【摘要】：目的研究分析Ⅱ型心腎綜合征患者相關(guān)臨床特征、主要中醫(yī)證候分布及不同中醫(yī)證候之間臨床特征的差異情況;檢測Ⅱ型心腎綜合征及不同中醫(yī)證候患者circRNA表達譜差異;檢測Ⅱ型心腎綜合征不同中醫(yī)證候患者的關(guān)鍵調(diào)節(jié)circRNA,并對其進行RT-PCR驗證,為Ⅱ型心腎綜合征患者中醫(yī)辨證分型提供客觀依據(jù),為Ⅱ型心腎綜合征診斷提供生物學基礎(chǔ)。方法1.1 Ⅱ型心腎綜合征患者臨床資料收集選擇2009-2016年在中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科住院的Ⅱ型心腎綜合征患者267例,運用Epidata3.1數(shù)據(jù)庫,建立Ⅱ型心腎綜合征患者的臨床資料數(shù)據(jù)庫,并收集健康人241人,分析比較Ⅱ型心腎綜合征患者與健康人之間的相關(guān)臨床特征。1.2不同GFR水平的Ⅱ型心腎綜合征患者臨床資料收集選擇2009-2016年在中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院心內(nèi)科住院的Ⅱ型心腎綜合征患者267例,根據(jù)eGFR水平,分成三組(CKD3-5期),分析比較Ⅱ型心腎綜合征患者不同分期的相關(guān)臨床特征。1.3 Ⅱ型心腎綜合征患者中醫(yī)證候?qū)W分析對267例Ⅱ型心腎綜合征患者的中醫(yī)癥狀進行歸納分析,將出現(xiàn)頻率10%癥狀剔除,篩選得到40個變量,運用聚類和因子分析等方法,得到Ⅱ型心腎綜合征不同中醫(yī)證候,并根據(jù)所得不同中醫(yī)證候進行相關(guān)臨床特征的比較分析。1.4 Ⅱ型心腎綜合征患者外周血circRNA表達譜檢測和生物信息學分析選取20例Ⅱ型心腎綜合征患者和5例健康人,運用CapitalBio Technology Human CircRNA Array v2芯片,篩選Ⅱ型心腎綜合征患者外周血中circRNA表達譜,利用miRanda軟件預測與其結(jié)合的miRNA,進而預測其轉(zhuǎn)錄本mRNA,運用生物信息學方法對Ⅱ型心腎綜合征患者差異表達mRNA進行功能分析。1.5 Ⅱ型心腎綜合征不同中醫(yī)證候患者外周血circRNA表達譜檢測和生物信息學分析選�、蛐托哪I綜合征不同中醫(yī)證候患者20例,每個證候5例,同時選取健康人 5 例,運用 CapitalBio Technology Human CircRNA Array v2 芯片,篩選不同中醫(yī)證候以及不同中醫(yī)證候與健康人的差異表達circRNA,利用miRanda軟件預測與其結(jié)合的miRNA,進而預測其轉(zhuǎn)錄本mRNA,運用生物信息學方法對上述表達差異mRNA進行功能探索。1.6 Ⅱ型心腎綜合征患者中醫(yī)證候?qū)WcircRNA驗證分別對15例Ⅱ型心腎綜合征患者和12例健康人、8例Ⅱ型心腎綜合征心腎不交、血瘀水停證和7例Ⅱ型心腎綜合征非心腎不交、血瘀水停證患者,應用RT-PCR技術(shù)對Ⅱ型心腎綜合征和Ⅱ型心腎綜合征心腎不交、血瘀水停證患者的特異circRNA進行驗證,分別得到Ⅱ型心腎綜合征和Ⅱ型心腎綜合征心腎不交、血瘀水停證的分子生物學基礎(chǔ)。結(jié)果1.1 Ⅱ型心腎綜合征患者相關(guān)臨床特征結(jié)果獨立樣本t檢驗結(jié)果顯示,CRS組紅細胞參數(shù)、白細胞參數(shù)、血小板參數(shù)、血清酶學、肝腎功能、血脂、血漿蛋白及HCY方面均存在一定差異,Spearman相關(guān)性研究顯示,紅細胞參數(shù)、白細胞參數(shù)、血小板參數(shù)、血清酶學、肝腎功能、血脂、血漿蛋白與Ⅱ型心腎綜合征的發(fā)生具有一定的相關(guān)性。二分類Logistic逐步回歸分析,結(jié)果顯示,年齡、血清HCY水平是Ⅱ型心腎綜合征發(fā)病的重要因素。1.2不同GFR水平的Ⅱ型心腎綜合征患者相關(guān)臨床特征結(jié)果采用單因素方差分析結(jié)果顯示,CKD3-5組患者在紅細胞參數(shù)、血清酶學、血脂、腎功能、血漿蛋白、同型半胱氨酸、NT-proBNP、尿蛋白及心臟超聲方面均存在一定差異。