發(fā)布時間：2018-11-27 14:30

【摘要】：背景:動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是心腦血管疾病的的主要誘因,血管內(nèi)皮功能障礙是AS的起始步驟。氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可引起血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。本課題在前期實驗研究基礎(chǔ)上以丹參有效活性成分丹參素鈉(DSS)來探討其減輕血管內(nèi)皮損傷信號通路,進一步擴展其對中藥復(fù)方定心方在抗AS治療的藥理機制研究,為中醫(yī)藥防治AS尋找新的靶點。目的:從動物和細胞水平探討DSS對ox-LDL誘導(dǎo)動脈粥樣硬化小鼠血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用及可能機制。方法:(1)動物實驗SPF級8周齡雄性ApoE基因敲除(Apo E-/-)小鼠50只,以人血清低密度脂蛋白(LDL)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮損傷的方法建立APoE-/-小鼠AS血管損傷模型。隨機分為5組,每組10只,分別為:①對照組、②模型組、③DSS-L、④DSS-M、⑤DSS-H,②、③、④、⑤組均給予DSS2.5、5、7.5mg/kg腹腔注射,每日一次;①組灌服等劑量生理鹽水,實驗16周。(2)細胞實驗采用ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC損傷的方法建立細胞模型。濃度梯度組:分別以 0、25、50、100mg/L 的 ox-LDL 作用 HUVEC24h。時間梯度組:以 50mg/L ox-LDL 作用 HUVEC0,3,6,12,24 h。干預(yù)組:①對照組②DSS 組③ox-LDL+DSS組④ ox-LDL 組⑤ ox-LDL+SB203580⑥ ox-LDL+SP600125。結(jié)果:(1)小鼠血脂檢測結(jié)果顯示:模型組顯著高于對照組(P0.05),與模型組相比,DSS-M 與 DSS-H 血清 TC、TG、LDL-C 顯著降低(P0.05)。(2)小鼠主動脈AS斑塊病理形態(tài)學(xué)觀察:模型組較對照組有較明顯的AS斑塊形成,DSS可劑量依賴性抑制AS斑塊形成(P0.05)。(3)小鼠主動脈AS斑塊LDL的表達:各給藥組LDL表達較模型組均顯著降低(P0.05);DSS-H組顯著低于DSS-L、DSS-M組(P0.05)。(4)小鼠主動脈LDL蛋白表達:與模型組相比,DSS-M、DSS-H組顯著抑制LDL蛋白表達(P0.05)。(5)小鼠血清ET-1檢測結(jié)果顯示:與對照組相比,模型組小鼠的血漿ET-1含量水平顯著增高(P0.05),DSS-M組顯著低于模型組(P0.05)。(6)ox-LDL對HUVEC增殖的影響:濃度梯度組:與模型組相比,25、50、100 mg/L ox-LDL組均可顯著抑制HUVEC增殖(P0.05),25、50、100 mg/L ox-LDL組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。時間梯度組:與對照組相比,50 mg/L ox-LDL作用12 h、24 h后均能抑制HUVEC增殖(P0.05)。(7)ox-LDL對HUVEC凋亡的影響:濃度梯度組:與模型組相比,50、100mg/Lox-LDL作用24h后可顯著提高早、晚期凋亡率%(P=0.00),兩組間無顯著差異(P0.05)。時間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用12、24h后均可提高早、晚期凋亡率%(P=0.001)。(8)ox-LDL對HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表達影響:濃度梯度組:100 mg/L ox-LDL作用24 h后達到峰值(P=0.00)。時間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用3h、6h后均可提高HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表達(P0.05)。(9)ox-LDL對HUVEC中的p-JNK蛋白表達影響:濃度梯度組:25、50mg/L ox-LDL作用12 h后可顯著提高HUVEC中p-JNK蛋白的表達(P=0.00)。時間梯度組:50mg/Lox-LDL作用3、6h后均可提高HUVEC中的p-JNK蛋白表達(P0.05),兩組間無顯著差異(P0.05)。(10)DSS對ox-LDL影響HUVEC細胞內(nèi)p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表達影響:與模型組相比,DSS-M和DSS-H組能夠顯著抑制HUVEC中p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表達(P=0.00),兩組間無顯著差異(P0.05)。(11)DSS對ox-LDL影響HUVEC分泌TNF-α、IL-6的干預(yù)作用:與模型組相比,25、200mg/L DSS預(yù)處理HUVEC 24h后降低HUVEC分泌IL-6水平(P0.05),兩組間無顯著差異(P0.05);50、200mg/LDSS預(yù)處理HUVEC24h后降低HUVEC分泌TNF-α水平(P0.05),兩組間無顯著差異(P0.05)。(12)DSS及MAPKs通路抑制劑對ox-LDL影響HUVEC增殖的干預(yù)作用:與模型組相比,100 mg/L DSS組可減輕ox-LDL對HUVEC增殖的抑制作用(P=0.00),SP600125及 SB203580均可減輕 ox-LDL 對 HUVEC 增殖的抑制(P0.05)。(13)DSS及MAPKs通路抑制劑對ox-LDL影響HUVEC凋亡的干預(yù)作用:與模型組相比,50、100mg/L DSS均可顯著降低早、晚期凋亡率%(P=0.00),兩組間無顯著差異(P0.05),SP600125及SB203580均可降低早、晚期凋亡率%(P=0.001)。結(jié)論:動物實驗證實DSS可通過降血脂、ET-1,減少IL-6、TNF-α,抑制AS斑塊形成和下調(diào)LDL表達等方面延緩AS的發(fā)生發(fā)展。細胞實驗證實ox-LDL可抑制HUVEC增殖并促進其凋亡、可誘導(dǎo)HUVEC分泌炎癥因子,DSS可通過增加HUVEC增殖,減少HUVEC凋亡及炎癥因子分泌來發(fā)揮抗AS作用,其機制可能與抑制MAPKs信號通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2361123