發(fā)布時(shí)間：2017-03-21 02:02

  本文關(guān)鍵詞：AQP3在ER陽性乳腺癌發(fā)病機(jī)制中的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率、死亡率分別位居全球女性惡性腫瘤的第一及第五位。其中,雌激素受體(ER)陽性乳腺癌患者占據(jù)了患者總數(shù)的60-70%。雖然內(nèi)分泌治療對(duì)大部分ER陽性患者有效,但由于其耐藥現(xiàn)象及不良反應(yīng)的存在,我們有必要尋找新型治療靶點(diǎn)。水通道蛋白3(AQP3)是AQP家族中的重要成員,它的主要功能是參與水及甘油的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。近年來,AQP3被報(bào)道在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高,其中包括乳腺癌。然而,關(guān)于AQP3在乳腺癌組織中高表達(dá)的原因及是否存在臨床意義尚未有深入的研究。為了探尋AQP3在ER陽性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,我們首先觀察了AQP3在乳腺癌中的表達(dá)情況及其臨床意義。熒光定量PCR結(jié)果顯示,AQP3在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯高于其自身癌旁正�？椊M。ER陽性乳腺癌切片的免疫組化結(jié)果顯示,AQP3的高表達(dá)可能提示著癌細(xì)胞更高的惡性程度。同時(shí),免疫組化結(jié)果也顯示,絕經(jīng)前患者乳腺癌細(xì)胞中的AQP3表達(dá)水平顯著高于絕經(jīng)后患者中的。在此基礎(chǔ)上,我們進(jìn)一步研究E2對(duì)ER陽性乳腺癌中AQP3的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)制。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,E2可以上調(diào)ER陽性乳腺癌細(xì)胞中AQP3的表達(dá)。這種上調(diào)作用是劑量依賴的,且可以被ER阻斷劑阻斷。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)及熒光素報(bào)告酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,E2-ER復(fù)合物可以通過結(jié)合AQP3基因啟動(dòng)子區(qū)域的雌激素受體反應(yīng)元件直接上調(diào)AQP3的表達(dá)。通過siRNA干擾技術(shù)我們發(fā)現(xiàn),AQP3敲降后,E2介導(dǎo)的ER陽性乳腺癌細(xì)胞的遷移及侵襲行為顯著減弱。過表達(dá)實(shí)驗(yàn)顯示,AQP3表達(dá)上調(diào)后,細(xì)胞的遷移及侵襲能力顯著增強(qiáng)。由此推測(cè),在ER陽性乳腺癌細(xì)胞中,E2可以通過直接上調(diào)AQP3的表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞的遷移及侵襲。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),AQP3表達(dá)升高會(huì)影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT)相關(guān)分子的表達(dá),促進(jìn)微絲骨架重構(gòu)并形成絲狀偽足,從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。綜上所述,ER陽性乳腺癌細(xì)胞中,E2能夠直接上調(diào)AQP3的表達(dá)；而AQP3上調(diào)導(dǎo)致的EMT相關(guān)分子表達(dá)水平的改變及微絲骨架的重構(gòu),能促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。本文通過對(duì)AQP3在ER陽性乳腺癌發(fā)病機(jī)制中的研究,初步揭示了AQP3高表達(dá)與ER陽性乳腺癌病理分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移等臨床特征相關(guān),證明了E2上調(diào)AQP3的機(jī)制及AQP3在E2介導(dǎo)的乳腺癌遷移及侵襲中的作用。上述結(jié)果初步證明了ER陽性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中一種新的作用機(jī)制,為乳腺癌的基礎(chǔ)及臨床研究提供了科學(xué)依據(jù),也為乳腺癌治療提供了新的潛在性靶點(diǎn)。第一部分AQP3在ER陽性乳腺癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義目的：觀察AQP3在人乳腺癌組織上的表達(dá)情況。探討ER陽性乳腺癌組織中AQP3表達(dá)水平與患者臨床特征間的關(guān)系。方法：1.采用熒光定量PCR的方法對(duì)20例乳腺癌患者的乳腺癌組織及其癌旁正常組織進(jìn)行AQP3 mRNA水平的檢測(cè)。2.采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)AQP3在56例ER陽性乳腺癌組織切片中的表達(dá)及定位。結(jié)果：1.AQP3在乳腺癌組織中的表達(dá)量顯著高于其自身癌旁正常組織中的。2.ER陽性乳腺癌患者中,AQP3在高病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性及乳癌晚期的乳腺癌中的表達(dá)量分別高于低病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性及乳癌早期的乳腺癌中的。3.ER陽性乳腺癌患者中,絕經(jīng)前患者乳腺癌細(xì)胞中的AQP3表達(dá)水平顯著高于絕經(jīng)后患者乳腺癌細(xì)胞中的。結(jié)論：ER陽性乳腺癌細(xì)胞中,AQP3表達(dá)升高可能提示腫瘤更高的惡性程度。第二部分E2通過雌激素受體反應(yīng)原件直接調(diào)控ER陽性乳腺癌細(xì)胞中AQP3的表達(dá)目的：探討乳腺癌中,E2是否具有調(diào)節(jié)AQP3表達(dá)的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制。