本文關鍵詞：熱裂解人參皂苷的分析、制備工藝及抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人參皂苷(ginsenosides)被認為是人參(Panax ginseng)的主要活性成分,幾乎能再現(xiàn)人參整體的所有生物學功能。人參皂苷按照結構類型主要分為二醇型和三醇型人參皂苷,常見的二醇型人參皂苷主要包括人參皂苷Rb1,Rb2,Rc和Rd等,三醇型人參皂苷主要包括人參皂苷Rg1,Rh1,Rg2和Re。研究表明:人參皂苷在經(jīng)過一定處理后而生成的人參次級皂苷具有更強的生物活性,如紅參加工過程中產(chǎn)生的人參皂苷Rg3和Rh2,以及腸內(nèi)菌代謝產(chǎn)生的人參皂苷Compound K等。藥材蒸制是中藥加工炮制的一種重要手段,主要起到增效減毒,改變藥性及利于保存等作用。紅參(Red ginseng)加工是中藥蒸制的一個典型代表。研究發(fā)現(xiàn):鮮人參加工成紅參后,人參皂苷糖基發(fā)生水解而生成人參皂苷Rg3,Rh2等小分子次級皂苷,這些皂苷在抗腫瘤,抗炎等方面表現(xiàn)了更強的藥理活性�；诩t參加工理論,研究者為了得到更多的人參次級皂苷,對其進行反復多次熱處理而得到一種新的人參加工品——黑參(Black ginseng)。黑參通常需要“九蒸九曝”,其人參皂苷類成分不僅發(fā)生糖基的水解,亦在C-20發(fā)生脫水及異構化,而進一步生成“熱裂解人參皂苷”。近年來此類人參皂苷受到國內(nèi)外學者的廣泛關注,如人參皂苷Rk1和Rg5等�；跓崃呀馊藚⒃碥丈傻睦碚摶A,對富含人參皂苷的不同提取物進行熱裂解人參皂苷分析。結果表明:人參莖葉總皂苷,西洋參莖葉總皂苷及三七莖葉總皂苷均含有主要的人參熱裂解皂苷Rk1和Rg5。首次明確了上述提取物經(jīng)過加工后產(chǎn)生的Rk1和Rg5含量,并對西洋參莖葉提取物進行了高溫熱裂解研究,LC/ESI-MS分析結果表明:西洋參莖葉皂苷經(jīng)過高溫熱處理后,其主要三醇型熱裂解皂苷Rg6,F4,Rk3和Rh4含量明顯升高,其二醇型人參熱裂解皂苷Rg3,Rk1和Rg5等含量亦增加明顯。本文以三醇型主要皂苷Rg1為反應物,進一步探討其熱裂解規(guī)律,利用LC/ESI-MS技術明確人參皂苷Rg1熱裂解產(chǎn)物主要包括人參皂苷20(S)-Rh1,20(R)-Rh1,Rk3和Rh4等四種皂苷,明確了其裂解歷程;本文以人參熱裂解皂苷Rk3和Rh4的生成量為考察指標,利用響應曲面法(Response surface methodology,RSM)優(yōu)化了人參皂苷Rk3和Rh4的熱裂解制備條件,明確了最佳的制備工藝為:甲酸濃度為0.02%,反應溫度為116.4℃,反應時間為2.22 h研究發(fā)現(xiàn):人參次級皂苷在抗腫瘤活性方面表現(xiàn)了更強的生物活性。本文重點探討了人參皂苷Rg1熱裂解皂苷(heated-processed products of Rg1,HPPRg1)對H22移植瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤作用,并對其抗腫瘤的分子機制進行了初步探討。結果表明:給藥2周后,HPPRg1能夠顯著抑制H22荷瘤小鼠的腫瘤生長,并延長實驗動物的生存時間。血清學指標檢測表明:HPPRg1能夠升高血清中TNF-α,IL-2,IFN-γ含量,提示其可能通過提高機體自身免疫而發(fā)揮抗腫瘤作用。利用HE和Hoechst 33258染色對腫瘤組織內(nèi)部細胞形態(tài)進行鏡下觀察,結果表明:給藥2周后,HPPRg1組腫瘤組織內(nèi)部細胞排列松散,細胞皺縮,細胞核破裂,推測HPPRg1部分通過誘導H22腫瘤細胞凋亡而發(fā)揮作用。為了進一步揭示人參皂苷Rg1熱裂解產(chǎn)物中的單體皂苷誘導腫瘤細胞凋亡的分子機制,本文探討了人參皂苷Rh4對HepG2細胞誘導凋亡的分子機制。結果表明:人參皂苷Rh4能夠呈劑量和時間依賴性的抑制HepG2細胞的增殖。此外,作用24h后,人參皂苷Rh4可以明顯誘導細胞凋亡,其在10,20,40μM劑量的細胞凋亡率分別為11.47,15.29和21.33%。Hoechst 33258熒光染色觀察發(fā)現(xiàn),隨著人參皂苷Rh4給藥濃度的增加,HepG2腫瘤細胞呈現(xiàn)細胞體積變小,細胞核固縮、碎裂和凋亡小體形成等凋亡狀態(tài)。TUNEL染色進一步驗證了上述結果。最后,利用western blot技術分析了細胞的凋亡蛋白,結果表明:人參皂苷Rh4能夠激活Caspase信號通路,增強Bax蛋白表達水平并抑制Bcl-2蛋白表達水平,提示人參熱裂解皂苷Rh4可能部分通過誘導凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。
【關鍵詞】：人參熱裂解皂苷 制備工藝 人參皂苷Rh4 抗腫瘤 H22移植瘤 HepG2細胞
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R284;R285
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 前言8-10
• 第一篇 文獻綜述10-24
• 第一章 人參化學成分及藥理作用研究概況10-17
• 1.1 化學成分研究概述10-12
• 1.2 藥理作用概述12-16
• 1.3 結語16-17
• 第二章 人參熱裂解皂苷的研究概況17-24
• 2.1 人參熱裂解皂苷的制備、分離及分析17-19
• 2.2 人參熱裂解皂苷的藥理作用19-24
• 第二篇 研究內(nèi)容24-77
• 第一章 人參熱裂解皂苷的分析及制備工藝優(yōu)化24-50
• 1.1 材料和方法24-27
• 1.2 結果27-48
• 1.3 討論48-49
• 1.4 小結49-50
• 第二章 人參皂苷Rg1熱裂解產(chǎn)物對H22荷瘤小鼠的抗腫瘤作用50-62
• 2.1 材料和方法50-53
• 2.2 結果53-59
• 2.3 討論59-61
• 2.4 小結61-62
• 第三章 人參皂苷Rh4誘導HepG2細胞的凋亡作用及分子機制62-77
• 3.1 材料和方法63-68
• 3.2 結果68-75
• 3.3 討論75-76
• 3.4 小結76-77
• 結論77-79
• 參考文獻79-97
• 作者簡介97-98
• 致謝98

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 華瓊;華海清;;人參皂苷Rg3抗肝癌作用機制的研究進展[J];中醫(yī)學報;2012年03期

  本文關鍵詞：熱裂解人參皂苷的分析、制備工藝及抗腫瘤活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：275353