本文關(guān)鍵詞：Tfh細(xì)胞及其相關(guān)因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP病人鼻息肉中的表達(dá)和意義的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Tfh細(xì)胞相關(guān)因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP鼻息肉組織中的表達(dá)和意義的研究研究目的：鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)是慢性鼻竇炎的類型之一,傳統(tǒng)上是一種TH2占主導(dǎo)伴有組織大量嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)的鼻腔鼻竇粘膜慢性炎癥性疾病。除了大量嗜酸細(xì)胞在息肉組織浸潤(rùn)外,我們還可以看到B細(xì)胞在息肉組織的大量活化、聚集以及IgA.IgE在息肉組織的過(guò)度產(chǎn)生,這說(shuō)明局部B細(xì)胞聚集及其產(chǎn)生的IgA、IgE在CRSwNP形成過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。以往研究發(fā)現(xiàn)B淋巴細(xì)胞在淋巴組織生發(fā)中心的活化、聚集以及IgA, IgE的產(chǎn)生必須有T淋巴細(xì)胞的輔助作用。過(guò)去學(xué)者一直認(rèn)為是Th2細(xì)胞在T淋巴細(xì)胞輔助B淋巴細(xì)胞的過(guò)程中發(fā)揮了主要作用。但有研究顯示缺乏Th2發(fā)育關(guān)鍵因子的老鼠仍然可以形成生發(fā)中心,仍然可以引起T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng),這就提示Th2細(xì)胞可能在B細(xì)胞聚集和免疫球蛋白的產(chǎn)生過(guò)程中發(fā)揮了有限的作用。濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh細(xì)胞)是新近發(fā)現(xiàn)的不同于Thl和Th2的CD4+T細(xì)胞(輔助性淋巴細(xì)胞,Th)的一個(gè)亞群。2011年Crotty提出,Tfh是主要負(fù)責(zé)輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的T細(xì)胞亞群,細(xì)胞在生發(fā)中心(GC)是Tfh輔助B細(xì)胞的部位,Tfh細(xì)胞在生發(fā)中心的形成,選擇高親和力B細(xì)胞分化為記憶細(xì)胞或漿細(xì)胞并分泌大量IgA, IgE等免疫球蛋白,以及維持長(zhǎng)時(shí)間的體液免疫應(yīng)答等方面都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。并提出Bcl-6是控制CD4+T細(xì)胞分化為T(mén)fh的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。Tfh細(xì)胞能夠表達(dá)各種不同類型細(xì)胞分子,如細(xì)胞因子IL-21,趨化因子受體5(CXCR5),共刺激誘導(dǎo)分子(ICOS)和程序死亡因子1(pd-1)。IL-21是Tfh細(xì)胞執(zhí)行效應(yīng)功能的主要細(xì)胞因子,其作用的主要靶細(xì)胞是B細(xì)胞,在B細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞依賴抗原的初始免疫應(yīng)答、再次免疫應(yīng)答以及體液免疫長(zhǎng)期的維持中都發(fā)揮了主要作用。近期研究發(fā)現(xiàn)Tfh細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞因子IL-21在生發(fā)中心通過(guò)調(diào)節(jié)B細(xì)胞分化成記憶性B細(xì)胞和漿細(xì)胞,分泌大量IgA、IgE等免疫球蛋白,發(fā)揮調(diào)節(jié)人類機(jī)體免疫的功能。目前研究發(fā)現(xiàn)Tfh細(xì)胞參與了許多免疫系統(tǒng)及炎癥性疾病的發(fā)生過(guò)程,如：支氣管哮喘、自身免疫性肝炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等,但Tfh細(xì)胞是否參與了CRSwNP的發(fā)病過(guò)程并不明確。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)CRSwNP病人鼻息肉組織中Tfh細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6和白細(xì)胞介素21(IL-21)的表達(dá),及其與CD20(B細(xì)胞標(biāo)志抗原)、IgA、IgE在鼻息肉中的表達(dá)情況的關(guān)系,探討Tfh細(xì)胞在CRSwNP形成過(guò)程中是否發(fā)揮了作用。研究方法：以2013年3月-2014年3月期間就診并行手術(shù)治療的22例CRSwNP病人的鼻息肉組織為實(shí)驗(yàn)組。并根據(jù)鼻息肉范圍對(duì)病人評(píng)分(分別記為1,2,3分)。1分：鼻息肉僅僅在中鼻道內(nèi)部；2分：鼻息肉超出中鼻道但還未達(dá)到下鼻甲下緣；3分：鼻息肉超過(guò)上述范圍或多發(fā)性鼻息肉。以12例因腦脊液鼻漏、眶壁骨折需手術(shù)治療病人的鼻腔、鼻竇粘膜組織為對(duì)照組。