本文關(guān)鍵詞：探討海珠益肝加味方對免疫性肝損傷小鼠腸—肝軸及腸道菌群的干預作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究基于對中醫(yī)經(jīng)典理論“肝脾同治”以及現(xiàn)代醫(yī)學“腸-肝軸”學說的充分認識,探討海珠益肝加味方對Con A(Concanavalin A,刀豆蛋白A)誘導的慢性免疫性肝損傷小鼠肝臟Toll樣受體信號轉(zhuǎn)導通路及腸道功能的影響,探明慢性免疫性肝損傷與腸黏膜功能、內(nèi)毒素水平以及腸道菌群間的關(guān)系,明確腸道功能在慢性肝炎發(fā)生、發(fā)展中的作用。本實驗通過分析這一過程中所涉及的關(guān)鍵信號通路,進一步揭示“肝脾同治”和“腸-肝軸”的科學內(nèi)涵,為慢性乙型肝炎的防治提供新思路和新策略。方法:小鼠48只,隨機分為4組,空白對照組、模型組、甘草酸二銨組、海珠益肝加味方組各12只。模型組、甘草酸二銨組、海珠益肝加味方組采用6mg·kg-1 w-1的劑量尾靜脈注射Con A,共6周,復制慢性免疫性肝損傷模型。模型復制后甘草酸二銨組小鼠以甘草酸二銨0.68g·kg-1d-1的劑量灌胃給藥,海珠益肝加味方組小鼠以海珠益肝加味方15.17g·kg-1d-1的劑量灌胃給藥,空白對照組及模型組予以等劑量的蒸餾水灌胃,每日9a.m.和3p.m.分兩次灌胃,連續(xù)4周。灌胃給藥結(jié)束后,當日夜間禁食,次日清晨采集各組小鼠糞便標本,繼而采集血液和肝臟、回腸等組織標本。測定各組小鼠血清ALT(alanine aminotransferase,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)、AST(aspartate aminotransferase,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)和TBIL(total bilirubin,總膽紅素)水平;取肝臟組織作病理學切片,進行HE染色評定肝組織病損積分;取回腸組織作病理學切片,進行HE染色在光學顯微鏡下觀察各組小鼠腸黏膜病損情況;以電子顯微鏡對各組小鼠肝組織進行超微病理學觀察;ABC-ELIASA法檢測血清中TNF-α(tumor necrosis factor-α,腫瘤壞死因子-α)、IL-6(interleukin-6,白細胞介素-6)及LBP(LPS binding protein,脂多糖結(jié)合蛋白)的水平;鱟試劑顯色基質(zhì)法測定血漿內(nèi)毒素水平;Western blot(免疫印跡試驗)法檢測小鼠肝組織中tlr4(toll-likereceptor-4,toll樣受體4)、myd88(myeloidddifferentiationfactor88,髓樣分化因子-88)、nf-κb(nuclearfactor-k-genebinding,基因結(jié)合核因子)蛋白表達;realtime-pcr檢測小鼠肝臟組織中tlr4mrna、myd88mrna、nf-κbmrna以及腸道關(guān)鍵菌群--enco(enterococcus,腸球菌)、e.coli(enterobacteriaceae,腸桿菌)、bifi(bifidobacterium,雙歧桿菌)、lacto(lactobacillus,乳酸桿菌)的含量。結(jié)果:1.alt、ast、tbil情況:與空白對照組比較,模型組、甘草酸二銨組、海珠益肝加味方組小鼠血清alt、ast、tbil水平均升高(p均0.05);與模型組比較,甘草酸二銨組、海珠益肝加味方組血清alt、ast、tbil水平均降低(p均0.05);與甘草酸二銨組比較,海珠益肝加味組在降低小鼠血清tbil水平方面優(yōu)于甘草酸二銨(p0.05),但alt下降水平不及甘草酸二銨組(p0.05),兩組ast水平未見明顯差異(p0.05)。2.病理組織學變化:光學顯微鏡下顯示,模型組小鼠肝臟淤血,匯管區(qū)大量的淋巴細胞浸潤,肝板消失,肝細胞排列紊亂;與模型組比較,甘草酸二銨組和海珠益肝加味方組在減輕肝組織病損積分方面差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。