本文關鍵詞：模擬微重力及延胡索乙素對惡性膠質(zhì)瘤細胞U251MG凋亡的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性膠質(zhì)瘤是最常見的嚴重危害人類健康的顱內(nèi)腫瘤之一。由于其呈浸潤性生長,多與腦組織無明顯分界,手術難以全切,故術后復發(fā)率高,生存率低;而常用抗腫瘤藥物對機體損害大、毒副作用強;且腫瘤細胞易產(chǎn)生耐藥性,影響治療效果[1]。所以,研究治療腦惡性膠質(zhì)瘤的方法和藥物已成為腦惡性膠質(zhì)瘤治療中的熱點問題[2]。研究證實,藥物治療腦惡性膠質(zhì)瘤主要是通過誘導細胞凋亡來實現(xiàn),因此,探討治療方法和藥物對腦惡性膠質(zhì)瘤細胞的凋亡的影響,具有重要的意義。隨著對中藥治療惡性膠質(zhì)瘤的相關研究不斷展開,中藥抗惡性膠質(zhì)瘤的作用已被證實[8]。作為中醫(yī)氣機升降理論中的重要組成部分,中藥通過升降的不同特性發(fā)揮著治療腫瘤的作用[9]。于是,我們以導師王宗仁教授臨床實踐為基礎,結合古代醫(yī)案中篩選出治療腦腫瘤的出現(xiàn)頻次最高的中藥,觀其抗惡性膠質(zhì)瘤的作用效果,為進一步研發(fā)治療惡性膠質(zhì)瘤的中藥提供可靠的實驗依據(jù)。隨著航天生命科學的發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)，失重或模擬微重力能夠減慢細胞生長，影響期周期，促進其凋亡，而惡性膠質(zhì)瘤細胞具有增值快、細胞周期失控和抗凋亡等特性，因此，我們選用模擬微重力這一與提升作用類似的手段對惡性膠質(zhì)瘤細胞U251 MG進行干預,觀察其對細胞增殖、細胞周期,以及細胞凋亡的影響。第一部分基于中醫(yī)古籍挖掘的治療腦腫瘤高頻藥物分析目的:篩選古代醫(yī)籍中,即具有升降作用,又具有抗腦腫瘤作用的高頻藥物。方法:應用文本發(fā)掘的方法,收集整理古代治療腦腫瘤的醫(yī)籍,提取醫(yī)案;運用Microsoft Access軟件建立古代腦腫瘤病醫(yī)案的數(shù)據(jù)庫,運用SAS 9.1統(tǒng)計軟件和頻數(shù)的數(shù)理統(tǒng)計方法對治療腦腫瘤的高頻藥物進行挖掘分析,篩選出治療腦腫瘤的高頻藥物。結果:在343份古籍醫(yī)案中,共記錄143味中藥,高頻藥物集中在前32味,其中以累積頻率達77.53%。其中,具升調(diào)作用的中藥有11個,占整個高頻藥物群的34.37%。頻次最高的為具有升提作用的中藥延胡索。結論:具有升提作用的延胡索是篩選出的治療腦腫瘤頻次最高的中藥。第二部分dl-THP抗惡性膠質(zhì)瘤的作用及機制研究實驗一dl-THP對U251MG凋亡及p53和p21表達的影響目的:觀察不同濃度的dl-THP對U251MG凋亡以及p53和下游p21表達的影響。方法:用不同濃度的dl-THP干預U251MG,采用CCK-8法檢測U251MG增殖能力,流式細胞術和TUNEL法檢測細胞凋亡;選用蛋白免疫印跡法檢測凋亡相關蛋白p53、p21的表達,同時,采用p53抑制劑PFT-α與dl-THP聯(lián)合處理U251MG,觀察U251MG增殖和凋亡。結果:(1)不同濃度的dl-THP干預U251MG后,U251MG的增殖均明顯受到抑制(P0.01),并呈濃度依賴性;(2)U251MG凋亡率隨干預濃度的升高而增加(P0.01);(3)U251MG中p53和p21的表達上調(diào)(P0.01),PFT-α與dl-THP聯(lián)合處理U251MG后,U251MG的增殖和凋亡被抑制。結論:dl-THP能在體外抑制U251MG的增殖,并促進凋亡,其促進凋亡的機制可能與p53被激活及其下游的p21生成及穩(wěn)定表達有關。實驗二dl-THP對U251MG荷瘤裸鼠的抑瘤作用及p53和p21表達的影響目的:觀察dl-THP對U251MG荷瘤裸鼠抗惡性膠質(zhì)瘤作用及對p53和p21蛋白表達的影響。方法:將U251MG種植于BALB/C-nu裸鼠皮下,建立U251MG荷瘤裸鼠模型。