【摘要】：微血管損傷是急性心肌梗死無(wú)再流、心梗后心律失常及心梗后慢性心力衰竭的共性病理改變。脈絡(luò)學(xué)說(shuō)提出營(yíng)衛(wèi)"由絡(luò)以通、交會(huì)生化"理論,認(rèn)為其異常是以?xún)?nèi)皮細(xì)胞為核心和啟動(dòng)因素、神經(jīng)體液調(diào)節(jié)與血液成分共同參與、臟腑組織細(xì)胞功能結(jié)構(gòu)損傷的多維時(shí)空動(dòng)態(tài)演變的復(fù)雜病理過(guò)程,并提出從"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)角度對(duì)上述疾病進(jìn)行干預(yù)的治療策略,且以"絡(luò)以通為用"為治療總則組擬系列通絡(luò)方藥通心絡(luò)膠囊、參松養(yǎng)心膠囊、芪藶強(qiáng)心膠囊,在該類(lèi)疾病臨床治療中取得顯著療效。目的:本研究理論部分旨在探討脈絡(luò)學(xué)說(shuō)營(yíng)衛(wèi)"由絡(luò)以通、交會(huì)生化"理論對(duì)急性心肌梗死無(wú)再流、心梗后心律失常及心梗后慢性心力衰竭的防治指導(dǎo)價(jià)值,提出保護(hù)"孫絡(luò)-微血管"是通絡(luò)治療上述疾病的共性作用機(jī)制;聚焦微血管主要結(jié)構(gòu)—內(nèi)皮細(xì)胞,探討通絡(luò)方藥的干預(yù)作用,通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究揭示通絡(luò)方藥通心絡(luò)膠囊、參松養(yǎng)心膠囊、芪藶強(qiáng)心膠囊是否具有共性的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用及可能機(jī)制,并探討通絡(luò)復(fù)方共用之君藥人參是否是三個(gè)通絡(luò)復(fù)方發(fā)揮內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的共性藥物,同時(shí)對(duì)代表性通絡(luò)方藥的內(nèi)皮屏障保護(hù)作用及其機(jī)制做進(jìn)一步研究。通過(guò)理論探討與實(shí)驗(yàn)研究為豐富發(fā)展脈絡(luò)學(xué)說(shuō)指導(dǎo)相關(guān)心血管疾病防治提供理論及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。方法:1.理論研究:本研究系統(tǒng)梳理脈絡(luò)及營(yíng)衛(wèi)理論文獻(xiàn),提出脈絡(luò)學(xué)說(shuō)營(yíng)衛(wèi)"由絡(luò)以通、交會(huì)生化"概念,并將該理論與急性心肌梗死無(wú)再流、心梗后心律失常及心梗后慢性心力衰竭的通絡(luò)治療相結(jié)合,提出"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)是上述疾病的共性干預(yù)策略,并匯總整理通絡(luò)方藥實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展,提出內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)可能是通絡(luò)方藥共同發(fā)揮"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)作用的核心機(jī)制。2.實(shí)驗(yàn)研究:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,利用氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)構(gòu)建損傷模型。①采用MTS方法及活細(xì)胞成像技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞生存狀態(tài)及生存活性變化,②利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞eNOSmRNA、ET-1mRNA表達(dá)水平。(③WTS-8法檢測(cè)各組細(xì)胞總SOD表達(dá)水平。④利用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞ROS表達(dá)水平。⑤酶聯(lián)免疫法檢測(cè)各組IL-6、sICAM分泌水平。⑥利用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。⑦利用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞CytC、Bax、Bcl-2、Fas、FasL、Caspase3、Caspase8蛋白表達(dá)水平。⑧利用Transwell小室檢測(cè)各組單層HUVEC細(xì)胞通透性變化。⑨利用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組ZO-1、Occludin、Claudin1、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平。