【摘要】：第一部分:改良套管吻合法建立同種異體大鼠左肺原位移植模型目的:通過改良套管吻合法建立同種異體大鼠左肺原位移植模型,并繪制學習曲線,觀察肺移植模型存活率。方法:將100只SD大鼠分為供體60只和受體40只兩組,先進行20只供體手術及肺門套管的學習,再采用改良套管吻合技術完成大鼠左肺原位移植手術。結果:20例供肺手術中,到開展到第15例時,供肺灌洗的質量基本都是令人滿意的,40例肺移植手術中,到開展到第25例時,受體手術時間才逐漸穩(wěn)定;供體手術時間為9.28±2.01分鐘,供肺肺門游離時間為6.04±1.43,供肺套管時間為5.70±2.36,受體手術時間為33.40±8.44,冷缺血時間為26.37±6.01,熱缺血時間為16.29±3.58;所有肺移植手術的成功率為51.61%,手術技術掌握后的手術成功率達到80%左右。結論:改良套管吻合法建立的同種異體大鼠左肺原位移植模型可重復性高。通過對套管吻合操作細節(jié)的改良,降低了肺移植受體手術的難度,明顯縮短了學習周期。第二部分:白藜蘆醇對大鼠左肺移植術后急性期移植肺的保護作用和相關機制目的:白藜蘆醇是一個多功能的生物活性物質。研究發(fā)現(xiàn)它有抗炎效果,在預防器官的缺血再灌注損傷也有明顯作用。但目前尚無報道白藜蘆醇對肺移植供肺是否存在保護作用。本研究通過比較不同處理條件下肺移植后早期的大鼠全身及局部炎癥表現(xiàn),以及肺組織中相關蛋白的表達情況,來研究白藜蘆醇對大鼠同種異體左肺移植術后移植肺的作用及機理。方法:我們將SD大鼠分為白藜蘆醇組(RES組)、地塞米松組(DEM組)和生理鹽水組(NS組),分別于術前1小時予受體腹腔注射白藜蘆醇混懸液(60mg/kg)、地塞米松(1mg/kg)和生理鹽水(2ml/kg),并進行左肺原位移植后使之存活24小時,我們檢測受體血清和肺泡灌洗液的細胞因子濃度。行HE染色觀察雙側肺的組織結構,對肺組織的損傷程度進行評分。并且用免疫組化染色檢測誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子-κB P65、受體互作絲氨酸/蘇氨酸激酶3(RIPK3)和混合譜系激酶結構域蛋白(MLKL)的表達。結果:我們發(fā)現(xiàn)NS組移植肺組織鏡下較嚴重的肺泡上皮水腫增厚、呼吸性支氣管內和肺間質有大量紅細胞伴肺間質中性粒細胞浸潤、局部見肺不張表現(xiàn);RES組和DEM組移植肺組織鏡下表現(xiàn)較為相似,炎癥表現(xiàn)較NS組輕,肺泡結構基本正常、局部肺泡腔內可見紅細胞,肺間質中少量中性粒細胞和紅細胞。ELISA結果顯示:RES組移植肺肺泡灌洗液及血清中IL-6、TNF-α水平較NS組均有不同程度下降,抗炎效果與DEM組相似,IL-10濃度較NS組無明顯差異。RES組的i-NOS、RIPK3和MLKL的高表達的比例約為50%、50%和37.5%,分別都低于NS組的水平,并且肺組織損傷程度和程序性壞死相關蛋白表達陽性率呈反比。結論:根據(jù)上述研究,我們認為通過建立同種異體大鼠左肺原位移植模型,發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇預處理對肺移植術后早期移植肺組織結構存在一定的保護作用。并且我們發(fā)現(xiàn)移植肺組織損傷和程序性壞死相關蛋白的表達的關系,提示肺移植相關缺血再灌注損傷的發(fā)生機理可能與細胞程序性壞死有關。第三部分:HIF-1α-VEGF-A通路的激活在肺移植后慢性排斥反應中的作用目的:低氧誘導因子1α(HIF-1α)在低氧狀態(tài)下發(fā)揮轉錄活性,很多研究表明器官移植后移植物長期處于缺氧狀態(tài),導致移植物功能受到影響。我們假設肺移植后慢性閉塞性細支氣管炎與HIF-1α有關。本研究比較HIF-1α及其下游靶基因血管內皮生長因子(VEGF)A等在同種及異種肺移植大鼠肺組織中的表達情況,研究該通路與大鼠肺移植后閉塞性細支氣管炎(BO)的關系。方法:我們采用袖套吻合法建立大鼠左肺原位移植模型,實驗組是由F344的左肺移植給Lewis大鼠;術后予環(huán)孢菌素抗急性排異,LPS刺激誘導BO;于術后第90天處死取肺。行HE染色和Masson染色觀察移植肺的組織結構,評估肺纖維化評分,免疫組化檢測HIF-1α、VEGF-A和VEGF受體蛋白-2(VEGFR-2)在移植肺組織中的表達水平,分析HIF-1α表達與VEGF-A及VEGFR-2間的相關性。結果:動物模型術后影像學及病理學資料均提示該動物模型在術后90天時發(fā)生了閉塞性細支氣管炎。異種移植物HIF-1α、VEGF-A和VEGFR-2術后表達陽性率為77.27、63.64和68.18%,明顯高于同種移植。肺組織纖維化程度在異種移植物中分數(shù)最高,明顯高于其余組,p0.01;并且與HIF-1α、VEGF-A和VEGFR-2蛋白表達陽性率呈正相關。結論:該模型可模擬臨床肺移植后閉塞性細支氣管炎,移植后肺組織HIF-1α及其下游基因VEGF-A等表達上調,提示HIF-1α-VEGF-A通路的激活可能參與了肺移植后閉塞性細支氣管炎的發(fā)生與轉歸,為肺移植后BO的防治提供了新的切入點。
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【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2364329