【摘要】：副溶血性弧菌是世界范圍內(nèi)與海產(chǎn)品消費(fèi)相關(guān)的重要致病菌,由其引起的典型疾病是胃腸炎。中國(guó)的數(shù)據(jù)顯示,副溶血性弧菌是引起細(xì)菌性食源性疾病的首要病原體。由于貝類(lèi)的濾食作用,貝類(lèi)中可富集大量的副溶血性弧菌,從而帶來(lái)食源性感染風(fēng)險(xiǎn)。本研究調(diào)查了中國(guó)六個(gè)省份生食貝類(lèi)中副溶血性弧菌的定量污染數(shù)據(jù)；基于定量數(shù)據(jù),建立了從養(yǎng)殖場(chǎng)到餐桌全過(guò)程中副溶血性弧菌在生食貝類(lèi)中消長(zhǎng)規(guī)律的數(shù)學(xué)模型,結(jié)合劑量-反應(yīng)關(guān)系,描述因生食貝類(lèi)而攝入致病性副溶血性弧菌的致病概率及發(fā)病人數(shù)；針對(duì)副溶血性弧菌分離株,分析其生化、基因、耐藥和分子分型特征。一、生食貝類(lèi)中副溶血性弧菌污染水平總副溶血性弧菌的陽(yáng)性率和污染水平分別是70.6%和44.6MPN/g�？偢比苎曰【奈廴舅綇谋毕蚰嫌忻黠@的地區(qū)趨勢(shì),遼寧最低,從低到高依次為山東、福建、浙江、四川,最高的為廣西�？偢比苎曰【奈廴舅接忻黠@季節(jié)趨勢(shì),以夏秋季最高�？偢比苎曰【奈廴舅皆谀迪牶兔篱g無(wú)顯著性差異。在三個(gè)采樣環(huán)節(jié)中,養(yǎng)殖場(chǎng)的污染水平最高,零售市場(chǎng)次之,餐飲市場(chǎng)最低,差異有顯著性。25.1%的餐飲市場(chǎng)的總副溶血性弧菌污染水平超過(guò)了《GB 29921》中針對(duì)水產(chǎn)制品的副溶血性弧菌限量值1,000MPN/g。致病性副溶血性弧菌的陽(yáng)性率和污染水平分別是26.7%和0.5MPN/g。致病性副溶血性弧菌陽(yáng)性樣品的污染水平呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)和季節(jié)趨勢(shì)。致病性副溶血性弧菌地區(qū)趨勢(shì)與總副溶血性弧菌相反,遼寧最高,廣西最低。致病性副溶血性弧菌陽(yáng)性樣品的污染水平以夏季最高、冬季次之,最低為春季。毛蚶的致病性副溶血性弧菌陽(yáng)性樣品的污染水平高于牡蠣。在三個(gè)采樣環(huán)節(jié)中,致病性副溶血性弧菌的污染水平為餐飲市場(chǎng)最高,零售市場(chǎng)次之,養(yǎng)殖場(chǎng)最低。二、生食貝類(lèi)中副溶血性弧菌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估本研究以養(yǎng)殖階段副溶血性弧菌的實(shí)際污染數(shù)據(jù)為起點(diǎn),進(jìn)行了冷鏈評(píng)估和常溫評(píng)估。本研究評(píng)估了貝類(lèi)經(jīng)冷鏈流通后的副溶血性弧菌生食風(fēng)險(xiǎn)。冷鏈評(píng)估的結(jié)果顯示：家庭食用時(shí)副溶血性弧菌的污染水平高于養(yǎng)殖階段；每餐食用風(fēng)險(xiǎn)廣西最低,為2.36×10-5,其它三地均為10.4；結(jié)合四地的人口學(xué)數(shù)據(jù),每年食用風(fēng)險(xiǎn)廣西最低,每年平均有323人發(fā)病,山東最高,每年平均有4942人發(fā)病。符合標(biāo)準(zhǔn)《GB 29921》限量要求的四地每餐食用風(fēng)險(xiǎn)均為10-6,每年食用風(fēng)險(xiǎn)均少于100人,標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)水平均為87%以上。常溫評(píng)估結(jié)果顯示：常溫流通后,家庭食用時(shí)的副溶血性弧菌污染水平高于冷鏈評(píng)估；每餐食用風(fēng)險(xiǎn)高于冷鏈評(píng)估；每年食用風(fēng)險(xiǎn)高于冷鏈評(píng)估。常溫評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)水平均為98%以上。