發(fā)布時間：2017-03-20 23:10

  本文關鍵詞：CD100及其受體PlexinB2在銀屑病發(fā)病中的作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:銀屑病作為臨床常見的一種慢性炎癥性皮膚病,其典型臨床表現(xiàn)為邊界清晰的鱗屑性紅斑塊[1,2],組織病理以表皮角質形成細胞(KC)過度增生及分化異常、真皮炎細胞浸潤為特征。銀屑病易反復且病情頑固,對患者生活質量影響很大。但關于銀屑病的確切發(fā)病機理尚未完全闡明,其治療并不理想。因此,關于銀屑病發(fā)病機制的相關研究一直是皮膚科學界關注的熱點。以往的研究發(fā)現(xiàn),KC和T細胞的相互作用在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用,是銀屑病發(fā)病的關鍵機制之一[3]。KC與T細胞相互作用所形成的惡性循環(huán),是使銀屑病皮損經久不愈的重要原因之一。因此,想要更進一步探索闡明銀屑病的發(fā)病機制,必須更進一步深入研究KC與T細胞之間的相互作用,這對尋找新的治療方法具有重大意義。近期,有研究證實,小鼠γδT細胞表面的CD100分子可與KC表面的Plexin-B2結合,促進γδT細胞的形態(tài)改變和遷移[4],提示CD100-Plexin B2是介導γδT細胞與KC相互作用的重要機制。CD100,即Semaphorin 4D,是一種重要的免疫調節(jié)分子,在T細胞表面高表達,其作用為調節(jié)T細胞和B細胞應答,并以可溶型形式(s CD100)以較低水平存在于血清中。CD100的高親和力受體是Plexin-B1和Plexin B2,表達于多種上皮和內皮細胞以及神經和免疫細胞,參與多種組織細胞的增殖和遷徙。前期工作中,通過分析s CD100在銀屑病患者的表達,我們發(fā)現(xiàn),相比于正常對照,進展期銀屑病患者血清中s CD100表達水平明顯升高,并且,Plexin B2也在銀屑病患者皮損KC上高表達,在濕疹和正常表皮組織中的表達量則很低,提示CD100-Plexin B2很可能通過介導KC和γδT細胞的相互參與了銀屑病發(fā)病,但確切作用及其機制尚不明確。我們提出假說認為,CD100與Plexin B2相互作用參與了銀屑病發(fā)病:一方面銀屑病患者體內s CD100與皮損KC表面Plexin B2結合,調控KC增殖、遷移或其他生物學活性,另一方面KC通過其膜表面Plexin B2作用于表皮內γδT細胞,調控其在表皮內的活化和遷移。目的:1.進一步明確CD100及Plexin B2在銀屑病患者組織中的表達,明確CD100對KC的作用。2.利用咪喹莫特(IMQ)誘導的銀屑病小鼠模型,闡明CD100及Plexin B2在小鼠銀屑病模型中的作用。3.在體外細胞培養(yǎng)的基礎上,闡明CD100-Plexin B2相互作用的分子機制。方法:1.利用免疫組化、Western-blot、ELISA及RT-PCR與Real-time RT-PCR等方法,分析CD100及其受體Plexin B2在銀屑病患者血清及皮損的表達。2.利用CD100體外作用于Hacat細胞和原代KC,分別從細胞生長、增殖及凋亡等多個方面,進行CD100對KC作用的評估;進一步利用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗,觀察分析原代KC和Hacat細胞經CD100體外刺激24h后,細胞的遷移和侵襲改變。3.構建咪喹模特銀屑病小鼠模型,檢測皮損CD100和Plexin B2的表達;以Plexin B2-si RNA作用于銀屑病小鼠模型,從大體、HE、浸潤細胞等層面分析Plexin B2沉默對銀屑病模型的影響,進一步分析Plexin B2沉默后皮損浸潤細胞類型、表達細胞因子等情況,以探索Plexin B2發(fā)揮作用的機制。4.體外細胞培養(yǎng)中干涉Plexin B2的表達,觀察Plexin B2表達降低對原代KC和Hacat細胞生長、增殖、凋亡等不同方面的影響,并檢測Plexin B2沉默后,相關細胞因子表達的變化。