【摘要】：目的:本課題旨在觀察無髓性損傷的慢性頸脊髓壓迫人群的頸肩部疼痛、頸椎活動受限、頸椎不穩(wěn)、頸脊髓受壓比例、頸椎JOA評分,探究該類人群上述臨床表現(xiàn)特點(diǎn),分析可能影響無髓性損傷的慢性頸脊髓壓迫人群預(yù)后的危險(xiǎn)因素。改善該類人群的治療效果。建立并初步驗(yàn)證無髓性損傷的慢性頸脊髓壓迫大鼠模型�；贜F-kappa B信號通路,觀察頸脊髓在慢性輕度壓迫下是否存在炎性反應(yīng),并以補(bǔ)腎活血方干預(yù)這種炎性反應(yīng),為進(jìn)一步研究慢性頸脊髓壓迫病機(jī)及治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.臨床觀察收集2013年5月-2014年10月在廣東省中醫(yī)院門診符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者85例,完成隨訪68例,末次隨訪為2017年2月。根據(jù)頸椎JOA評分在納入時(shí)和末次隨訪之間的差值,將患者分為(0-]分)低分組和(≥2分)高分組。觀察入組時(shí)核磁影像矢狀面脊髓壓迫比例、頸肩或上臂部疼痛部位(頸后部、枕部、肩部、肩胛區(qū)內(nèi)側(cè)緣、上臂)、頸肩部疼痛性質(zhì)(酸痛、脹痛、刺痛)、疼痛程度、肌肉緊張感、頸椎活動受限、頸椎不穩(wěn)等分布情況是否存在組間差別。2.實(shí)驗(yàn)室研究:無髓性損傷的慢性頸脊髓壓迫大鼠模型驗(yàn)證研究方面,將30只300g-350g Sprague Dawley(SD)雄性大鼠隨機(jī)分為2組,對照組(即假手術(shù)組)和模型組,觀察大鼠行為學(xué)評分(Basso Beattie Bresnahan scores,BBB評分)以了解大鼠神經(jīng)功能并剔除神經(jīng)功能受損大鼠(BBB評分19分,滿分21分)。蘇木精-伊紅染色(HE染色)觀察脊髓形狀結(jié)構(gòu)變化。造模1周和1月時(shí)用核磁共振明確壓迫部位、壓迫程度及局部是否存在炎性病變,造模后1月取材。炎癥機(jī)制探討研究,將SD雄性大鼠隨機(jī)分為對照組(假手術(shù))和模型組,每組20只。造模后1月取材。補(bǔ)腎活血方干預(yù)和NF-kappa B信號通路調(diào)節(jié)炎癥研究方面,將大鼠分為藥物組(補(bǔ)腎活血方灌胃)、抑制劑組(吡咯烷二硫代氨基甲酸銨(PDTC)腹腔注射)、藥物+抑制劑組(補(bǔ)腎活血方灌胃+PDTC腹腔注射)、模型組,每組20只,中藥(補(bǔ)腎活血方:丹參15g,淫羊藿15g,仙茅15g,附子10g)于造模后第二天給予,PDTC造模前4小時(shí)給予,隨后都每日給予,1月后取材。造模1月后取出受壓脊髓,用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測脊髓中p65、TNF-α、IL-1 β、IL-6的mRNA表達(dá)量,蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)檢測磷酸化-p65(pp65)、TNF-α蛋白表達(dá)量,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定IL-6、IL-lβ蛋白表達(dá)量,免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞(Neun標(biāo)記)、活化小膠質(zhì)細(xì)胞(CD68標(biāo)記)、NF-kappa B活化細(xì)胞(p65標(biāo)記)并且計(jì)數(shù)。HE染色切片觀察脊髓神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)。持續(xù)評估(BBB評分)大鼠神經(jīng)功能并髓性損傷大鼠(19分)。中藥復(fù)方指紋圖譜及色譜分析補(bǔ)腎活血方的主要成分。結(jié)果:臨床觀察結(jié)果表明高分組患者中刺痛及頸椎不穩(wěn)的出現(xiàn)頻率較低分組更高,而低分組中伴脹痛的患者更多。(P0.05)頸椎不穩(wěn)可能與頸椎JOA評分下降幅度有關(guān)(-0.264),(P0.05)兩組間其他指標(biāo)在兩組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對照組相比,慢性頸脊髓輕度受壓大鼠神經(jīng)功能BBB評分在造模后1月內(nèi)沒有差異。