通過(guò)免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣本中Bcl-6+、CD20+(B細(xì)胞標(biāo)志性分化抗原)細(xì)胞的表達(dá)分布,觀察Tfh細(xì)胞和B細(xì)胞在鼻息肉組織中的分布情況；Real time PCR (RT-PCR)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣本中Bcl-6、IL-21在mRNA水平的表達(dá)；Western Blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣本中在蛋白水平Bcl-6的表達(dá)；ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣本中IL-21、IgA、IgE的表達(dá)。然后對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,客觀反映在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中上述各種因子的表達(dá)是否存在差異。研究結(jié)果：Bcl-6+細(xì)胞廣泛分布于鼻息肉組織的固有層中,與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量明顯增高,且3分CRSwNP亞群患者息肉組織中Bcl-6+細(xì)胞的表達(dá)遠(yuǎn)高于2分者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。不論是在mRNA水平還是在蛋白水平,Bcl-6、IL-21在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),且在mRNA水平Bcl-6的表達(dá)與IL-21表達(dá)呈正相關(guān)。CD20+細(xì)胞(B細(xì)胞)廣泛分布于鼻息肉組織的固有層中,與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組CD20+細(xì)胞、IgA、IgE表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。且在實(shí)驗(yàn)組中發(fā)現(xiàn)了6例CD20+細(xì)胞、IgA、IgE表達(dá)均明顯增高的具有生發(fā)中心樣結(jié)構(gòu)(G-C like structure)的典型病例。研究結(jié)論：Tfh細(xì)胞相關(guān)因子Bcl-6、IL-21在CRSwNP病人鼻息肉組織中表達(dá)明顯高于對(duì)照組,提示Tfh細(xì)胞可能參與了鼻息肉的形成；CD20+B細(xì)胞、IgA、IgE在實(shí)驗(yàn)組病人鼻息肉組織中表達(dá)與Tfh細(xì)胞同步增高,提示在B細(xì)胞增殖、分化和免疫球蛋白的產(chǎn)生過(guò)程中可能是Tfh細(xì)胞提供了關(guān)鍵性輔助作用。第二部分Tfh細(xì)胞在CRSwNP不同亞型鼻息肉組織中流式細(xì)胞學(xué)研究研究目的：根據(jù)以往臨床經(jīng)驗(yàn)及先前的研究發(fā)現(xiàn),CRSwNP病人病情的嚴(yán)重程度、手術(shù)預(yù)后與病人是否伴有組織嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)、病人是否同時(shí)伴有支氣管哮喘以及病人是否為復(fù)發(fā)性CRSwNP密切相關(guān),而且我們實(shí)驗(yàn)的第一部已經(jīng)證實(shí)Tfh細(xì)胞可能通過(guò)為B細(xì)胞的增殖、分化和免疫球蛋白的產(chǎn)生提供幫助的方式參與了CRSwNP的形成。在此基礎(chǔ)上,我們根據(jù)CRSwNP是否伴有組織嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)、是否同時(shí)伴有支氣管哮喘以及病人是否為復(fù)發(fā)性CRSwNP將病人分為不同亞型,并利用流式細(xì)胞術(shù)分析Tfh細(xì)胞在CRSwNP、對(duì)照組及其不同亞型鼻息肉組織中的表達(dá),觀察疾病的嚴(yán)重程度是否與Tfh細(xì)胞的表達(dá)情況具有相關(guān)性。研究方法：根據(jù)CRSwNP病人鼻息肉組織中是否具有生發(fā)中心樣結(jié)構(gòu)、是否伴有組織嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)、是否同時(shí)伴有支氣管哮喘以及是否為復(fù)發(fā)性CRSwNP,將病人分為不同的亞型,CRSwNP鼻息肉組織或正常對(duì)照鼻腔鼻竇粘膜經(jīng)勻漿器勻漿后提取上清液。由于Tfh細(xì)胞是Th細(xì)胞(CD4+T細(xì)胞)的一個(gè)亞群,Bcl-6是Tfh細(xì)胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)化因子,所有Bc16+CD4+T細(xì)胞即為T(mén)fh細(xì)胞。我們用流式細(xì)胞儀分析檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組組織提取液中的Bcl6+CD4+細(xì)胞(Tfh細(xì)胞)占全部CD4+T細(xì)胞的比例,用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。