1.3 Ⅱ型心腎綜合征患者中醫(yī)證候?qū)W特征結(jié)果通過聚類和因子分析,得到以下4個證候:脾腎陽虛、氣虛血瘀證;心腎陽虛、陽損及陰證;心腎不交、血瘀水停證;陰陽兩虛、血瘀痰濁證。1.4 Ⅱ型心腎綜合征患者circRNA表達譜及生物信息學結(jié)果Ⅱ型心腎綜合征患者與健康人比較,circRNA芯片結(jié)果顯示,差異表達上調(diào)circRNA共1989個,下調(diào)circRNA共895個;差異表達的mRNA經(jīng)GO分析,細胞組分方面,表達差異的mRNA顯著富集于cell periphery、plasma membrane、plasma membrane part、integral component of plasma membrane、intrinsic component of plasma membrane等98條通路;分子功能方面,表達差異的mRNA顯著富集于 receptor activity、molecular transducer activity、signaling receptor activity、transmembrane signaling receptor activity、signal transducer activity 等 143 條通路;生物進程方面,表達差異的mRNA顯著富集于signaling、response to chemical、single organism signaling、cell communication、cell surface receptor signaling pathway等595條通路。KEGG分析:Ⅱ型心腎綜合征患者與健康對照組差異表達 mRNA 富集于 Hematopoietic cell lineage、Cell adhesion molecules(CAMs)等2條通路。1.5 Ⅱ型心腎綜合征患者中醫(yī)證候?qū)WcircRNA表達譜及生物信息學分析脾腎陽虛、氣虛血瘀證與健康人比較,差異表達上調(diào)circRNA共2614個,下調(diào)circRNA共516個;心腎陽虛、陽損及陰證與健康人比較,差異表達上調(diào)circRNA共847個,下調(diào)circRNA共1947個;心腎不交、血瘀水停證與健康人比較,差異表達上調(diào)circRNA共3272個,下調(diào)circRNA共2381個;陰陽兩虛、血瘀痰濁證與健康人比較差異表達上調(diào)circRNA共3262個,下調(diào)circRNA共1590個;脾腎陽虛、氣虛血瘀證與心腎陽虛、陽損及陰證比較,差異表達上調(diào)circRNA共1760個,下調(diào)circRNA共80個;脾腎陽虛、氣虛血瘀證與心腎不交、血瘀水停證比較,差異表達上調(diào)circRNA共329個,下調(diào)circRNA共103個;心腎不交、血瘀水停證與心腎陽虛、陽損及陰證比較,差異表達上調(diào)circRNA共620個,下調(diào)circRNA共139個;陰陽兩虛、血瘀痰濁證與脾腎陽虛、氣虛血瘀證比較,差異表達上調(diào)circRNA共120個,下調(diào)circRNA共75個;陰陽兩虛、血瘀痰濁證與心腎陽虛、陽損及陰證比較,差異表達上調(diào)circRNA共1887個,下調(diào)circRNA共224個;陰陽兩虛、血瘀痰濁證與心腎不交、血瘀水停證比較,差異表達上調(diào)circRNA共202個,下調(diào)circRNA共27個。各不同中醫(yī)證候與健康組比較,差異表達mRNA富集于多條生物通路,如locomotion、single organism signaling、signaling、cell communication、anatomical structure morphogenesis等通路;各中醫(yī)證候之間比較,差異表達mRNA富集于多條生物通路,如 DNA repair、embryo development ending in birth or egg hatching、chordate embryonic development、cellular component organization、single-organism cellular process 等通路。