【摘要】：目的:建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,設(shè)置空白組,模型組,及人參提取物高、中、低劑量組,檢測(cè)各組大鼠血液中CD3+、CD4+、CD8+的表達(dá)率及血清中IgG、IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性,探析IL-18、TNF-a mRNA的基因表達(dá),NF-kB信號(hào)傳導(dǎo)途徑在慢阻肺發(fā)病的聯(lián)系;探明人參提取物對(duì)慢阻肺大鼠免疫功能及抑制其氣道炎癥是否通過NF-kB信號(hào)傳導(dǎo)途徑來調(diào)節(jié)。方法:將60只SD成年雄性大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只,分別為模型組、人參提取物高中低劑量組及地塞米松(DXM)陽(yáng)性藥對(duì)照組。通過觀察各組大鼠整體情況、肺組織、HE染色病理切片評(píng)價(jià)慢阻肺大鼠動(dòng)物模型以及人參提取物對(duì)慢阻肺大鼠的病理改變和炎癥細(xì)胞水平的影響;運(yùn)用MASSON麥?zhǔn)先旧笥^察各組大鼠模型肺組織的膠原含量、平滑肌厚度等;應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定COPD大鼠模型支氣管平滑肌的厚度、氣管內(nèi)徑等,計(jì)算支氣管平滑肌的指數(shù)、膠原纖維面積;運(yùn)用流式細(xì)胞儀測(cè)定大鼠模型血液中CD3+、CD4+、CD8+水平的表達(dá)率,并計(jì)算CD4+/CD8+的比值;采用ELISA試劑盒測(cè)定血清中IgG、IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性;液氮速凍研磨用trizol提取大鼠肺組織mRNA,通過逆轉(zhuǎn)錄后,對(duì)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增,以內(nèi)參為對(duì)照,觀察各組大鼠模型肺組織中IL-18、TNF-a及mRNA的基因表達(dá)情況;應(yīng)用試劑盒提取大鼠肺組織中蛋白質(zhì),利用蛋白印跡(WB,Western blotting)方法,測(cè)定各組大鼠肺組織中NF-kB和I-kB的表達(dá)情況。結(jié)果:1.通過觀察動(dòng)物模型的整體情況及鏡下顯示肺組織病理學(xué)結(jié)果,證實(shí)成功復(fù)制慢阻肺肺脾氣虛證動(dòng)物的模型,為實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行提供了依據(jù);2.慢阻肺大鼠模型肺組織氣道內(nèi)炎癥降低,膠原含量、膠原纖維面積、支氣管平滑肌的指數(shù)改善,有效抑制慢阻肺大鼠的氣道重塑,作用類似于或優(yōu)于地塞米松,尤以人參提取物高、中劑量組為佳;3.人參提取物可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子水平,而降低慢阻肺大鼠血清中IgG、IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性,從而提高慢阻肺大鼠細(xì)胞及體液免疫的功能,降低其慢阻肺急性發(fā)作的次數(shù);4.不同劑量的人參提取物對(duì)慢阻肺大鼠模型IL-18、TNF-a炎性標(biāo)志物的濃度及IL-18、TNF-amRNA在肺組織的表達(dá)的影響具有一定的量效關(guān)系,尤以人參提取物高、中劑量組為佳,說明人參提取物可以抑制氣道炎癥,提高機(jī)體免疫力,增強(qiáng)其防病抗病的能力;5.人參提取物抑制氣道炎癥,改善慢阻肺肺組織的病理?yè)p害,防治COPD的可能作用機(jī)制是通過NF-kB信號(hào)傳導(dǎo)途徑,上調(diào)I-kB的表達(dá)完成。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功的復(fù)制了慢阻肺大鼠動(dòng)物模型,使本研究針對(duì)性更強(qiáng);通過分析相關(guān)數(shù)據(jù),可以證實(shí)人參提取物通過調(diào)節(jié)血清中,IgG、IgA、IgM水平及IL-18、TNF-a的活性,增強(qiáng)慢阻肺實(shí)驗(yàn)大鼠的免疫功能水平,抑制慢阻肺氣道炎癥,改善氣道重塑,其機(jī)制是通過NF-kB信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)解,從而抑制慢阻肺大鼠的氣道炎癥,調(diào)控免疫功能表達(dá)水平提高;通過下調(diào)慢阻肺炎癥因子釋放而調(diào)節(jié)慢阻肺大鼠的免疫功能。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2798993