連續(xù)給予dl-THP(1mg/Kg/day,2mg/Kg/day)10d后,剝離瘤體,稱重、測量體積、計算抑瘤率,并觀察模型小鼠生存時間;采用免疫組織化學法和蛋白免疫印跡法檢測dl-THP治療后瘤體組織內(nèi)p53和p21蛋白的表達。結果:(1)dl-THP干預組的抑瘤率分別為54.2%(dl-THP 1mg/Kg/day)和65.9%(dl-THP2mg/Kg/day),與對照組相比具有顯著的差異性(P0.01);(2)dl-THP干預組最長生存時間為34d;(3)瘤體組織內(nèi)的p53和p21的蛋白表達上調(diào)(P0.01)。結論:dl-THP能明顯抑制瘤組織增長,延長荷瘤小鼠的生存時間,其作用機制可能與瘤體組織內(nèi)的p53和p21蛋白表達上調(diào)促進惡性膠質(zhì)瘤細胞凋亡有關。第三部分模擬微重力對U251MG凋亡及p21和IGFBP-2表達的影響目的:觀察模擬微重力對U251MG的增殖、細胞周期和凋亡的影響及促凋亡的機制。方法:在模擬微重力干預U251MG 12h、24h、48h、72h后,采用CCK-8法檢測增殖能力,流式細胞術檢測細胞周期;透射電子顯微鏡、流式細胞術和TUNEL法觀察細胞凋亡;采用熒光玻片蛋白芯片篩選與凋亡相關的細胞因子,并選用蛋白免疫印跡法和實時定量PCR檢測模擬微重力對凋亡相關蛋白IGFBP-2和p21蛋白及m RNA表達。結果:(1)模擬微重力干預12h、24h、48h、72h后,U251MG的增殖明顯受到抑制(P0.01),并具有時間依賴性;(2)U251MG的細胞周期分布發(fā)生明顯改變(P0.01),且隨模擬微重力干預時間的增加,逐漸由S期阻滯漸向G0/G1期阻滯轉變;(3)U251MG凋亡數(shù)量增加(P0.01),凋亡率隨著干預時間的延長而增加(P0.01),并出現(xiàn)結構和形態(tài)的改變;(4)U251MG中p21的蛋白和m RNA表達上調(diào),相反,IGFBP-2的表達下調(diào)(P0.01)。結論:模擬微重力能抑制U251MG增殖、阻滯其細胞周期及促進其凋亡;凋亡發(fā)生的機制可能與p21和IGFBP-2的表達異常有關。
【關鍵詞】：腦腫瘤 頻次 升提 延胡索 dl-THP U251MG 凋亡 p53 p21 dl-THP U251MG荷瘤裸鼠模型 p21 p53 模擬微重力 U251MG 凋亡 p21 IGFBP-2
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 文獻回顧17-28
• 第一部分 基于中醫(yī)古籍挖掘的治療腦腫瘤高頻藥物分析28-38
• 引言28
• 1 資料28-29
• 2 方法29-32
• 3 結果32-36
• 4 結論36
• 5 討論36-38
• 第二部分DL-THP抗惡性膠質(zhì)瘤作用及機制38-67
• 實驗一DL-THP對U251MG凋亡及P53和P21表達的影響38-54
• 引言38
• 1 材料38-40
• 2 實驗方法40-46
• 3 結果46-50
• 4 結論50
• 5 討論50-54
• 實驗二DL-THP對U251MG荷瘤裸鼠的抑瘤作用及P53和P21表達的影響54-67
• 引言54
• 1 材料54-55
• 2 實驗方法55-58
• 3 結果58-62
• 4 結論62
• 5 討論62-67
• 第三部分 模擬微重力對惡性膠質(zhì)瘤細胞U251MG凋亡及P21和IGFBP-2 表達的影響67-89
• 引言67
• 1 材料67-68
• 2 實驗方法68-79
• 3 結果79-86
• 4 結論86
• 5 討論86-89
• 小結89-90
• 參考文獻90-106
• 個人簡歷和研究成果106-108
• 致謝108

  本文關鍵詞：模擬微重力及延胡索乙素對惡性膠質(zhì)瘤細胞U251MG凋亡的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：268543