【摘要】：目的建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型,采用中藥復(fù)方“益氣化瘀方”進行干預(yù)。從功能學(xué)角度觀察益氣化瘀方對模型大鼠妊娠功能的影響,從組織病理學(xué)和分子生物學(xué)角度觀察益氣化瘀方對模型大鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響及對異位內(nèi)膜生長的影響。探討益氣化瘀方治療子宮內(nèi)膜異位癥同時改善子宮內(nèi)膜容受性,提高妊娠功能的作用機制,為進一步臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法通過手術(shù)切除大鼠右側(cè)子宮,剪取內(nèi)膜組織塊移植到腸系膜建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型。將造模成功的大鼠隨機分為益氣化瘀方組、孕三烯酮組、模型組,另設(shè)假手術(shù)組。各組給藥方法如下:益氣化瘀方組予益氣化瘀方混懸液(相當(dāng)于生藥3.55g/ml),按4ml/(Kg·d)連續(xù)灌胃6周;孕三烯酮組予孕三烯酮混懸液(0.1mg/ml),按4ml/(Kg·d)連續(xù)灌胃4周后以等體積滅菌蒸餾水連續(xù)灌胃2周;模型組及假手術(shù)組均予滅菌蒸餾水,按4ml/(Kg·d)連續(xù)灌胃6周。實驗研究分為三個部分。第一部分實驗觀察益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能的影響。在藥物干預(yù)結(jié)束后于動情期將雌雄大鼠以2:1比例合籠,以發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道脫落細胞涂片發(fā)現(xiàn)精子當(dāng)日記為妊娠第1天,于雌鼠妊娠第16天采集標本。統(tǒng)計各組妊娠雌鼠數(shù)、妊娠雌鼠單側(cè)子宮著床數(shù),電子天平稱量各胚胎及胎盤重量,平行切片法計數(shù)左側(cè)卵巢妊娠黃體數(shù),計算大鼠妊娠率、著床率。第二部分實驗探討益氣化瘀方改善子宮內(nèi)膜容受性,促進胚胎著床的作用機制。在藥物干預(yù)結(jié)束后于動情期將雌雄大鼠以2:1比例合籠,于雌鼠妊娠第4天采集標本。ELISA法檢測大鼠血清雌二醇(E2)與孕酮(P)水平,免疫組化SP法和蛋白質(zhì)免疫印跡法分別檢測大鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、白血病抑制因子(lif)、整合素αυβ3(αυβ3)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp-9)的表達。第三部分實驗探討益氣化瘀方抑制異位內(nèi)膜生長的作用機制。用游標卡尺測量大鼠干預(yù)前、后異位囊腫直徑,免疫組化sp法檢測大鼠異位內(nèi)膜er、pr、αυβ3、mmp-9、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1(timp-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(casepase-9)表達。免疫組化切片放大400倍,采用image-proplus6.0軟件進行圖像分析,測量特異蛋白表達陽性區(qū)域的累計光密度(iod)值及區(qū)域面積(area),以平均光密度(iod/area)代表蛋白表達強度,結(jié)果記錄為平均光密度值。westernblot采用bio-radxrs+成像儀采集圖像,測定目標條帶灰度值,選擇β-actin為蛋白內(nèi)參,結(jié)果記錄為目標條帶灰度值/β-actin條帶灰度值。應(yīng)用spss19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料用均數(shù)加減標準差(`x±s)表示。計量資料經(jīng)參數(shù)檢驗,多組間比較采用單因素方差分析或秩和檢驗,兩兩組間比較采用lsd或kruskal-wallis檢驗,組內(nèi)差異采用配對樣本t檢驗或wilcoxonsigned-rank檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗或fisher精確檢驗。設(shè)定檢驗水準α=0.05,p0.05即為差異有顯著性意義。結(jié)果1.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能的影響模型組排卵數(shù)、著床數(shù)、著床率、胚胎重量及胎盤重量均低于假手術(shù)組,益氣化瘀方組排卵數(shù)、著床數(shù)、著床率、胚胎重量及胎盤重量均高于模型組和孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05);而孕三烯酮組排卵數(shù)、著床數(shù)、著床率、胚胎重量及胎盤重量與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。2.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠圍著床期血清e2、p水平的影響益氣化瘀方組e2水平高于模型組和孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05);而孕三烯酮組e2水平與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。模型組p水平低于假手術(shù)組,益氣化瘀方組p水平高于模型組和孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05);但孕三烯酮組p水平與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。3.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響模型組圍著床期子宮內(nèi)膜er表達高于假手術(shù)組,益氣化瘀方組和孕三烯酮組er表達均低于模型組,益氣化瘀方組er表達高于孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05)。模型組圍著床期子宮內(nèi)膜pr表達高于假手術(shù)組,益氣化瘀方組和孕三烯酮組pr表達均低于模型組,益氣化瘀方組pr表達低于孕三烯酮組,差異有顯著性意義(p0.05)。模型組圍著床期子宮內(nèi)膜lif、αυβ3、mmp-9表達均低于假手術(shù)組,益氣化瘀方組lif、αυβ3、mmp-9表達均高于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);但孕三烯酮組lif、αυβ3、mmp-9表達與模型組差異無顯著性意義(p0.05)。4.益氣化瘀方對子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠異位內(nèi)膜的影響益氣化瘀方組和孕三烯酮組干預(yù)后異位囊腫直徑均較干預(yù)前減小,差異有顯著性意義(p0.05);模型組干預(yù)前后異位囊腫直徑比較差異無顯著性意義(p0.05)。益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜er、pr表達均低于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);而益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜er、pr表達差異均無顯著性意義(p0.05)。益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜αυβ3、mmp-9表達均低于模型組,而timp-1表達均高于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);但益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜αυβ3、mmp-9、timp-1表達均差異無顯著性意義(p0.05)。益氣化瘀方組和孕三烯酮組異位內(nèi)膜casepase-9表達均高于模型組,差異有顯著性意義(p0.05);但益氣化瘀方組和孕三烯酮組casepase-9表達差異無顯著性意義(p0.05)。結(jié)論1.子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能偏低,益氣化瘀方能有效提高其排卵數(shù)和著床率,并能促進胚胎發(fā)育。2.益氣化瘀方能有效提升子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠圍著床期P水平,降調(diào)子宮內(nèi)膜上PR表達,并能上調(diào)子宮內(nèi)膜中LIF、αυβ3、MMP-9的表達,提示其可通過調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性,促進胚胎著床而改善子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠妊娠功能。3.益氣化瘀方能有效抑制異位內(nèi)膜生長,其機制可能與降低異位內(nèi)膜ER、PR、αυβ3、MMP-9表達,提升TIMP-1表達而抑制異位內(nèi)膜侵襲以及上調(diào)Casepase-9表達促進異位內(nèi)膜細胞凋亡有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：2267571