冷鏈評(píng)估南海廣西的每餐食用風(fēng)險(xiǎn)的敏感性分析發(fā)現(xiàn)了8個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素,按照相關(guān)性從大到小依次排列為氣溫牡蠣消費(fèi)克數(shù)冷卻時(shí)間運(yùn)輸時(shí)間初始污染水平(Cp)生食概率致病性VP陽(yáng)性率總VP陽(yáng)性率。南海廣西的初始污染水平位列風(fēng)險(xiǎn)因素的第5位,相關(guān)系數(shù)為0.21,而致病性VP陽(yáng)性率和總VP陽(yáng)性率與每餐食用風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性?xún)H為0.02和0.01。三、副溶血性弧菌分離菌株特征分析利用API 20E和VITEK 2 GN兩個(gè)生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行副溶血性弧菌的生化試驗(yàn),結(jié)果顯示：臨床株和環(huán)境株有顯著性差異的四項(xiàng)生化是dSOR、SUCT、AMY和1LATk.八項(xiàng)共同生化項(xiàng)目中,有三項(xiàng)結(jié)果一致,分別是ONPG/BGAL、H2S和SAC；其余五項(xiàng)生化結(jié)果不一致,其中GLU/OFF、CIT和LDC等三項(xiàng)生化有顯著性差異。菌株OMP基因陽(yáng)性率為100%。其中臨床株tdh陽(yáng)性率為89.25%,trh基因均為陰性；88株環(huán)境株中有1株tdh陽(yáng)性、1株trh陽(yáng)性。臨床株T3SS2陽(yáng)性率為98.92%,環(huán)境株有1株陽(yáng)性。臨床株P(guān)GS陽(yáng)性率為96.77%,環(huán)境株為67.05%。ERIC結(jié)果顯示：臨床株陽(yáng)性率為88.17%,高于環(huán)境株的10.23%。9株環(huán)境株SXT陽(yáng)性。副溶血性弧菌對(duì)八種抗生素的耐藥譜大致相同,多數(shù)菌株表現(xiàn)為對(duì)氨芐西林耐藥及中介。其氨芐西林MIC值的幾何均數(shù)大于耐藥標(biāo)準(zhǔn)。四株菌表現(xiàn)為多重耐藥／中介,出現(xiàn)了復(fù)方新諾明耐藥、慶大霉素中介、四環(huán)素中介等表型。相比PFGE, ERIC-PCR和REP-PCR的優(yōu)點(diǎn)是更加快速便捷,適合用于大量菌株的分型分析。本研究結(jié)果顯示,ERIC-PCR和REP-PCR都具有一定的分型能力,能夠用于副溶血性弧菌的分子分型。ERIC-PCR的擴(kuò)增條帶更多,而分型的群數(shù)較少；REP-PCR的擴(kuò)增條帶數(shù)量較少,而分型能力更強(qiáng)。來(lái)自不同樣品種類(lèi)、采樣環(huán)節(jié)和采樣地點(diǎn)的菌株經(jīng)兩種方法分型后都有較高的相似系數(shù),說(shuō)明副溶血性弧菌在環(huán)境中存在優(yōu)勢(shì)污染菌株。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R155.5
【圖文】：

圖１１邋ＭＰＮ－ＰＣ民檢驗(yàn)流程逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１邋Ｔｈｅ邋ｆｌｏｗ邋ｃｈａｒｔ邋ｏｆ邋ＭＰＮ－ＰＣ民逡逑４N２邐ＭＰＮ檢驗(yàn)逡逑根據(jù)污染程度，在溫暖月份（５－１０月）和寒冷月份（１１－４月）可Ｗ選用不同逡逑的３個(gè)連續(xù)適宜稀釋度。每個(gè)稀釋度接種３支盛有９邋ｍＬ邋ＡＰＷ的試管，每管接種１逡逑ｍＬ，置于３７邋’Ｃ恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)８ｈ－１８ｈ。逡逑４．１．３邋分離培養(yǎng)逡逑所有顯示生長(zhǎng)的ＭＰＮ增菌管，用接種環(huán)沾取一環(huán)，于ＴＣＢＳ瓊脂或科瑪嘉弧逡逑菌顯色培養(yǎng)基上劃線分離，３７邋‘Ｃ培養(yǎng)１８－２４邋ｈ。副溶血性弧菌的典型茜形態(tài)為：逡逑在ＴＣＢＳ上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，直徑２－３邋ｍｍ；在科瑪嘉弧菌逡逑顯色培養(yǎng)基上呈圓形、半透明、表面光滑的粉紫色茵落，直徑２－３邋ｍｍ。逡逑２３逡逑

