本文關(guān)鍵詞：SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景子宮內(nèi)膜癌(Endometrial carcinoma, EC)是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于宮頸癌,但是在一些發(fā)達(dá)國(guó)家及我國(guó)北京、上海等發(fā)達(dá)地區(qū)其發(fā)病率達(dá)到甚至超過(guò)了宮頸癌,而且有逐年上升并且年輕化的趨勢(shì)。由于子宮內(nèi)膜癌的臨床癥狀明顯,便于及時(shí)發(fā)現(xiàn),并且就診時(shí)多處于疾病的早期階段,加之高分化子宮內(nèi)膜樣腺癌居多,其惡性程度低,預(yù)后較好,早期患者5年生存率達(dá)90%左右。然而由于取材的局限性或誤診為月經(jīng)不調(diào),約15%患者就診時(shí)已處于疾病的晚期階段,預(yù)后較差,死亡率高達(dá)60%。子宮內(nèi)膜癌的治療方法除了常規(guī)手術(shù)和放化療外,缺少新的治療手段,患者生存率在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)無(wú)明顯改善。近年來(lái),腫瘤的靶向治療成為腫瘤研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn),但對(duì)于子宮內(nèi)膜癌尚無(wú)有效的靶向治療的方向。因此,探究新的特異性強(qiáng)、敏感性高的腫瘤靶分子具有重要的臨床意義。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent Information Regulatorl, SIRT1)是一種依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide, NAD+)的去乙�；�,它可使多種組蛋白和非組蛋白的賴氨酸殘基發(fā)生去乙酰化。它的去乙酰化活性能使其可以與多種重要的轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子作用,調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、染色質(zhì)的穩(wěn)定性及靶基因的活性,從而參與機(jī)體的多種生物學(xué)功能,如能量代謝、應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞衰老等。因此,SIRT1在糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病及代謝性疾病等多種疾病中發(fā)揮著重要的作用。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)SIRT1對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展也有一定的影響,其在腫瘤中作為抑癌基因或促癌基因,是由不同組織中的SIRT1上下游調(diào)節(jié)因子分布不同決定的。SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)研究。同時(shí),另有研究表明,SIRT1可調(diào)節(jié)FoxO1的表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)脂類代謝等細(xì)胞生理過(guò)程；FoxO1活化后可調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá),其中包括固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白1(Sterol Regulatory Element Binding Protein 1, SREBP1),其通過(guò)降低Spl和SREBP-1c的轉(zhuǎn)錄活性、干擾轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物在SREBP-1c啟動(dòng)子區(qū)的組裝進(jìn)而抑制SREBP-1轉(zhuǎn)錄。然而在子宮內(nèi)膜癌中SIRT1和SREBP1的相關(guān)性未見(jiàn)研究。SREBP1是一類固定于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜的具有堿性螺旋-環(huán)-螺旋-亮氨酸拉鏈的結(jié)構(gòu)膜連接蛋白的成員,它能調(diào)節(jié)脂肪酸合成中大多數(shù)酶的活性,例如乙酰輔酶A羧化酶、脂肪酸合成酶、硬脂酰基輔酶A脫氫酶等。在腫瘤細(xì)胞中,脂肪酸的合成是增加的。許多研究表明,SREBP1在多種腫瘤中高表達(dá)。我們課題組在以前的研究中表明,SREBP1在子宮內(nèi)膜癌和卵巢中均為高表達(dá),SREBP1的表達(dá)與FIGO分期和組織分化程度密切相關(guān),同時(shí)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),沉默SREBP1的表達(dá)可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖。另有研究表明,抑制SREBP1或其下游的靶基因,能誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入凋亡程序。因此SREBP1在腫瘤中可能作為促癌基因發(fā)揮作用。本研究探討SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)情況,分析SIRT1的表達(dá)與患者的年齡、疾病分期、腫瘤分化程度等臨床病理特征的相關(guān)性,及與患者生存率的相關(guān)性,通過(guò)檢測(cè)SREBP1的表達(dá)情況,研究SIRT1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響和作用機(jī)制,為子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷、預(yù)后評(píng)價(jià)和靶向治療提供新的理論依據(jù)。