在肝臟超微結(jié)構(gòu)上,模型組肝細胞核固縮,胞膜形態(tài)不完整,胞質(zhì)疏松,線粒體腫脹,嵴模糊,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張;甘草酸二銨組和海珠益肝加味方組在以上方面均較模型組有所改善。小鼠回腸組織病理學顯示,模型組小鼠回腸黏膜固有層變薄,上皮細胞變性脫落,絨毛水腫,排列紊亂,淋巴細胞浸潤增多;甘草酸二銨組和海珠益肝加味方組在以上方面均較模型組有顯著改善。3.tnf-α、il-6的表達:模型組、甘草酸二銨組、海珠益肝加味方組小鼠血清中tnf-α、il-6水平明顯高于空白對照組(p0.05);與模型組比較,甘草酸二銨組小鼠血清tnf-α水平下降(p0.05),而il-6水平明未見明顯差異(p0.05);與模型組比較,海珠益肝加味方組tnf-α、il-6水平均下降,差異有統(tǒng)計學意義(p均0.05)。與甘草酸二銨組比較,海珠益肝方加味組il-6水平下降(p0.05),tnf-α水平未見差異(p0.05)。4.內(nèi)毒素、lbp水平:與空白對照組比較,模型組、甘草酸二銨組小鼠內(nèi)毒素和lbp水平明顯升高(p均0.05);與模型組比較,甘草酸二銨組小鼠內(nèi)毒素和lbp水平未見明顯差異(p均0.05);與模型組比較,海珠益肝加味方組lbp和內(nèi)毒素水平均降低(p均0.05)。與甘草酸二銨組比較,海珠益肝方加味組小鼠血漿lbp、lps水平降低(p均0.05)。5.肝組織tlr4-myd88-nf-κb通路的蛋白表達及轉(zhuǎn)錄水平:模型組肝組織tlr4、myd88、nf-κb的蛋白表達和mrna轉(zhuǎn)錄水平均明顯升高(p均0.05);與模型組比較,甘草酸二銨組,tlr4、myd88、nf-κb蛋白表達和mrna轉(zhuǎn)錄水平下降(p均0.05);與模型組比較,海珠益肝加味方組肝組織tlr4、myd88、nf-κb的蛋白表達和mrna轉(zhuǎn)錄水平均下降(p0.05)。與甘草酸二銨組相比,海珠益肝加味方組myd88蛋白表達水平及tlr4、nf-κbmrna轉(zhuǎn)錄水平下降(p均0.05),余未見統(tǒng)計學意義(p均0.05)。6.腸道菌群水平:模型組小鼠腸道菌群中雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量較空白對照組下降,而腸桿菌、腸球菌的數(shù)量增加(p0.05);在甘草酸二銨的干預下腸桿菌、腸球菌的數(shù)量較模型組降低(p0.05);在海珠益肝加味方的干預下腸桿菌、腸球菌的數(shù)量較模型組降低,雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量增加(p0.05)。與甘草酸二銨組相比海珠益肝加味方組小鼠腸道菌群中雙歧桿菌數(shù)量增加,腸桿菌、腸球菌的數(shù)量下降(p0.05)。結(jié)論:以“肝脾同治”為法的海珠益肝加味方在降低轉(zhuǎn)氨酶(alt、ast)和膽紅素(tbil)方面具有良好作用。同時海珠益肝加味方能夠減輕肝組織和回腸組織的病理損傷程度,其抗慢性免疫性肝損傷的作用機制可能為:1.海珠益肝加味方可能是通過抑制tlr4、myd88和nf-κb的表達,從而調(diào)控tlr4-myd88-nf-κb信號通路,降低tnf-α、il-6水平,減少促炎因子的過度刺激,以減輕過度的免疫反應,從而起到抗肝損傷的作用。2.海珠益肝加味方通過改善肝損傷小鼠的腸道病理損傷,保護腸黏膜屏障及調(diào)節(jié)腸道菌群,減少機會致病菌產(chǎn)生內(nèi)毒素,從而降低小鼠血漿內(nèi)毒素水平,并通過降低內(nèi)毒素配體LBP水平,對內(nèi)毒素生物學效應起到明顯阻斷作用,故海珠益肝加味方可在一定程度上減輕由腸道損傷所加重的肝臟損傷。
【關(guān)鍵詞】：免疫性肝損傷 腸-肝軸 腸道菌群 肝脾同治 海珠益肝加味方