(P0.05)造模后1周和1月時(shí),核磁共振證明模型鼠的頸脊髓存在輕度壓迫,脊髓周圍沒有水腫信號,排除周圍組織炎性水腫波及脊髓的情況,植入物位置固定,大小相似。造模后1周和1月時(shí),HE染色表明模型鼠的頸脊髓受到輕度壓迫,但兩組脊髓內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞分布均勻,胞體飽滿,細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)界限分明。提示造模后1月內(nèi),模型鼠的慢性受壓脊髓沒有明顯器質(zhì)性損傷。炎癥機(jī)制探討研究方面,模型組與對照組相比,p65、IL-6、IL-1 β、TNF-α mRNA表達(dá)量在造模1月后均有升高。(P0.05)蛋白免疫印跡法提示在造模后1月時(shí),模型組磷酸化p65和TNF-α的蛋白表達(dá)均高于對照組。(P0.05)免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)模型組活化小膠質(zhì)細(xì)胞和NF-kappa B通路活化的細(xì)胞數(shù)量造模后1月時(shí)均高于對照組,(P0.05)而神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量沒有差異。(P0.05)酶聯(lián)免疫吸附測定法結(jié)果顯示模型組大鼠脊髓內(nèi)IL-6、IL-1β蛋白表達(dá)量在1月時(shí)升高。(P0.05)造模后1月內(nèi)BBB評分提示兩組大鼠的神經(jīng)功能無明顯差別。(P0.05)補(bǔ)腎活血方干預(yù)及NF-kappa B信號通路調(diào)節(jié)炎癥研究方面,藥物組、抑制劑組、藥物+抑制劑組與模型組相比,p65 mRNA表達(dá)量均有降低。(P0.05)此外,藥物+抑制劑組p65 mRNA表達(dá)低于藥物組。(P0.05)除IL-6的抑制劑組和模型組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外,(P0.05)IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)量各干預(yù)組均較模型組具有降低,(P0.05)藥物+抑制劑組的TNF-α mRNA表達(dá)量低于藥物組和抑制劑組。(P0.05)Western Blot表明藥物+抑制劑組的磷酸化-p65(pp65)表達(dá)低于其他各組,(P0.05)抑制劑組低于模型組。(P0.05)模型組TNF-α表達(dá)高于其他各組,藥物組和抑制劑組的TNF-α表達(dá)高于藥物+抑制劑組(P0.05)。IHC檢測發(fā)現(xiàn)藥物組、抑制劑組、藥物+抑制劑組的活化小膠質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于模型組,(P0.05)抑制劑組高于藥物+抑制劑組。(P0.01)神經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)在各組之間沒有差異。(P0.05)各組p65陽性的細(xì)胞數(shù)量均低于模型組,(P0.05)藥物+抑制劑組低于抑制劑組和藥物組。ELISA檢測表明除了抑制劑與模型組之間的IL-6蛋白表達(dá)差異不明顯外,模型組的IL-6和IL-1 β高于其他各組,藥物組和抑制劑組的IL-6和IL-1 β均高于藥物+抑制劑組(P0.05)。結(jié)論:1.頸肩及上臂刺痛來就診,或存在頸椎不穩(wěn)的無髓性損傷的慢性頸脊髓壓迫患者頸椎JOA評分中遠(yuǎn)期下降的幅度可能更大,而頸脊髓壓迫比例和就診時(shí)疼痛程度與頸椎JOA評分下降的幅度沒有關(guān)聯(lián)。2.髓性損傷的慢性頸脊髓壓迫大鼠模型的受壓脊髓節(jié)段內(nèi)存在炎性反應(yīng),并且與NF-kappa B通路激活有關(guān)。3.藥補(bǔ)腎活血方對脊髓慢性受壓所致炎癥有抑制作用,并且與NF-kappa B通路抑制劑的效果相互疊加,但不一定是通過該通路起作用的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R274.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2360852