第一部分SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的相關(guān)性研究目的：檢測(cè)子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生和正常子宮內(nèi)膜組織中的SIRT1蛋白、基因水平的表達(dá)情況,并分析其與患者年齡、疾病分期、腫瘤分化程度等臨床病理特征的相關(guān)性,及與患者生存率的相關(guān)性,初步探討S1RT1在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。方法：本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況,并通過(guò)隨訪研究,應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析SIRT1的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性及與患者生存率的相關(guān)性；同時(shí)采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR及Western-blot技術(shù)檢測(cè)SIRT1在60例新鮮子宮內(nèi)膜樣腺癌及其癌旁正常子宮內(nèi)膜組織中的基因、蛋白質(zhì)的定量表達(dá)情況。結(jié)果：1.在子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織中SIRT1均在細(xì)胞核中表達(dá)。在三者中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為81.5%、54.2%、47.1%。SIRT1的陽(yáng)性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜樣腺癌組中明顯高于子宮內(nèi)膜不典型增生組及正常子宮內(nèi)膜組,P0.05,差異有顯著性,而子宮內(nèi)膜不典型增生組與正常子宮內(nèi)膜組相比較,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.SIRT1的陽(yáng)性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜樣腺癌中低分化組明顯高于高分化組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在Ⅲ、Ⅳ期組明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組,P0.05,差異有顯著性；不同年齡組之間相比較,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析,結(jié)果顯示：SIRT1陽(yáng)性表達(dá)的患者總體生存時(shí)間34.68±3.80個(gè)月,SIRT1陰性表達(dá)的患者總體生存時(shí)間44.93+3.31個(gè)月,總體生存時(shí)間SIRT1陽(yáng)性表達(dá)的患者比SIRT1陰性表達(dá)的患者明顯要短,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.SIRT1的基因表達(dá)水平在新鮮子宮內(nèi)膜樣腺癌組織組明顯高于其癌旁正常子宮內(nèi)膜組織組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；SIRT1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平在新鮮子宮內(nèi)膜樣腺癌組織組中亦明顯高于其癌旁正常子宮內(nèi)膜組織組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：1.與子宮內(nèi)膜不典型增生及正常子宮內(nèi)膜組織相比較,SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中高表達(dá)。2.子宮內(nèi)膜樣腺癌中SIRT1的表達(dá)與臨床病理分期、組織分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),而與年齡無(wú)關(guān)。3.子宮內(nèi)膜樣腺癌中SIRT1的陽(yáng)性表達(dá),提示較低的患者生存率,預(yù)示與不良預(yù)后密切相關(guān)。4.SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中作為促癌基因發(fā)揮作用,有待于成為子宮內(nèi)膜樣腺癌的新的腫瘤標(biāo)志物,用于腫瘤診斷及預(yù)后判定。3.子宮內(nèi)膜樣腺癌中SIRT1的陽(yáng)性表達(dá),提示較低的患者生存率,預(yù)示與不良預(yù)后密切相關(guān)。4.SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中作為促癌基因發(fā)揮作用,有待于成為子宮內(nèi)膜樣腺癌的新的腫瘤標(biāo)志物,用于腫瘤診斷及預(yù)后判定。第二部分SIRT1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和作用機(jī)制研究目的：檢測(cè)SIRT1在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikwa、ECC、RL95-2、KLE中的表達(dá)情況,應(yīng)用基因干擾技術(shù)沉默SIRT1的表達(dá),探討SIRT1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移及侵襲的影響。并檢測(cè)SIRT1沉默前后SREBP1表達(dá)水平的變化,探討SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中的可能的作用機(jī)制。方法：應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)SIRT1在4種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。構(gòu)建SIRT1的基因干擾系列,應(yīng)用SIRT1 SiRNA沉默SIRT1的表達(dá),利用慢病毒載體導(dǎo)入RL95-2細(xì)胞,應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率；研究SIRT1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響；并應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)SIRT1沉默前后SREBP1表達(dá)量的變化。