【摘要】：骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)是一種骨骼強度減弱,易于骨折的疾病,影響全世界數(shù)以百萬計的人。骨質(zhì)疏松癥的治療方法通常包括藥物治療和干預(yù)措施,比如礦物質(zhì)的補充,改變生活方式和加強運動鍛煉等。鑒于中藥副作用小,治療成本較低的優(yōu)點,使得其被廣泛應(yīng)用于臨床實踐,已有2000多年歷史。骨碎補具備補腎強骨之功效,能促成骨質(zhì)愈合,治療骨質(zhì)疏松。柚皮苷是骨碎補的主要活性物質(zhì),為單一的化學(xué)成分。有研究表明,柚皮苷具備促成成骨細胞增殖和分化以及減少破骨細胞形成的雙重作用,并且還能抑制藥物誘導(dǎo)的OP。因而我們推測具有雙重作用的柚皮苷可在減少破骨量的同時增加成骨量,從而能糾正OP狀態(tài)下成骨細胞和破骨細胞之間的失衡,起到抗OP的效果。在本次實驗中,我們將圍繞上述展開研究,主要部分分述如下:1柚皮苷作用后,成骨細胞增殖,分化的改變(1)目的研究柚皮苷作用下,乳鼠原代培養(yǎng)的顱頂骨成骨細胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖,分化,成熟的改變。(2)方法實驗對象為出生4天的乳鼠顱頂骨,二次酶消化法獲取原代成骨細胞,3 d換液1次,待細胞融合80%后傳代。采用不同濃度的柚皮苷進行藥物干預(yù),CCK-8法檢測成骨細胞的增殖率,同時檢測不同濃度柚皮苷作用不同時間點的堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,alp)活性,茜素紅染色顯示鈣化結(jié)節(jié)。elisa法檢測柚皮苷組,對照組之間的骨鈣素(osteocalcin,ocn)、骨橋蛋白(oesteopontin,opn)的蛋白水平是否有所不同;realtimert-pcr檢測成骨細胞相關(guān)因子alp,ocn,opn的mrna水平。(3)結(jié)果:柚皮苷作用后,cck-8檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)成骨細胞的增殖具有明顯增加。當1mg/l濃度組培養(yǎng)至第3d時,細胞增殖開始出現(xiàn)差別(p0.05),培養(yǎng)至9d時,增殖最為明顯(p0.01)。10mg/l濃度組在培養(yǎng)至9d時,也表現(xiàn)出了促增殖的效果(p0.05)。alp染色后,柚皮苷處理組呈現(xiàn)出更高的alp活性。藥物濃度為1mg/l時,柚皮苷明顯提高ocn,opn的分泌量。pcr結(jié)果也顯示,柚皮苷作用后,成骨相關(guān)的因子alp,ocn,opnmrna的表達得到了促進。(4)結(jié)論柚皮苷有助于促進rob的增殖與分化成熟,藥物濃度為1mg/l時作用更為明顯,并且存在時間相關(guān)性,對于骨質(zhì)疏松癥的防治有一定的作用。2鼠顱頂骨器官培養(yǎng)中,柚皮苷對成骨細胞和破骨細胞的影響(1)目的建立骨器官培養(yǎng)模型初步研究柚皮苷調(diào)解共存的骨細胞之間平衡狀態(tài)的作用機制(2)方法取出生4天鼠顱頂骨,分離出顱頂骨,于α-mem培養(yǎng)。采不同濃度柚皮苷作用后,he染色,trap染色,鈣離子濃度檢測,pcr檢測細胞相關(guān)因子opg,rankl的mrna水平。(3)結(jié)果柚皮苷作用下,he染色后新骨生成有明顯的增加,切片骨厚度可見明顯增加,成骨細胞計數(shù)結(jié)果提示以1mg/l增加最為顯著(p0.05),其次為10mg/l濃度組。柚皮苷處理后,隨著時間的推移,骨器官的trap染色越來越淺,表明破骨細胞著色數(shù)量有減少的趨勢,破骨細胞計數(shù)結(jié)果提示以1mg/l減少最為顯著(p0.05)。rt-pcr結(jié)果顯示,柚皮苷作用組,成骨分化基因opg的表達增加(p0.05),破骨分化基因rankl的表達有所減少(p0.05)。(4)結(jié)論采用骨器官培養(yǎng)模型研究發(fā)現(xiàn),在共培養(yǎng)時,柚皮苷具有促進成骨的作用,同時也具有抑制破骨的效應(yīng),其機制與rankl/opg/rank有一定關(guān)系。3將顯微ct和骨器官培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合起來用于中藥的研究(1)目的采用顯微ct掃描技術(shù),對柚皮苷對共存的成骨細胞和破骨細胞的影響進行縱向研究和分析(2)方法體外建立骨器官模型,分為三組,不同濃度柚皮苷作用后,于不同時間點進行體外micro-ct的掃描,三維重建后,相關(guān)參數(shù)分析。(3)結(jié)果不同時間點定量測量的不同濃度柚皮苷作用下的顱骨bs值與對照組比較,幾乎無明顯變化,只有在第16天,23天的時候,1mg/l濃度組與對照組之間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。于不同時間點定量測量的不同濃度柚皮苷作用下的顱骨bv值,bs/bv與對照組比較,隨著時間的延長有明顯變化,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),在第16天,23天的時候,所有組均呈現(xiàn)時間效應(yīng),出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)意義,即骨體積都增長明顯。1mg/l濃度組與對照組之間差別明顯有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。10mg/L濃度組與對照組之間差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)結(jié)論經(jīng)過參數(shù)分析后,我們能夠發(fā)現(xiàn)柚皮苷作用下,顱頂骨厚度有所增加,在共培養(yǎng)時,柚皮苷具有促進成骨的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R580

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本文編號：2401435