⑩利用激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:1.理論研究:(①提出脈絡(luò)學(xué)說(shuō)營(yíng)衛(wèi)"由絡(luò)以通、交會(huì)生化"理論,為血管病變防治提供新策略。(②通絡(luò)方藥以"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)為共同作用途徑,而對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)可能是通絡(luò)方藥發(fā)揮"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)作用的共性基礎(chǔ)。(③以?xún)?nèi)皮細(xì)胞為核心的營(yíng)衛(wèi)"由絡(luò)以通、交會(huì)生化"理論研究是通絡(luò)方藥"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)研究的重要切入點(diǎn)。2.實(shí)驗(yàn)研究:①通絡(luò)方藥通心絡(luò)膠囊(TXL)、參松養(yǎng)心膠囊(SS)、芪藶強(qiáng)心膠囊(QLQX)、人參總皂苷(ZZG)、人參皂苷Rb1(Rb1)、水蛭(SZ)在一定劑量范圍內(nèi)無(wú)藥物毒性,TXL、SS能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖。②各通絡(luò)方藥能夠明顯改善Ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞生存活性下降(P0.05)。③TXL、Rb1、SS、SZ均能夠升高eNOS mRNA表達(dá)水平(P0.05,P0.01),QLQX、ZZG 無(wú)改善作用;TXL、SS、QLQX、ZZG、Rb1、SZ均能夠降低 ET-1mRNA 表達(dá)水平(P0.05,P0.01)。④IXL、QLQX、ZZG、Rb1 均能夠降低 IL-6 表達(dá)水平(P0.05,P0.01),SS、SZ無(wú)明顯作用;TXL、QLQX、ZZG、Rb1、SZ均能夠降低sICAM表達(dá)水平(P0.01),SS無(wú)明顯作用。⑤TXL、QLQX、SZ均能夠升高SOD表達(dá)水平(P0.05),SS、ZZG、Rb1無(wú)改善作用;TXL、SS、QLQX、Rb1均能夠降低細(xì)胞ROS表達(dá)水平(P0.05,P0.01),SZ無(wú)明顯作用。⑥TXL、SS、ZZG、Rb1、SZ均能夠降低Ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(P0.05,P0.01),且TXL優(yōu)于SZ(P0.05),QLQX無(wú)明顯作用。⑦TXL、SS、ZZG、Rb1 均能夠升高 Bcl-2/Bax 比值(P0.05,P0.01),QLQX、SZ對(duì)Bcl-2/Bax比值無(wú)改善作用;TXL、ZZG、Rb1均能夠降低Cyt C的表達(dá)(P0.05),QLQX、SS、SZ對(duì)CytC表達(dá)無(wú)明顯作用。⑧TXL、SS、ZZG、Rb1均能夠明顯降低Fas的表達(dá)(P0.01);TXL、SS、ZZG、Rb1、SZ 均能夠降低 FasL 表達(dá)(P0.05,P0.01);TXL、ZZG、Rb1 均能夠降低 Caspase8 表達(dá)(P0.05,P0.01);TXL、SS、ZZG、Rb1、SZ均能夠降低Caspase3表達(dá)(P0.05,P0.01),QLQX對(duì)多個(gè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)無(wú)明顯作用。⑨TXL、QLQX、SZ、ZZG組能夠改善Ox-LDL誘導(dǎo)的單層內(nèi)皮細(xì)胞間高通透性(P0.05,P0.01)。⑩TXL能夠升高緊密連接蛋白ZO-1、Occludin表達(dá)(P0.05),但對(duì)Claudin1表達(dá)無(wú)明顯作用;SS能夠降低Ox-LDL誘導(dǎo)的Claudin1高表達(dá)(P0.01),但對(duì)ZO-1、Occludin表達(dá)無(wú)改善;QLQX能夠升高Occludin表達(dá)(P0.05),降低Claudin1表達(dá)(P0.01),但對(duì)ZO-1表達(dá)無(wú)改善作用;ZZG能夠增加ZO-1、Occludin表達(dá)(P0.05,P0.01),但對(duì)Claudin1表達(dá)無(wú)明顯作用;Rb1能夠增加Occludin表達(dá)(P0.01),但對(duì)ZO-1及Claudin1表達(dá)無(wú)明顯作用;SZ能夠增加ZO-1表達(dá)(P0.01),但對(duì)Occludin及Claudin1表達(dá)無(wú)明顯作用。11TXL呈時(shí)間依賴(lài)性降低Ox-LDL誘導(dǎo)單層內(nèi)皮細(xì)胞間高通透性(P0.05,P0.01)。12TXL能夠增加受損細(xì)胞中ZO-1及Occludin表達(dá)并改善蛋白的線(xiàn)性分布表達(dá)。