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• Abstract10-16
• 中英文縮略詞表16-18
• 前言18-20
• 材料方法20-43
• 1 材料20-24
• 2 方法24-25
• 2.1 動物分組24
• 2.2 模型復制和給藥24-25
• 3 觀察指標25-42
• 3.1 動物的一般情況25
• 3.2 光、電鏡觀察小鼠肝、回腸組織25-28
• 3.3 血清轉(zhuǎn)氨酶及膽紅素水平測定28
• 3.4 雙抗體夾心ELISA法測定小鼠血清IL-6、TNF-α、LBP水平28-29
• 3.5 鱟試劑顯色基質(zhì)法測定小鼠血漿內(nèi)毒素水平29-30
• 3.6 Western blot測定小鼠肝組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達30-35
• 3.7 Real Time-PCR測定小鼠肝組織TLR4mRNA、MyD88 mRNA、NF-κBmRNA轉(zhuǎn)錄水平35-38
• 3.8 16SrDNA熒光定量PCR測定小鼠腸道菌群水平38-42
• 4 統(tǒng)計學方法42-43
• 結(jié)果分析43-57
• 1 動物的一般情況43-44
• 2 肝臟、回腸病理組織學觀察44-47
• 3 海珠益肝加味方對小鼠血清ALT、AST、TBIL的影響47
• 4 海珠益肝加味方對小鼠血清IL-6、TNF-α水平的影響47-48
• 5 海珠益肝加味方對小鼠LPS及LBP水平的影響48-49
• 6 各組小鼠肝組織TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白表達水平49-51
• 7 小鼠肝組織TLR4mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA轉(zhuǎn)錄水平51-54
• 8 各組小鼠腸道菌群水平54-57
• 討論57-80
• 1 慢性免疫性肝損傷動物模型的復制57-58
• 1.1 模型的選擇57-58
• 1.2 模型的評價58
• 2 對于慢性乙型肝炎病機的再認識58-61
• 3 海珠益肝加味方方解61-65
• 3.1 海珠益肝加味方的前期研究基礎61-62
• 3.2 海珠益肝加味方的組方原則62-65
• 4 海珠益肝加味方的保肝降酶退黃作用65-67
• 4.1 海珠益肝加味方的保肝降酶作用65-66
• 4.2 海珠益肝加味方的降酶退黃作用66-67
• 5 海珠益肝加味方對“腸-肝軸”的影響67-74
• 5.1 海珠益肝加味方對內(nèi)毒素的影響68-70
• 5.2 海珠益肝加味方對TLR4-MyD88-NF-κB通路的影響70-72
• 5.3 海珠益肝加味方對細胞因子的影響72-74
• 6 海珠益肝加味方對小鼠腸黏膜及腸道菌群的影響74-77
• 6.1 海珠益肝加味方對小鼠腸黏膜的影響74-76
• 6.2 海珠益肝加味方對小鼠腸道菌群的影響76-77
• 7 存在的問題及下一步研究方向77-80
• 7.1 關(guān)于慢性免疫性肝損傷小鼠的辯證問題78
• 7.2 關(guān)于研究可拓展方向的思考78-80
• 結(jié)語80-81
• 參考文獻81-96
• 附錄96-110
• 1 文獻綜述96-107
• 參考文獻103-107
• 2 附圖107-109
• 3 博士期間參與課題和發(fā)表論文情況109-110
• 致謝110

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳史平,胡德榮,張宏煉;海珠王口服液質(zhì)量標準的研究[J];基層中藥雜志;1999年03期

2 ;[J];;年期

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 李紅梅 通訊員 胡戈;海珠城管：多管齊下抓創(chuàng)衛(wèi)[N];民營經(jīng)濟報;2007年

2 本報記者 鐘菊生　通訊員 鄒s

本文編號：260776