液,麻醉后阻斷腹主動(dòng)脈32分鐘后再灌注;C組麻醉前30分鐘腹腔注射黃芪注射液,麻醉后阻斷腹主動(dòng)脈32分鐘后再灌注。再灌注2h、8h、12h、24h、48h后分別對(duì)三組動(dòng)物進(jìn)行后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分(BBB法)。并于各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別將三組動(dòng)物麻醉后,下腔靜脈取血4m L并切取L2-4脊髓組織進(jìn)行血清NSE、脊髓組織HE染色、測(cè)定脊髓組織中Ca2+濃度、AQP4表達(dá)及凋亡指數(shù)。結(jié)果:1、大鼠后肢神經(jīng)功能BBB評(píng)分結(jié)果:模型組和黃芪組動(dòng)物清醒后均出現(xiàn)不同程度后肢運(yùn)動(dòng)障礙,模型組和黃芪組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后肢神經(jīng)功能評(píng)分顯著低于空白組(P0.05)。隨著缺血后再灌注時(shí)間延長(zhǎng),兩組動(dòng)物后肢運(yùn)動(dòng)功能均出現(xiàn)恢復(fù),其中黃芪組動(dòng)物后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)速度較快,而模型組動(dòng)物后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)較慢,而且在48小時(shí)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尾部功能仍不能恢復(fù),處于垂尾狀態(tài),在各時(shí)間點(diǎn)黃芪組后肢神經(jīng)功能BBB評(píng)分顯著高于模型組(P0.05)。2、脊髓組織HE染色結(jié)果:假手術(shù)組:400倍光鏡視野中脊髓組織結(jié)構(gòu)清晰,未見白細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫等。神經(jīng)元細(xì)胞輪廓清晰,胞核、尼氏體正常。模型組:脊髓組織水腫,結(jié)構(gòu)不清晰,有大量白細(xì)胞浸潤(rùn),有少量紅細(xì)胞滲出,同時(shí)可見膠質(zhì)細(xì)胞增生;大量神經(jīng)元細(xì)胞退變、壞死,組織內(nèi)可見空泡形成;神經(jīng)元細(xì)胞核固縮,尼氏體消失。黃芪組:病理變化在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)明顯好于模型組,但也仍可見組織水腫,少量白細(xì)胞浸潤(rùn),未見紅細(xì)胞滲出,膠質(zhì)細(xì)胞輕度增生;組織內(nèi)有空泡形成,但仍可見較多正常神經(jīng)元?dú)埓?神經(jīng)元細(xì)胞同樣存在核固縮,尼氏體消失等變化。3、大鼠血清NSE濃度檢測(cè)結(jié)果:模型組和黃芪組兩組大鼠脊髓缺血再灌注后血清NSE濃度明顯高于空白組(P0.01);黃芪組在缺血再灌注后2h、8h、12h、24h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)血清NSE濃度明顯低于模型組(P0.01),而黃芪組在缺血再灌注后48h血清NSE濃度高于模型組(P0.01)。模型組在缺血再灌注后12h可見血清NSE濃度達(dá)高峰,而后逐漸回落;黃芪組在缺血再灌注后24h可見血清NSE濃度達(dá)高峰,而后逐漸回落,但回落趨勢(shì)慢于模型組,并于缺血再灌注48小時(shí)血清NSE含量高于模型組。與模型組相比,黃芪組缺血再灌注后血清NSE含量峰值低于模型組,波動(dòng)幅度小于模型組。4、大鼠脊髓組織Ca2+濃度檢測(cè)結(jié)果:B、C兩組脊髓組織中Ca2+濃度在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于A組(P0.01),在缺血再灌注后2h、8h、12h、24h四個(gè)時(shí)間點(diǎn),C組(黃芪組)脊髓組織中Ca2+濃度低于B組(模型組),但在缺血再灌注后48h,C組(黃芪組)脊髓組織中Ca2+濃度高于B組(模型組);其中B組在再灌注12h后達(dá)到峰值,其后逐漸回落,而C組在再灌注2h逐漸上升,在再灌注后48h達(dá)到峰值,但C組峰值低于B組峰值。5、蛋白免疫印跡法檢測(cè)大鼠脊髓組織AQP4表達(dá):模型組大鼠脊髓組織中AQP4在缺血再灌注后2-48小時(shí)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)呈上升趨勢(shì),在48h點(diǎn)達(dá)到最高峰;黃芪組大鼠脊髓組織中AQP4在缺血再灌注后8小時(shí)達(dá)到高峰,隨后逐漸降低;但模型組、黃芪組兩組脊髓組織中AQP4表達(dá)均高于空白組(P0.01),其中黃芪組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)AQP4表達(dá)均低于模型組(P0.01)。假手術(shù)組大鼠脊髓組織中AQP4表達(dá)在術(shù)后呈下降趨勢(shì),并于術(shù)后12h后基本保持穩(wěn)定。6、原位末端標(biāo)記法檢測(cè)大鼠脊髓中凋亡細(xì)胞結(jié)果:空白組切片顯示400倍視野內(nèi)可見神經(jīng)元細(xì)胞藍(lán)染,細(xì)胞形態(tài)正常,細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰,胞質(zhì)中尼氏體存在,少量細(xì)胞核為棕黃色凋亡細(xì)胞;模型組切片400倍視野可見部分神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)尚存,但細(xì)胞核明顯染為棕黃色(凋亡早期),細(xì)胞質(zhì)內(nèi)尼氏體消失,視野中也可見到明顯為棕黃色的凋亡小體(凋亡晚期),藍(lán)染的正常細(xì)胞較少見;黃芪組切片400倍視野下也可細(xì)胞核黃染的凋亡細(xì)胞,但視野內(nèi)還可見大量藍(lán)染的正常神經(jīng)元細(xì)胞。模型組、黃芪組兩組切片在400倍視野中,模型組視野內(nèi)凋亡細(xì)胞明顯多于黃芪組。三組凋亡指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果:模型組、黃芪組兩組脊髓組織中凋亡指數(shù)均高于空白組(P0.01),但各時(shí)間點(diǎn)黃芪組脊髓組織凋亡指數(shù)低于模型組(P0.01)。結(jié)論:1、黃芪注射液對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷有明顯保護(hù)作用。2、黃芪注射液可通過降低脊髓組織中Ca2+、抑制AQP4表達(dá)、下調(diào)脊髓組織中細(xì)胞凋亡指數(shù)對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2 正常脊髓組織 HE 染色（400 倍光鏡） 圖 3 再灌注 2h 脊髓組織 HE 染色（400 倍光鏡）模型組：再灌注 2h 可見部分神經(jīng)元細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)清晰，核仁明顯，少部分神經(jīng)細(xì)胞固縮，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見明顯出血（如圖 3）。再灌注 8h 可見部分神經(jīng)細(xì)胞萎縮，核固縮，組織中可見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 4）。再灌注 12h 神經(jīng)元細(xì)胞固縮、退變、壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，組織中可見中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 5）。再灌注 24h 可見神經(jīng)元細(xì)胞壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，可見灰質(zhì)出血和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 6）。再灌注 48h