13PD98059及TXL均能夠抑制ERK1/2磷酸化表達(dá)(P0.01)。14PD98059在小劑量時(shí)能夠明顯促進(jìn) ZO-1(5μM)、Occludin(5μM、10μM)蛋白表達(dá)(P0.05),當(dāng) PD98059 在20μM時(shí)則導(dǎo)致ZO-1、Occludin表達(dá)明顯降低(P0.05,P0.01),PD98059能夠劑量依賴(lài)性的降低Claudin1表達(dá)(P0.05,P0.01)。15TXL能夠明顯增加Ox-LDL損傷內(nèi)皮細(xì)胞中ZO-1、Occludin表達(dá)(P0.01);PD98059部分抑制TXL升高ZO-1表達(dá)的作用(P0.05),明顯抑制TXL對(duì)Occludin的改善作用。16 TXL明顯降低Ox-LDL誘導(dǎo)的單層內(nèi)皮細(xì)胞間高通透性,PD98059降低TXL對(duì)單層內(nèi)皮細(xì)胞高通透性的改善作用(P0.05,P0.01)。結(jié)論:1.基于脈絡(luò)學(xué)說(shuō)營(yíng)衛(wèi)"由絡(luò)以通、交會(huì)生化"理論,提出"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)是通絡(luò)干預(yù)急性心肌梗死無(wú)再流及心梗后心律失常、心梗后慢性心力衰竭的共性作用機(jī)制,豐富發(fā)展脈絡(luò)學(xué)說(shuō)指導(dǎo)心血管疾病治療的科學(xué)內(nèi)涵,為該類(lèi)疾病的臨床防治開(kāi)辟了新的有效途徑。2.以脈絡(luò)學(xué)說(shuō)為指導(dǎo)的通絡(luò)復(fù)方均可不同程度的保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞,這可能是其在心"孫絡(luò)-微血管"病變防治中發(fā)揮"孫絡(luò)-微血管"保護(hù)作用的重要原因,三方組方各異,因而具有不同內(nèi)皮保護(hù)特征。其中通心絡(luò)膠囊具有廣泛的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用,不僅改善內(nèi)皮細(xì)胞炎癥氧化損傷,抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,同時(shí)可以保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu),改善受損單層內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能;參松養(yǎng)心膠囊在改善內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷、抑制細(xì)胞凋亡方面具有明顯作用;芪藶強(qiáng)心膠囊能夠改善內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥氧化損傷,同時(shí)能夠保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu),改善單層內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能。通絡(luò)復(fù)方的內(nèi)皮保護(hù)作用為通絡(luò)方藥共性的微血管保護(hù)研究提供了數(shù)據(jù)支持。3.通絡(luò)復(fù)方通心絡(luò)膠囊、參松養(yǎng)心膠囊、芪藶強(qiáng)心膠囊三方共用之君藥人參具有內(nèi)皮保護(hù)作用,但由于三方配伍不同而顯出不同的內(nèi)皮保護(hù)特征,提示通絡(luò)復(fù)方的配伍可能在內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)中發(fā)揮重要作用,如典型通絡(luò)代表性蟲(chóng)類(lèi)藥水蛭同樣具有內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用,但其作用特點(diǎn)與人參及通心絡(luò)膠囊不盡相同。4.代表性通絡(luò)復(fù)方通心絡(luò)膠囊具有廣泛的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用,不僅改善內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能,抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,同時(shí)可以保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu),改善受損單層內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能,為通心絡(luò)膠囊的微血管保護(hù)研究提供了數(shù)據(jù)支持。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R259

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2417027