【摘要】：第一部分炎癥因子在潰瘍性結(jié)腸炎癌變中的作用機(jī)制初探目的:比較氧化偶氮甲烷(AOM)聯(lián)合葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎(UC)癌變動(dòng)物模型的不同建立方法,并在此動(dòng)物模型中探討炎癥因子NF-κB、TNF-α在UC癌變中的作用機(jī)制。方法與分組:首先,比較UC癌變小鼠模型的建立方法,將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組,第1組為AOM+3輪DSS組:AOM 12.5mg/kg腹腔注射,1周后給予第一輪2.5%DSS的飲用水,連續(xù)5天,之后換成普通飲用水,每隔3周重復(fù)給予一次DSS,共給3輪;第2組為AOM+1輪DSS組:同第一組給予AOM腹腔注射后,僅給予第一輪DSS飲用;第3組為生理鹽水+3輪DSS組:生理鹽水腹腔注射后,同第1組給予3輪DSS飲用;第4組為空白對(duì)照組。以上4組均12周后處死小鼠,統(tǒng)計(jì)瘤負(fù)荷(TL)和死亡率,進(jìn)行病理學(xué)評(píng)估。然后,在AOM/DSS小鼠模型中探討NF-κB、TNF-α在UC癌變中的作用機(jī)制,C57BL/6小鼠隨機(jī)分為6組,1-5組采用上述方法建立AOM/DSS誘導(dǎo)的UC癌變小鼠模型,第1組給予NF-κB反義寡聚核苷酸每?jī)芍芤淮喂嗄c;第2組給予TNF-α單克隆抗體每?jī)芍芤淮胃骨蛔⑸?第3組給予等量生理鹽水灌腸;第4組給予等量生理鹽水腹腔注射;第5組為模型對(duì)照組,僅建立AOM/DSS小鼠模型,不予干預(yù);第6組為空白對(duì)照組。12周后處死小鼠,統(tǒng)計(jì)瘤負(fù)荷,進(jìn)行病理學(xué)評(píng)估,采用ELISA方法檢測(cè)結(jié)腸組織TNF-α、IL-6水平,EMSA檢測(cè)NF-κB活化程度,免疫組化檢測(cè)β-catenin細(xì)胞核內(nèi)分布,EMSA檢測(cè)TCF-4轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果:不同小鼠建模比較發(fā)現(xiàn),AOM+3輪DSS組(n=11)和AOM+1輪DSS組(n=14)的成瘤率均為100%,但AOM+1輪DSS組小鼠的死亡率低,因此采用AOM+1輪DSS作為UC癌變小鼠模型的建立方法。NF-κB反義寡聚核苷酸組(n=8)的瘤負(fù)荷(0.92±0.17cm)較灌腸模型對(duì)照組(n=12,TL=2.07±0.33cm)顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);EMSA證實(shí)NF-κB反義寡聚核苷酸灌腸后可抑制NF-κB的活化;NF-κB反義寡聚核苷酸組的炎癥因子TNF-α和IL-6水平顯著低于模型對(duì)照組(p0.05);TNF-α單克隆抗體組(n=9)的瘤負(fù)荷(1.45±0.27cm)較腹腔注射模型對(duì)照組(n=12,TL=2.20±0.34cm)有下降趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);ELISA證實(shí)TNF-α單克隆抗體組的結(jié)腸組織TNF-α水平較模型對(duì)照組顯著下降(p＜0.05),且IL-6水平顯著下降(p0.05);TNF-α單克隆抗體組的NF-κB活化程度下降;NF-κB反義寡聚核苷酸組和TNF-α單克隆抗體組的小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞核中的β-catenin水平均顯著下降(p0.05),TCF-4的轉(zhuǎn)錄活性下降,Wnt途徑下調(diào)。結(jié)論:AOM腹腔注射后1輪DSS處理是建立UC癌變小鼠模型的較好方法;炎癥因子TNF-α、IL-6在AOM/DSS誘導(dǎo)的UC癌變的小鼠模型中發(fā)揮著重要作用,NF-κB反義寡聚核昔酸和TNF-α單克隆抗體通過抑制NF-κB活性,下調(diào)Wnt/β-catenin途徑,抑制UC癌變的發(fā)生。第二部分益生菌對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎癌變的抑制作用及相關(guān)機(jī)制初探目的:探索益生菌及5-氨基水楊酸(5-ASA)對(duì)AOM/DSS誘導(dǎo)的UC癌變小鼠模型的干預(yù)作用及相關(guān)機(jī)制。方法與分組:C57BL/6小鼠隨機(jī)分為7組,第1-6組建立AOM/DSS誘導(dǎo)的UC癌變小鼠模型,腹腔注射AOM12.5mg/kg,1周后給予含2.5%DSS的飲用水,連續(xù)5天,之后換成普通飲用水,12周后建模完成。第1組為5-ASA組,給予5-ASA 75mg/kg/d每日灌胃;第2組為布拉氏酵母菌組,給予布拉氏酵母菌5×l07CFU/d每日灌胃;第3組為VSL#3組,給予VSL#3 1.5×109CFU/d每日灌胃;第4組為5-ASA+布拉氏酵母菌組,給予上述劑量5-ASA +布拉氏酵母菌每日灌胃;第5組為5-ASA+ VSL#3組,給予上述劑量5-ASA+VSL#3每日灌胃;第6組為模型對(duì)照組,僅建立AOM/DSS小鼠模型,不予干預(yù);第7組為空白對(duì)照組。