圖 2 正常脊髓組織 HE 染色（400 倍光鏡） 圖 3 再灌注 2h 脊髓組織 HE 染色（400 倍光鏡）模型組：再灌注 2h 可見部分神經(jīng)元細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)清晰，核仁明顯，少部分神經(jīng)細(xì)胞固縮，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見明顯出血（如圖 3）。再灌注 8h 可見部分神經(jīng)細(xì)胞萎縮，核固縮，組織中可見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 4）。再灌注 12h 神經(jīng)元細(xì)胞固縮、退變、壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，組織中可見中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 5）。再灌注 24h 可見神經(jīng)元細(xì)胞壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，可見灰質(zhì)出血和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 6）。再灌注 48h

圖 2 正常脊髓組織 HE 染色（400 倍光鏡） 圖 3 再灌注 2h 脊髓組織 HE 染色（400 倍光鏡）模型組：再灌注 2h 可見部分神經(jīng)元細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)清晰，核仁明顯，少部分神經(jīng)細(xì)胞固縮，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見明顯出血（如圖 3）。再灌注 8h 可見部分神經(jīng)細(xì)胞萎縮，核固縮，組織中可見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 4）。再灌注 12h 神經(jīng)元細(xì)胞固縮、退變、壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，組織中可見中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 5）。再灌注 24h 可見神經(jīng)元細(xì)胞壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生，可見灰質(zhì)出血和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（如圖 6）。再灌注 48h

本文編號(hào)：2812314