1.6 Ⅱ型心腎綜合征患者不同中醫(yī)證候外周血circRNA實時定量PCR結(jié)果CRS組與Health組比較,hsa_cir_0001763的ΔCT明顯低于對照組,hsa_circ_0079598的ΔCT明顯高于對照組,差異具有極顯著性統(tǒng)計學意義(P0.01);心腎不交、血瘀水停證組(XS組)與非心腎不交、血瘀水停證組(FXS組)比較,hsa_circ_0025640的△CT明顯低于對照組,差異具有顯著性統(tǒng)計學意義(P0.05),上述結(jié)果均與circRNA芯片結(jié)果一致。ROC曲線結(jié)果顯示,hsa_cir_0001763曲線下面積(AUC)為0.933,敏感性為86.67%,特異性為83.33%,預測Ⅱ型心腎綜合征的正確率為85.18%,hsa_cir c_0079598曲線下面積(AUC)為0.911,敏感性為73.33%,特異性為91.67%,預測Ⅱ型心腎綜合征的正確率為 81.48%,hsa_circ_0025640 曲線下面積(AUC)為 0.875,敏感性為 87.50%,特異性為71.43%,預測Ⅱ型心腎綜合征心腎不交、血瘀水停證的正確率為80.00%,提示 hsa_cir_0001763 水平越高,hsa_circ_0025640 水平越低,則患 Ⅱ 型心腎綜合征的可能性越大,hsa_circ_0025640水平越高,則患Ⅱ型心腎綜合征心腎不交、血瘀水停證的可能性越大。結(jié)論1.Ⅱ型心腎綜合征患者隨著腎功能損傷的不斷加重,其造血系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等系統(tǒng)功能障礙加重,病情惡化。2.Ⅱ型心腎綜合征患者臨床表現(xiàn)為本虛標實,虛實夾雜。其常見證候為脾腎陽虛、氣虛血瘀證,心腎不交、血瘀水停證,心腎陽虛、陽損及陰證及陰陽兩虛、血瘀痰阻證。3.Ⅱ型心腎綜合征患者發(fā)病機制可能與Hematopoietic cell lineage通路、Toll樣受體信號通路、MAPK信號通路、Wnt信號通路等信號通路有關(guān)。4.Ⅱ型心腎綜合征患者脾腎陽虛、氣虛血瘀證關(guān)鍵上調(diào)circRNA為hsa-circRNA14362-14、hsa_circ_0127021、hsa_circ_0117337、hsa_circ_0060535、hsa_circ_0138971,關(guān)鍵下調(diào) circRNA 為 hsa-circRNA9066-1、hsa_circ_0136708;心腎陽虛、陽損及陰證關(guān)鍵下調(diào)circRNA為hsa_circ_0103678、hsa-circRNA6809-9、hsa-circRNAl 1277-1、hsa_circ_0122389;心腎不交、血瘀水停證關(guān)鍵上調(diào) circRNA 為hsa_circ_0012956、hsa_circ_0100172、hsa_circ_0025640、hsa_circ_0025641、hsa_circ_0117312、has_circ_0133589,關(guān)鍵下調(diào) circRNA 為has_circ_0103164、hsa_circ_0098592、hsa-circRNA11756-1;陰陽兩虛、血瘀痰濁證關(guān)鍵上調(diào) circRNA 為 hsa_circ_0113754、hsa-circRNA7413-12,關(guān)鍵下調(diào)circRNA 為 hsa circ 0106982、hsa circ 0000777、hsa-circRNA3410-17。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R259

【參考文獻】

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本文編號：2456855