本文關(guān)鍵詞：牛黃參含藥血清誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及其分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】在細(xì)胞和分子水平探討牛黃參含藥血清(NHS)誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及其可能的作用機(jī)制,為其在肝癌中的廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論支持。【方法】結(jié)合細(xì)胞與血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,對比空白血清、陽性藥CTX、不同濃度組NHS含藥血清對HepG2細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)調(diào)控基因Cyclin D1、FAS及線粒體膜電位的影響。主要實(shí)驗(yàn)過程如下:1.制備空白對照、CTX及NHS含藥鼠血清,并體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2。2.用CCK-8法檢查CTX及0%、5%、10%和20%NHS含藥血清對HepG2細(xì)胞生長抑制率。3.HepG2細(xì)胞給藥48 h后,DAPI染色,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。4.HepG2細(xì)胞給藥48 h后,凝膠電泳檢測DNA ladder。5.實(shí)時(shí)定量PCR檢測NHS含藥血清對HepG2細(xì)胞細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1 mRNA表達(dá)的影響。6.免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)檢測NHS含藥血清對HepG2細(xì)FAS抗原表達(dá)的影響。7.流式細(xì)胞術(shù)檢測NHS含藥血清對HepG2細(xì)胞線粒體膜電位的影響。【結(jié)果】1.成功制備NHS含藥血清,隨著NHS濃度的增加,HepG2細(xì)胞的生長明顯受抑,20%NHS組其細(xì)胞抑制率和CTX組相當(dāng),差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;隨著藥物作用時(shí)間的延長,細(xì)胞生長受抑程度明顯加重。2.采用熒光顯微鏡檢測DAPI染色的兩組細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn),與空白對照組相比,20%NHS孵育48小時(shí)后,HepG2細(xì)胞核染色質(zhì)明顯固縮和碎裂,產(chǎn)生凋亡小體。3.DNA Ladder檢測提示HepG2細(xì)胞加入CTX和不同濃度的NHS后,與空白組相比均有連續(xù)的寡克隆帶或多聚體的形成,濃度5%、10%和20%的NHS含藥血清均具有和CTX基本一致的寡克隆帶形成,表明其具有明顯的促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。4.隨著NHS濃度的逐步增加(5%NHS組、10%NHS組和20%NHS組),Cyclin D1 mRNA的表達(dá)水平逐漸下降,而且20%NHS組的表達(dá)量與空白對照組相比,差別具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.免疫組化結(jié)果顯示,與空白對照組相比,除CTX組的細(xì)胞內(nèi)棕黃色顆粒明顯增多外,從5%到20%的NHS含藥血清組,陽性細(xì)胞的比例明顯增高,提示Fas的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。與空白對照HepG2的Fas陽性細(xì)胞數(shù)(1.75±0.34)%相比,不同濃度的NHS含藥血清(5%,10%,20%)孵育48小時(shí)后的Fas陽性細(xì)胞數(shù)分別為(6.54±0.98)%,(13.84±0.72)%和(27.03±2.01)%,與空白對照相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),提示Fas蛋白表達(dá)升高具有明顯的濃度依賴性,且20%NHS含藥血清組與CTX組相比差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6.NHS作用于HepG2細(xì)胞后48 h,,熒光強(qiáng)度隨著NHS濃度升高而逐漸降低,提示線粒體膜電位水平降低�！窘Y(jié)論】NHS含藥血清具有誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的作用,其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制可能是通過下調(diào)細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1表達(dá),升高FAS表達(dá)水平及降低線粒體膜電位相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：牛黃參 HepG2 凋亡 Cyclin D1 FAS 線粒體 膜電位
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞表9-11
• 前言11-15
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分 理論研究15-27
• 1 傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對肝癌的認(rèn)識15-16
• 1.1 病因病機(jī)15-16
• 1.2 對肝癌治療的認(rèn)識16
• 2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對原發(fā)性肝癌的認(rèn)識16-22
• 2.1 發(fā)病機(jī)制16-17
• 2.2 細(xì)胞凋亡與原發(fā)性肝癌的關(guān)系17-22
• 參考文獻(xiàn)22-27
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究27-57
• 實(shí)驗(yàn)一NHS含藥血清制備及對HepG2細(xì)胞生長抑制作用研究27-33
• 1 材料27-28
• 2 方法28-30
• 3 結(jié)果30-31
• 4 討論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-33
• 實(shí)驗(yàn)二 熒光顯微鏡檢測HepG2細(xì)胞凋亡33-36
• 1 材料33
• 2 方法33-34
• 3 結(jié)果34
• 4.討論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-36
• 實(shí)驗(yàn)三 凝膠電泳檢測DNA Ladder36-39
• 1 材料36
• 2 方法36-37
• 3 結(jié)果37
• 4 討論37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 實(shí)驗(yàn)四 定量PCR檢測細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1表達(dá)39-46
• 1 材料39
• 2 方法39-42
• 3 結(jié)果42-43
• 4 討論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 實(shí)驗(yàn)五 對HepG2細(xì)胞FAS表達(dá)的影響46-52
• 1 材料46
• 2 方法46-48
• 3 結(jié)果48
• 4 討論48-51
• 參考文獻(xiàn)51-52
• 實(shí)驗(yàn)六 對HepG2細(xì)胞線粒體膜電位（△ψmt）的影響52-57
• 1 材料52
• 2 方法52
• 3 結(jié)果52-53
• 4 討論53-56
• 參考文獻(xiàn)56-57
• 第三部分 討論57-67
• 1 中藥血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法探討57-59
• 2 模型建立及指標(biāo)的確立59-61
• 3 組方中藥及其現(xiàn)代藥理學(xué)分析61-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 結(jié)語67-69
• 文獻(xiàn)綜述69-82
• 參考文獻(xiàn)77-82
• 附圖82-85
• 附圖 1：藥物干預(yù)對細(xì)胞形態(tài)的影響82-83
• 附圖 2：DNAladder檢測各組細(xì)胞凋亡83-84
• 附圖 3：NHS對FAS表達(dá)影響的免疫組化圖片84-85
• 致謝85-86

  本文關(guān)鍵詞：牛黃參含藥血清誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及其分子機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：263871