12周后處死小鼠,統(tǒng)計(jì)瘤負(fù)荷(TL),進(jìn)行病理學(xué)評(píng)估,采用ELISA方法檢測(cè)結(jié)腸組織TNF-α、IL-6、IL-10水平,EMSA檢測(cè)NF-κB活化程度,免疫組化檢測(cè)β-catenin細(xì)胞核內(nèi)分布,EMSA檢測(cè)TCF-4轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果:(1)各組的瘤負(fù)荷顯示:5-ASA組(n=20,TL=0.43±0.14cm)、布拉氏酵母菌組(n=19,TL=0.20±0.07cm)、VSL#3 組(n=20,TL=0.25±0.07cm)、5-ASA+布拉氏酵母菌組(n=20,TL=0.53±0.11cm)、5ASA+VSL#3 組(n=19,TL=0.46±0.11cm)較模型對(duì)照組(n=19,TL=0.97±0.19cm)均顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。(2)小鼠結(jié)腸組織炎癥因子水平測(cè)定發(fā)現(xiàn):5-ASA組、布拉氏酵母菌組、VSL#3組、5-ASA+布拉氏酵母菌組、5ASA+VSL#3組的TNF-α和IL-6水平均較模型對(duì)照組明顯下降,IL-10水平較模型對(duì)照組明顯上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。(3)EMSA檢測(cè)NF-κB轉(zhuǎn)錄活性顯示:5-ASA組、布拉氏酵母菌組、VSL#3組、5-ASA+布拉氏酵母菌組、5ASA+VSL#3組的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性均較模型對(duì)照組下降。(4)小鼠結(jié)腸組織β-catenin免疫組化顯示:5-ASA組、布拉氏酵母菌組、VSL#3組、5-ASA+布拉氏酵母菌組、5-ASA+VSL#3組結(jié)腸上皮細(xì)胞中β-catenin的細(xì)胞核表達(dá)量較模型對(duì)照組明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(5)EMSA檢測(cè)TCF-4轉(zhuǎn)錄活性顯示:5-ASA組、布拉氏酵母菌組、VSL#3組、5-ASA+布拉氏酵母菌組、5ASA+VSL#3組的TCF-4轉(zhuǎn)錄活性均較模型對(duì)照組下降。結(jié)論:益生菌和5-ASA可以抑制AOM/DSS誘導(dǎo)的UC癌變小鼠的結(jié)腸成瘤,機(jī)制可能通過下調(diào)促炎因子TNF-α、IL-6水平,上調(diào)抑炎因子IL-10 水平,進(jìn)而抑制NF-κB轉(zhuǎn)錄活性,最終減少β-catenin的入核、抑制TCF-4轉(zhuǎn)錄活性,下調(diào)Wnt/β-catenin途徑,從而抑制了炎癌轉(zhuǎn)化。目的:評(píng)價(jià)亞太地區(qū)結(jié)腸癌篩查評(píng)分(APCS評(píng)分)在中國(guó)大陸無癥狀人群中的應(yīng)用價(jià)值,并探究進(jìn)展期結(jié)直腸新生物(ACN,包括進(jìn)展期結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸癌)發(fā)生的高危因素。方法:本研究納入2012至2014年間北京地區(qū)40-75歲的行結(jié)腸鏡檢查的無癥狀體檢人群。所有受試者均接受高危因素問卷,并計(jì)算APCS評(píng)分,根據(jù)APCS評(píng)分將受試者分為高危組、中危組、低危組。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。應(yīng)用卡方檢驗(yàn)評(píng)價(jià)高危組、中危組、低危組中ACN檢出率的差異。應(yīng)用logistic二元回歸,分析BMI、糖尿病、飲酒、長(zhǎng)期應(yīng)用NSAIDS各項(xiàng)因素對(duì)ACN的影響。結(jié)果:納入人群共1010名,平均年齡53.54歲(SD 8.35),男性比例55.05%。所有篩查人群中,結(jié)腸鏡證實(shí)的ACN占4.06%。APCS評(píng)分高危組、中危組、低危組的ACN檢出率分別為8.8%,2.83%,1.55%(p=0.000),其中進(jìn)展期腺瘤檢出率分別為 7.2%,2.65%,1.54%(p=0.001);結(jié)腸癌檢出率分別為 1.6%,0.17%,0(p=0.015)。高危組的ACN檢出率比中危組提高了 3.3倍(95%CI 1.7-6.4,p=0.000),比低危組提高了 6.1倍(95%CI 1.8-20.8,p=0.001)。Logistic單因素回歸分析顯示,肥胖(BMI≥25,OR=2.474,95%CI:1.081-5.659,p=0.032),糖尿病(OR=2.385,95%CI:1.023-5.559,p=0.044),飲酒(OR=1.974,95%CI:1.033-3.774,p=0.040),APCS 評(píng)分高危(APCS 得分≥4,OR=3.763,95%CI:2.001-7.077,p=0.000)和ACN相關(guān)。Logistic多因素回歸分析顯示,僅APCS評(píng)分高危(調(diào)整OR值3.395,95%CI,1.756-6.565,p = 0.000)是 ACN 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論:在中國(guó)無癥狀人群中,APCS評(píng)分系統(tǒng)可以有效篩選出高危人群,對(duì)于預(yù)測(cè)ACN具有良好的應(yīng)用價(jià)值。肥胖、糖尿病、飲酒為ACN的危險(xiǎn)因素,可加入APCS評(píng)分系統(tǒng)中,對(duì)亞太地區(qū)結(jié)直腸癌篩查方案進(jìn)行優(yōu)化。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：2409686