結(jié)果：1.SIRT1在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikwa、ECC、RL95-2、KLE中表達(dá)的灰度值分別為4834.87±105.68、5022.51±89.46、6769.22±121.07、5822.68±178.64,可見(jiàn)SIRT1在RL95-2細(xì)胞系中的表達(dá)水平較高。2.應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)干擾組與空質(zhì)粒載體組SIRT1表達(dá)的灰度值分別為1103.53±80.41、6157.70±212.69,轉(zhuǎn)導(dǎo)效率達(dá)81.4%以上。3.自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示：細(xì)胞增殖速度干擾組明顯低于空質(zhì)粒載體組及空白對(duì)照組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而空質(zhì)粒載體組與空白對(duì)照組相比較,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：直徑10mm細(xì)胞克隆形成的數(shù)目,干擾組明顯少于空質(zhì)粒載體組及空白對(duì)照組,P0.05,差異有顯著性,而空質(zhì)粒載體組與空白對(duì)照組相比較,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：細(xì)胞遷移數(shù)目,干擾組明顯少于空質(zhì)粒載體組及空白對(duì)照組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而空質(zhì)粒載體組及空白對(duì)照組相比較,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；細(xì)胞侵襲數(shù)目,干擾組亦明顯少于空質(zhì)粒載體組及空白對(duì)照組,P0.05,亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而空質(zhì)粒載體組及空白對(duì)照組相比較,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。6. Western-blot技術(shù)檢測(cè)干擾組與空白對(duì)照組SREBP1的表達(dá)的灰度值分別為4815.68±101.28、2312.17±89.15,SREBP1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平在干擾組中明顯低于空質(zhì)粒載體組,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：1.進(jìn)一步證實(shí)SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與組織分化程度密切相關(guān),并且篩選出干擾細(xì)胞系。2.SIRT1在子宮內(nèi)膜癌中可能作為促癌基因發(fā)揮作用,可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移和侵襲。3.SIRT1可能作為子宮內(nèi)膜癌基因治療的靶位點(diǎn),為子宮內(nèi)膜癌的治療提供新的思路。4.在子宮內(nèi)膜癌中,SIRT1可以影響SREBP1的表達(dá),推測(cè)SIRT1可能通過(guò)影響脂代謝來(lái)發(fā)揮其腫瘤促進(jìn)作用,有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜樣腺癌 沉默信息調(diào)節(jié)因子1 免疫組織化學(xué)技術(shù) 實(shí)時(shí)熒技術(shù)光定量RT-PCR技術(shù) Western-blot技術(shù) 子宮內(nèi)膜癌 SIRT1 基因干擾技術(shù) 細(xì)胞生長(zhǎng) 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移 細(xì)胞侵襲 SREBP1 脂代謝
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 符號(hào)說(shuō)明17-19
• 第一部分 SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的相關(guān)性研究19-47
• 前言19-21
• 材料與方法21-32
• 結(jié)果32-34
• 討論34-39
• 結(jié)論39-40
• 第一部分相關(guān)圖表40-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 第二部分 SIRT1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制研究47-73
• 前言47-49
• 材料與方法49-56
• 結(jié)果56-58
• 討論58-63
• 結(jié)論63-64
• 第二部分相關(guān)圖表64-69
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 致謝73-74
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄74-75
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表75-76
• 英文論文76-101

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 鄭素平;;RNA干擾在腫瘤治療方面的研究進(jìn)展[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué).醫(yī)學(xué)版);2011年02期

2 邵榮光;;小干擾RNA介導(dǎo)的多靶點(diǎn)腫瘤治療[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2009年03期

  本文關(guān)鍵詞：SIRT1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：253080