【摘要】：PCSK9是人類高膽固醇血癥的主效基因,介導(dǎo)肝臟細(xì)胞LDLR蛋白的胞內(nèi)溶酶體降解途徑,抑制肝臟對血液中LDL-c的清除作用,從而使膽固醇水平上升。PCSK9的高表達(dá)或功能獲得性突變與動脈粥樣硬化疾病有直接的關(guān)系,而且影響肝臟功能、肝臟損傷修復(fù)、膽固醇運(yùn)輸?shù)刃誀�。為了評估PCSK9過表達(dá)對肝臟細(xì)胞功能的潛在影響,本文利用Hep G2細(xì)胞對增殖、遷移、膽固醇運(yùn)輸?shù)缺硇瓦M(jìn)行了檢測,結(jié)果顯示,PCSK9過表達(dá)不影響Hep G2細(xì)胞的增殖能力,但是顯著抑制細(xì)胞的遷移和膽固醇外排的能力。PCSK9對肝臟細(xì)胞的遷移能力的抑制與膽固醇的調(diào)節(jié)關(guān)系密切。游離膽固醇在細(xì)胞膜上的無序分布干擾了小G蛋白活性的發(fā)揮和脂筏相關(guān)受體參與的信號通路的傳導(dǎo),并參與Erk信號通路的調(diào)控。豬的心血管系統(tǒng)和血脂代謝方面與人類非常相近,是研究動脈粥樣硬化疾病的有力工具。然而豬的個(gè)體差異較大,自然發(fā)病的動物缺乏,且誘導(dǎo)病征發(fā)生緩慢,因此沒有小鼠等模式動物的應(yīng)用廣泛。為了加快疾病發(fā)生進(jìn)程,本研究將PCSK9的獲得性突變體D374Y在豬體內(nèi)過表達(dá),以期模擬動脈血管的病理學(xué)變化。本文中使用人APOE啟動子調(diào)控PCSK9的表達(dá),在人肝癌細(xì)胞系Hep G2細(xì)胞中驗(yàn)證了轉(zhuǎn)基因載體的有效性,并得到了轉(zhuǎn)基因豬個(gè)體。RNA、蛋白水平的結(jié)果顯示,人PCSK9基因在豬的肝臟中實(shí)現(xiàn)了高表達(dá)。同時(shí),組織學(xué)檢測結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因豬的肝臟有明顯的病變,且免疫組化染色結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因豬肝臟LDLR表達(dá)量極顯著的低于野生型豬。本研究成功獲得了人PCSK9過表達(dá)的體細(xì)胞克隆豬,能夠有效的控制疾病研究中個(gè)體差異造成的影響,為研究高膽固醇血癥提供理想的疾病模型動物。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R589.2;R-332

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本文編號：2772068