【摘要】：背景:腦出血患者神經(jīng)系統(tǒng)逐步惡化的同時(shí)伴有大量神經(jīng)元的減少和血管的損害。血管再生可以預(yù)防腦出血后繼發(fā)性神經(jīng)元損傷,對(duì)腦出血患者而言,血管再生將是一個(gè)有效的目標(biāo)靶點(diǎn)。C1q/腫瘤壞死因子(TNF)相關(guān)蛋白-3(C1q/tumor necrosis factor(TNF)-related protein 3,CTRP 3)是最近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的脂肪因子,與脂聯(lián)素是同源異構(gòu)物的關(guān)系。CTRP3具有很多的生物學(xué)功能,比如促進(jìn)血管新生、抗炎、抗凋亡、抗氧化應(yīng)激反應(yīng)等。小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明,CTRP3可以促進(jìn)心肌梗死周圍缺血區(qū)血管新生,但是其在腦出血中是否也能夠起到促進(jìn)血腫周圍缺血區(qū)的新生血管的形成,目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道,具體的作用機(jī)制也不甚清楚。目的:本課題通過對(duì)腦出血?jiǎng)游矬w內(nèi)模型的復(fù)制,(1)探討CTRP3在腦出血后繼發(fā)性損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用。(2)探討CTRP3是否可以促進(jìn)腦出血后血腫周圍血管新生,并進(jìn)一步探討其調(diào)控機(jī)制。方法:1、建立穩(wěn)定可靠的大鼠腦出血(Intracerebral Hemorrhage,ICH)模型:從大鼠股動(dòng)脈抽取50μL全血注入同側(cè)大腦紋狀體,通過一個(gè)26 G直徑的針插入到紋狀體,深度為顱骨表面5.8 mm以下,手動(dòng)注血10 min以上,建立ICH模型。2、觀察外源性重組CTRP3(recombinant CTRP3,r CTRP3)蛋白對(duì)腦出血繼發(fā)性損傷的神經(jīng)保護(hù)作用:(1)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將成年SD大鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)(sham)組、腦出血模型(ICH)組、ICH+試劑對(duì)照(ICH+vehicle)組和ICH+重組CTRP3蛋白(ICH+r CTRP3)組。(2)腦出血后30分鐘后r CTRP3側(cè)腦室注射(80μg/kg),然后每周三次直到動(dòng)物被處死。(3)腦出血7 d后對(duì)所有大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分(通過改進(jìn)的Garcia試驗(yàn),平衡木試驗(yàn)和肌力掛線試驗(yàn)來評(píng)估);檢測(cè)血腦屏障完整性和腦水腫。(4)CD31免疫組化檢測(cè)血管標(biāo)記物含量。(5)采用western blot觀察r CTRP3對(duì)CTRP3,AMPK、HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)的影響。(6)采用q RT-PCR分析CTRP3、HIF-1α、VEGF m RNA表達(dá)的改變情況。3、觀察慢病毒過表達(dá)CTRP3(Lentivirus overexpression of CTRP3,Lenti-CTRP3)對(duì)腦出血繼發(fā)性損傷的神經(jīng)保護(hù)作用:(1)實(shí)驗(yàn)將成年SD大鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)(sham)組、腦出血模型(ICH)組、ICH+陰性病毒對(duì)照(ICH+Lenti.Null)組和ICH+慢病毒過表達(dá)CTRP3蛋白(ICH+Lenti-CTRP3)組。(2)慢病毒通過側(cè)腦室注射14 d后再建立腦出血模型。(3)腦出血7 d后對(duì)所有大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分(通過改進(jìn)的Garcia試驗(yàn),平衡木試驗(yàn)和肌力掛線試驗(yàn)來評(píng)估);檢測(cè)血腦屏障完整性和腦水腫。(4)CD31免疫組化檢測(cè)血管標(biāo)記物含量。(5)采用western blot觀察Lenti-CTRP3對(duì)CTRP3、AMPK、HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)的影響。(6)采用q RT-PCR分析CTRP3、HIF-1α、VEGF m RNA表達(dá)的改變情況。4、探討AMPK/HIF-1α/VEGF信號(hào)通路在CTRP3抵抗腦出血性損傷的作用:進(jìn)一步分別給予AMPK和VEGF所對(duì)應(yīng)的抑制劑Compound C和CBO-P11進(jìn)行干預(yù),檢測(cè)該通路對(duì)CTRP3抵抗腦出血性損傷的影響。結(jié)果:1、外源性重組CTRP3蛋白或慢病毒CTRP3過表達(dá),對(duì)腦出血繼發(fā)性損傷的神經(jīng)保護(hù)作用具有相同趨勢(shì),CTRP3治療后可明顯減輕腦水腫的程度,保護(hù)血腦屏障,改善神經(jīng)功能,并促進(jìn)血管生成,與ICH組相比存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。2、CTRP3可以增加AMP活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化以及缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1α)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá),p AMPK/AMPK比值、HIF-1α、VEGF的表達(dá)均高于ICH組,并且與ICH模型組相比存在顯著性差異(P0.01)。3、用AMPK抑制劑Compound C阻斷AMPK的活化后,p AMPK/AMPK比值、HIF-1α和VEGF表達(dá)均低于r CTRP3單純處理組,而用VEGF抑制劑CBO-P11只能降低VEGF表達(dá)。AMPK或VEGF抑制劑可以完全消除CTRP3誘導(dǎo)毛細(xì)血管的形成。然而,AMPK抑制劑使r CTRP3的神經(jīng)保護(hù)作用完全消除,VEGF抑制劑只是部分消除r CTRP3的神經(jīng)保護(hù)作用。這些結(jié)果表明,雖然CTRP3的神經(jīng)保護(hù)作用主要是通過AMPK/HIF-1α/VEGF通路誘導(dǎo)血管生成的機(jī)制介導(dǎo)的,可能還有其它機(jī)制也參與了CTRP3在大鼠腦出血后繼發(fā)性損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)論:CTRP3能減少神經(jīng)功能缺損、上調(diào)促血管生成因子的表達(dá)、誘導(dǎo)血管生成、減輕腦水腫、保護(hù)血腦屏障,從而抵抗腦出血繼發(fā)性損傷。CTRP3可能通過AMPK/HIF-1α/VEGF信號(hào)通路發(fā)揮其促血管生成作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.34

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本文編號(hào)：2460840