【摘要】：副溶血性弧菌是世界范圍內(nèi)與海產(chǎn)品消費相關(guān)的重要致病菌,由其引起的典型疾病是胃腸炎。中國的數(shù)據(jù)顯示,副溶血性弧菌是引起細菌性食源性疾病的首要病原體。由于貝類的濾食作用,貝類中可富集大量的副溶血性弧菌,從而帶來食源性感染風(fēng)險。本研究調(diào)查了中國六個省份生食貝類中副溶血性弧菌的定量污染數(shù)據(jù)；基于定量數(shù)據(jù),建立了從養(yǎng)殖場到餐桌全過程中副溶血性弧菌在生食貝類中消長規(guī)律的數(shù)學(xué)模型,結(jié)合劑量-反應(yīng)關(guān)系,描述因生食貝類而攝入致病性副溶血性弧菌的致病概率及發(fā)病人數(shù)；針對副溶血性弧菌分離株,分析其生化、基因、耐藥和分子分型特征。一、生食貝類中副溶血性弧菌污染水平總副溶血性弧菌的陽性率和污染水平分別是70.6%和44.6MPN/g。總副溶血性弧菌的污染水平從北向南有明顯的地區(qū)趨勢,遼寧最低,從低到高依次為山東、福建、浙江、四川,最高的為廣西�？偢比苎曰【奈廴舅接忻黠@季節(jié)趨勢,以夏秋季最高�？偢比苎曰【奈廴舅皆谀迪牶兔篱g無顯著性差異。在三個采樣環(huán)節(jié)中,養(yǎng)殖場的污染水平最高,零售市場次之,餐飲市場最低,差異有顯著性。25.1%的餐飲市場的總副溶血性弧菌污染水平超過了《GB 29921》中針對水產(chǎn)制品的副溶血性弧菌限量值1,000MPN/g。致病性副溶血性弧菌的陽性率和污染水平分別是26.7%和0.5MPN/g。致病性副溶血性弧菌陽性樣品的污染水平呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)和季節(jié)趨勢。致病性副溶血性弧菌地區(qū)趨勢與總副溶血性弧菌相反,遼寧最高,廣西最低。致病性副溶血性弧菌陽性樣品的污染水平以夏季最高、冬季次之,最低為春季。毛蚶的致病性副溶血性弧菌陽性樣品的污染水平高于牡蠣。在三個采樣環(huán)節(jié)中,致病性副溶血性弧菌的污染水平為餐飲市場最高,零售市場次之,養(yǎng)殖場最低。二、生食貝類中副溶血性弧菌風(fēng)險評估本研究以養(yǎng)殖階段副溶血性弧菌的實際污染數(shù)據(jù)為起點,進行了冷鏈評估和常溫評估。本研究評估了貝類經(jīng)冷鏈流通后的副溶血性弧菌生食風(fēng)險。冷鏈評估的結(jié)果顯示：家庭食用時副溶血性弧菌的污染水平高于養(yǎng)殖階段；每餐食用風(fēng)險廣西最低,為2.36×10-5,其它三地均為10.4；結(jié)合四地的人口學(xué)數(shù)據(jù),每年食用風(fēng)險廣西最低,每年平均有323人發(fā)病,山東最高,每年平均有4942人發(fā)病。符合標(biāo)準(zhǔn)《GB 29921》限量要求的四地每餐食用風(fēng)險均為10-6,每年食用風(fēng)險均少于100人,標(biāo)準(zhǔn)保護水平均為87%以上。常溫評估結(jié)果顯示：常溫流通后,家庭食用時的副溶血性弧菌污染水平高于冷鏈評估；每餐食用風(fēng)險高于冷鏈評估；每年食用風(fēng)險高于冷鏈評估。常溫評估的標(biāo)準(zhǔn)保護水平均為98%以上。冷鏈評估南海廣西的每餐食用風(fēng)險的敏感性分析發(fā)現(xiàn)了8個風(fēng)險因素,按照相關(guān)性從大到小依次排列為氣溫牡蠣消費克數(shù)冷卻時間運輸時間初始污染水平(Cp)生食概率致病性VP陽性率總VP陽性率。南海廣西的初始污染水平位列風(fēng)險因素的第5位,相關(guān)系數(shù)為0.21,而致病性VP陽性率和總VP陽性率與每餐食用風(fēng)險的相關(guān)性僅為0.02和0.01。三、副溶血性弧菌分離菌株特征分析利用API 20E和VITEK 2 GN兩個生化鑒定系統(tǒng)進行副溶血性弧菌的生化試驗,結(jié)果顯示：臨床株和環(huán)境株有顯著性差異的四項生化是dSOR、SUCT、AMY和1LATk.八項共同生化項目中,有三項結(jié)果一致,分別是ONPG/BGAL、H2S和SAC；其余五項生化結(jié)果不一致,其中GLU/OFF、CIT和LDC等三項生化有顯著性差異。菌株OMP基因陽性率為100%。其中臨床株tdh陽性率為89.25%,trh基因均為陰性；88株環(huán)境株中有1株tdh陽性、1株trh陽性。臨床株T3SS2陽性率為98.92%,環(huán)境株有1株陽性。臨床株P(guān)GS陽性率為96.77%,環(huán)境株為67.05%。ERIC結(jié)果顯示：臨床株陽性率為88.17%,高于環(huán)境株的10.23%。9株環(huán)境株SXT陽性。副溶血性弧菌對八種抗生素的耐藥譜大致相同,多數(shù)菌株表現(xiàn)為對氨芐西林耐藥及中介。其氨芐西林MIC值的幾何均數(shù)大于耐藥標(biāo)準(zhǔn)。四株菌表現(xiàn)為多重耐藥／中介,出現(xiàn)了復(fù)方新諾明耐藥、慶大霉素中介、四環(huán)素中介等表型。相比PFGE, ERIC-PCR和REP-PCR的優(yōu)點是更加快速便捷,適合用于大量菌株的分型分析。本研究結(jié)果顯示,ERIC-PCR和REP-PCR都具有一定的分型能力,能夠用于副溶血性弧菌的分子分型。ERIC-PCR的擴增條帶更多,而分型的群數(shù)較少；REP-PCR的擴增條帶數(shù)量較少,而分型能力更強。來自不同樣品種類、采樣環(huán)節(jié)和采樣地點的菌株經(jīng)兩種方法分型后都有較高的相似系數(shù),說明副溶血性弧菌在環(huán)境中存在優(yōu)勢污染菌株。
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R155.5
【圖文】：