5.基于體外細胞培養(yǎng),分析CD100-Plexin B2作用的下游信號通路。結果:1.銀屑病患者外周血中s CD100表達水平較正常人明顯增高,銀屑病患者皮損局部CD100及plexin B2表達水平明顯高于正常皮膚及正常人。2.s CD100能夠促進Hacat細胞和原代KC增殖、遷移和侵襲,抑制Hacat細胞和原代KC凋亡;干涉Plexin B2能夠抑制CD100誘導的KC增殖,提示CD100是通過與Plexin B2相互作用來促進KC的增殖和侵襲;3.成功構建咪喹模特(IMQ)誘導的銀屑病小鼠模型,IMQ誘導七天后,小鼠耳部皮膚出現(xiàn)明顯增厚并伴有紅腫和大量鱗屑,皮損Plexin-B2表達增高;干涉Plexin B2表達后,小鼠耳部皮膚的增厚、紅腫和鱗屑明顯緩解,皮損T細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞等淋巴細胞的浸潤顯著減少,并且,同時可觀察到IL-17、IL-22、IL-36、CXCL1、CCL20等炎癥相關細胞因子的表達水平明顯下降,表明Plexin B2在IMQ銀屑病模型中發(fā)揮重要作用。4.干涉Plexin B2能明顯抑制Hacat細胞增殖,促進細胞凋亡,明顯抑制細胞侵襲和遷移能力;干涉Plexin B2能夠抑制銀屑病相關細胞因子、誘導KC趨化因子產生,提示影響相關細胞因子和趨化因子的產生是Plexin B2發(fā)揮功能的重要方式。5.干涉Plexin B2可抑制Hacat細胞中的Akt及Erk信號的活化,提示CD100作用于Hacat細胞主要是通過Plexin B2激活下游Akt和Erk信號通路來發(fā)揮作用。結論:我們發(fā)現(xiàn)CD100及其配體Plexin B2在銀屑病異常表達;CD100-Plexin B2相互作用可以促進KC的遷移及增殖;Plexin B2通過影響相關細胞因子及趨化因子的分泌、調控局部皮膚淋巴細胞浸潤參與小鼠銀屑病模型的發(fā)病;CD100-Plexin B2的下游信號途徑包括Akt和Erk信號通路。我們發(fā)現(xiàn)并首次揭示了CD100-Plexin B2分子間相互作用在銀屑病發(fā)病中的重要作用及潛在機制,為銀屑病治療提供了新思路。
【關鍵詞】：銀屑病 Plexin-B2 CD100 淋巴細胞 細胞因子
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語表4-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-16
• 文獻回顧16-34
• 1 材料34-42
• 1.1 主要儀器設備34-35
• 1.2 主要實驗試劑35-37
• 1.3 實驗溶液配制37-40
• 1.4 其它材料40-42
• 2 方法42-53
• 2.1 CD100 及PlexinB2 在銀屑病患者中的表達分析42-47
• 2.2 Plexine-B2 在咪喹莫特誘導的銀屑病小鼠模型中的作用47-49
• 2.3 CD100 及PlexinB2 在角質形成細胞中的作用49-52
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析52-53
• 3 結果53-72
• 3.1 CD100 及其配體Plexin B2 在銀屑病患者的表達水平及其對KC生物學功能的影響53-60
• 3.2 在體干涉Plexin B2 對咪喹莫特（IMQ）誘導的銀屑病表型的影響60-64
• 3.3 CD100 及其受體Plexin B2 促進銀屑病發(fā)生發(fā)展的機制研究64-72
• 4 討論72-76
• 小結76-77
• 參考文獻77-88
• 個人簡歷和研究成果88-89
• 致謝89

  本文關鍵詞：CD100及其受體PlexinB2在銀屑病發(fā)病中的作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：258630