１３１個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自四川，２４４個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自江寧，２２２個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自浙江品種類(lèi)分類(lèi)，３９８?jìng)�(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自毛郵，７９８?jìng)�(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自牡郵。按照采樣環(huán)節(jié)５個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自餐飲市場(chǎng)，５８１個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自零售市場(chǎng)，４６０個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自養(yǎng)殖采樣季節(jié)分類(lèi)，５０２個(gè)來(lái)自夏r-，２２７個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自秋季，１７９個(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自８?jìng)�(gè)數(shù)據(jù)來(lái)自春季。按照采樣年份分類(lèi)，５７７個(gè)數(shù)據(jù)為２０１３年監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，據(jù)為２０１４年監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。因四川為內(nèi)陸省份，其零售市場(chǎng)的牡蝸主要運(yùn)自冰鮮杜頓。逡逑副溶血性弧菌的陽(yáng)性率逡逑根據(jù)／化基因ＰＣ民結(jié)果是否陽(yáng)性，按照監(jiān)測(cè)地點(diǎn)、樣品種類(lèi)、采樣環(huán)節(jié)和分別進(jìn)行分析，＾式研巧總副溶血性弧菌陽(yáng)性率的多維分布。逡逑按照監(jiān)測(cè)地點(diǎn)逡逑

Ｗ從定性水平了解致病性副溶血性弧菌的分布特征。逡逑６．４．１總體概況逡逑如圖２－６所示，在抓陽(yáng)性的樣品中，誠(chéng)陽(yáng)性的樣品占２４．３％，Ｗｉ陽(yáng)性的占１６．４％逡逑，０ＲＦ８陽(yáng)性的占２２．９％。致病性副溶血性弧菌陽(yáng)性（即Ｓ者中任一基因陽(yáng)性）的逡逑樣品占３７．８％，其中１９．７％的樣品為二個(gè)或者二個(gè)Ｗ上毒為基因同時(shí)陽(yáng)性。逡逑Ｔｏｔａｌ邋ｓａｍｐｌｅｓ逡逑ｔ`e？洰．＂？邐２４．３％邐￣？逡逑：貓獻(xiàn)：．．進(jìn)巧姦邋１６．４＊。邐／邐／／邐＼逡逑１邐７日．６％邐２５，４％邋；］逡逑。靜［５７p}海海炒Γ財(cái)危苠危苠危義稀遙蹋病畠2進(jìn)￣逡逑圖２－邋６致病性副溶血性弧菌占總副溶血性弧菌的比例逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－邋６邋Ｔｈｅ邋ｒａｔｉｏ邋ｏｆ邋ｐａｒｔｉｏTBｅｎｉｃ邋Ｋ邋ｐａｒａ／ｚａｅｍｏ（ｖｎ．ｃ化ｙ邋ｔｏ邋化化１逡逑注：榐表示誠(chéng)２，邋和０ＲＦ８Ｈ個(gè)基因中二個(gè)或者二個(gè)Ｕ上陽(yáng)性占總副溶血性弧菌逡逑（伽陽(yáng)性）比例。逡逑６．４．２按照監(jiān)測(cè)化點(diǎn)逡逑六個(gè)省份致病性副溶血性弧菌的總陽(yáng)性率是２６．７％。最高四川為５８．８％，其逡逑次福建為４１．６％，然后依次為廣西（２５．７％）、山東（２０．４％）、江寧（１７．２％）、逡逑浙江（１３．１％）。地區(qū)間致病性副溶血性弧菌的陽(yáng)性率有顯著性差異（ＰＯ．０１）。逡逑３８逡逑

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