圖１１邋ＭＰＮ－ＰＣ民檢驗流程逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１邋Ｔｈｅ邋ｆｌｏｗ邋ｃｈａｒｔ邋ｏｆ邋ＭＰＮ－ＰＣ民逡逑４N２邐ＭＰＮ檢驗逡逑根據(jù)污染程度，在溫暖月份（５－１０月）和寒冷月份（１１－４月）可Ｗ選用不同逡逑的３個連續(xù)適宜稀釋度。每個稀釋度接種３支盛有９邋ｍＬ邋ＡＰＷ的試管，每管接種１逡逑ｍＬ，置于３７邋’Ｃ恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)８ｈ－１８ｈ。逡逑４．１．３邋分離培養(yǎng)逡逑所有顯示生長的ＭＰＮ增菌管，用接種環(huán)沾取一環(huán)，于ＴＣＢＳ瓊脂或科瑪嘉弧逡逑菌顯色培養(yǎng)基上劃線分離，３７邋‘Ｃ培養(yǎng)１８－２４邋ｈ。副溶血性弧菌的典型茜形態(tài)為：逡逑在ＴＣＢＳ上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，直徑２－３邋ｍｍ；在科瑪嘉弧菌逡逑顯色培養(yǎng)基上呈圓形、半透明、表面光滑的粉紫色茵落，直徑２－３邋ｍｍ。逡逑２３逡逑

１３１個數(shù)據(jù)來自四川，２４４個數(shù)據(jù)來自江寧，２２２個數(shù)據(jù)來自浙江品種類分類，３９８個數(shù)據(jù)來自毛郵，７９８個數(shù)據(jù)來自牡郵。按照采樣環(huán)節(jié)５個數(shù)據(jù)來自餐飲市場，５８１個數(shù)據(jù)來自零售市場，４６０個數(shù)據(jù)來自養(yǎng)殖采樣季節(jié)分類，５０２個來自夏r-，２２７個數(shù)據(jù)來自秋季，１７９個數(shù)據(jù)來自８個數(shù)據(jù)來自春季。按照采樣年份分類，５７７個數(shù)據(jù)為２０１３年監(jiān)測數(shù)據(jù)，據(jù)為２０１４年監(jiān)測數(shù)據(jù)。因四川為內(nèi)陸省份，其零售市場的牡蝸主要運自冰鮮杜頓。逡逑副溶血性弧菌的陽性率逡逑根據(jù)／化基因ＰＣ民結(jié)果是否陽性，按照監(jiān)測地點、樣品種類、采樣環(huán)節(jié)和分別進行分析，＾式研巧總副溶血性弧菌陽性率的多維分布。逡逑按照監(jiān)測地點逡逑

Ｗ從定性水平了解致病性副溶血性弧菌的分布特征。逡逑６．４．１總體概況逡逑如圖２－６所示，在抓陽性的樣品中，誠陽性的樣品占２４．３％，Ｗｉ陽性的占１６．４％逡逑，０ＲＦ８陽性的占２２．９％。致病性副溶血性弧菌陽性（即Ｓ者中任一基因陽性）的逡逑樣品占３７．８％，其中１９．７％的樣品為二個或者二個Ｗ上毒為基因同時陽性。逡逑Ｔｏｔａｌ邋ｓａｍｐｌｅｓ逡逑ｔ`e？洰．＂？邐２４．３％邐￣？逡逑：貓獻：．．進巧姦邋１６．４＊。邐／邐／／邐＼逡逑１邐７日．６％邐２５，４％邋；］逡逑。靜［５７p}海海炒Γ財危苠危苠危義稀遙蹋病畠2進￣逡逑圖２－邋６致病性副溶血性弧菌占總副溶血性弧菌的比例逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－邋６邋Ｔｈｅ邋ｒａｔｉｏ邋ｏｆ邋ｐａｒｔｉｏTBｅｎｉｃ邋Ｋ邋ｐａｒａ／ｚａｅｍｏ（ｖｎ．ｃ化ｙ邋ｔｏ邋化化１逡逑注：榐表示誠２，邋和０ＲＦ８Ｈ個基因中二個或者二個Ｕ上陽性占總副溶血性弧菌逡逑（伽陽性）比例。逡逑６．４．２按照監(jiān)測化點逡逑六個省份致病性副溶血性弧菌的總陽性率是２６．７％。最高四川為５８．８％，其逡逑次福建為４１．６％，然后依次為廣西（２５．７％）、山東（２０．４％）、江寧（１７．２％）、逡逑浙江（１３．１％）。地區(qū)間致病性副溶血性弧菌的陽性率有顯著性差異（ＰＯ．０１）。逡逑３８逡逑

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