研究結(jié)果：CRSwNP病人鼻息肉組織中Tfh細(xì)胞占全部CD4+細(xì)胞的比例明顯高于對(duì)照組(P0.01)；具有生發(fā)中心樣結(jié)構(gòu)(GC+)CRSwNP病人鼻息肉組織中Tfh細(xì)胞的比例明顯高于不具有生發(fā)中心樣結(jié)構(gòu)者(P0.01)；伴有組織嗜酸性細(xì)胞(EOS+)浸潤(rùn)C(jī)RSwNP病人鼻息肉組織中Tfh細(xì)胞的比例明顯高于非嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)者(P0.01)；同時(shí)伴有支氣管哮喘CRSwNP病人(AS+)鼻息肉組織中Tfh細(xì)胞的比例明顯高于不伴有哮喘者(P0.01)；復(fù)發(fā)性CRSwNP病人鼻息肉組織中Tfh細(xì)胞的比例明顯高于初發(fā)者(P0.01)。研究結(jié)論：Tfh細(xì)胞在CRSwNP的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,此結(jié)果與第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果(Tfh細(xì)胞相關(guān)因子Bcl-6、IL-21在CRSwNP病人鼻息肉組織中表達(dá)明顯高于對(duì)照組)相一致,進(jìn)一步說(shuō)明了Tfh細(xì)胞在CRSwNP發(fā)病中發(fā)揮了重要的作用；Tfh細(xì)胞在具有生發(fā)中心樣結(jié)構(gòu)病人、伴有組織嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)病人、伴有支氣管哮喘病人以及復(fù)發(fā)性CRSwNP病人中的表達(dá)高于相應(yīng)對(duì)照組,說(shuō)明Tfh細(xì)胞在鼻息肉組織中表達(dá)情況與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。由于Tfh細(xì)胞在不同亞型CRSwNP病人中的表達(dá)存在差異,提示Tfh細(xì)胞可以作為T(mén)fh細(xì)胞病人病情嚴(yán)重程度以及手術(shù)預(yù)后的新的生物學(xué)指標(biāo),也提示我們可以針對(duì)Tfh細(xì)胞及其相關(guān)因子Bcl-6、IL-21制定特異性治療方法,從而為鼻竇炎伴鼻息肉的治療,特別是難治性鼻竇炎的治療提供一種新的治療手段。
【關(guān)鍵詞】：濾泡輔助T細(xì)胞 鼻竇炎伴鼻息肉 白介素21 Bcl-6 免疫球蛋白 濾泡輔助T細(xì)胞 鼻竇炎伴鼻息肉 Bd-6 免疫球蛋白
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R765.25
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-14
• 符號(hào)說(shuō)明14-16
• 前言16-26
• 參考文獻(xiàn)23-26
• 第一部分：Tfh細(xì)胞相關(guān)因子Bcl-6和IL-21在鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP)病人鼻息肉組織中的表達(dá)和意義的研究26-51
• 研究背景26-29
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法29-40
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-41
• 討論41-44
• 研究結(jié)論44-45
• 附圖附表45-51
• 第二部分：Tfh細(xì)胞在CRSwNP不同亞型鼻息肉組織中流式細(xì)胞學(xué)研究51-63
• 研究背景51-53
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法53-55
• 結(jié)果55-56
• 討論56-58
• 結(jié)論58-59
• 附圖附表59-63
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章及科研成果66-67
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表67-68
• 英文附文168-85
• 英文附文285-97
• 英文附文397-106

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 劉良忠;王靜;雷宇;安選;胡鵬;胡懷東;張大志;任紅;;循環(huán)濾泡型輔助性T淋巴細(xì)胞及IL-21在自身免疫性肝炎中的初步研究[J];免疫學(xué)雜志;2010年12期

2 龔芳;蘇強(qiáng);申衛(wèi)紅;潘宇紅;黃璇;;支氣管哮喘患者外周血CD4~+CXCR5~+濾泡輔助性T細(xì)胞樣細(xì)胞的變化及其意義[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年01期

3 洪蘇玲,黃江菊,楊玉成,康厚墉,王yN琴,孫榮,錢(qián)迪,董小琴;慢性鼻竇炎鼻息肉合并支氣管哮喘患者鼻竇內(nèi)鏡術(shù)后對(duì)支氣管哮喘療效的影響[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2004年03期

  本文關(guān)鍵詞：Tfh細(xì)胞及其相關(guān)因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP病人鼻息肉中的表達(dá)和意義的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：254151