方法：1.用E2和／或ER受體阻斷劑ICI182780處理ER陽性乳腺癌細(xì)胞,采用熒光定量PCR及Western Blot的方法檢測(cè)AQP3表達(dá)水平的改變。2.利用RSAT調(diào)控序列分析工具分析AQP3基因啟動(dòng)子區(qū)域序列中潛在的ERE。3.利用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)及熒光素報(bào)告酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)潛在ERE的功能。結(jié)果：1.E2能夠顯著上調(diào)ER陽性乳腺癌細(xì)胞中AQP3的表達(dá)。這種上調(diào)作用呈劑量依賴性,且可以被ER阻斷劑ICI1821780阻斷。2.AQP3基因啟動(dòng)子區(qū)存在有功能的ERE。E2可通過ER直接作用于AQP3啟動(dòng)子區(qū)的ERE,從而上調(diào)ER陽性乳腺癌中AQP3的表達(dá)。結(jié)論：我們首次發(fā)現(xiàn)AQP3基因啟動(dòng)子區(qū)存在有功能的ERE。在ER陽性乳腺癌中,E2能通過基因組轉(zhuǎn)錄途徑直接上調(diào)AQP3的表達(dá)。第三部分AQP3通過影響EMT相關(guān)分子的表達(dá)及微絲骨架的重構(gòu)來實(shí)現(xiàn)E2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲目的：探討AQP3在E2介導(dǎo)的ER陽性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法：1.采用MTT法研究ER陽性細(xì)胞中,AQP3在E2介導(dǎo)的細(xì)胞增殖中的作用。2.采用劃痕實(shí)驗(yàn)研究ER陽性細(xì)胞中,AQP3在E2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移中的作用。3.采用Transwell法研究ER陽性細(xì)胞中,AQP3在E2介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲中的作用。4.羅丹紅-鬼筆環(huán)肽染色,激光共聚焦觀察AQP3對(duì)細(xì)胞微絲骨架形態(tài)的影響。5.采用熒光定量PCR技術(shù)研究,AQP3上調(diào)后對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)分子表達(dá)的影響。結(jié)果：1.E2能夠促進(jìn)ER陽性乳腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲及增殖。AQP3敲降后,E2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲行為顯著減弱,但增殖行為無明顯變化。2.E2能影響ER陽性乳腺癌細(xì)胞微絲骨架的重構(gòu),使細(xì)胞更易于遷移和侵襲。AQP3敲降后,E2對(duì)微絲骨架重構(gòu)的影響顯著減弱。3.AQP3過表達(dá)后,乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著增強(qiáng),但增殖能力無明顯變化。4.AQP3過表達(dá)后,乳腺癌細(xì)胞的微絲骨架發(fā)生重構(gòu),且EMT相關(guān)分子的表達(dá)水平發(fā)生顯著改變,使細(xì)胞更易于遷移和侵襲。結(jié)論：ER陽性乳腺癌中,E2上調(diào)AQP3對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的增強(qiáng)是通過影響EMT相關(guān)分子的表達(dá)和微絲骨架的重構(gòu)實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：水通道蛋白3 乳腺癌 雌激素 雌激素受體反應(yīng)元件 水通道蛋白3 乳腺癌 細(xì)胞遷移 細(xì)胞侵襲 微絲骨架 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換 水通道蛋白3 乳腺癌 雌激素 雌激素受體 水通道蛋白3 乳腺癌 病理分級(jí) 淋巴轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 致謝5-7
• 中文摘要7-12
• Abstract12-17
• 縮略詞表17-20
• 緒論20-25
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 第一部分 AQP3在ER陽性乳腺癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義25-40
• 1.1 引言25-26
• 1.2 材料和方法26-34
• 1.3 結(jié)果34-37
• 1.4 討論37-38
• 1.5 結(jié)論38-39
• 1.6 參考文獻(xiàn)39-40
• 第二部分 E_2通過雌激素受體反應(yīng)原件直接調(diào)控ER陽性乳腺癌細(xì)胞中AQP40-70
• 2.1 引言40-41
• 2.2 材料和方法41-58
• 2.3 結(jié)果58-65
• 2.4 討論65-67
• 2.5 結(jié)論67-68
• 2.6 參考文獻(xiàn)68-70
• 第三部分 AQP3通過影響EMT相關(guān)分子的表達(dá)及微絲骨架的重構(gòu)來實(shí)現(xiàn)E_2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲70-92
• 3.1 引言70-71
• 3.2 材料和方法71-78
• 3.3 結(jié)果78-86
• 3.4 討論86-89
• 3.5 結(jié)論89-90
• 3.6 參考文獻(xiàn)90-92
• 全文總結(jié)92-94
• 綜述94-108
• 參考文獻(xiàn)103-108
• 作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果108-109

  本文關(guān)鍵詞：AQP3在ER陽性乳腺癌發(fā)病機(jī)制中的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：258809