【摘要】：第一部分SGK1在早期流產(chǎn)子宮蛻膜組織中的表達改變目的:通過測定妊娠早期蛻膜組織中血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶1(SGK1)的表達,比較早期自然流產(chǎn)和正常妊娠蛻膜組織中SGK1表達的差異,探討SGK1在妊娠早期母胎界面微環(huán)境中的生物學意義。材料及方法:1.選擇妊娠早期不明原因自然流產(chǎn)者88例作為實驗研究組,同期71例的正常早期妊娠者作為對照組。2.免疫組織化學法及免疫熒光技術(shù)檢測子宮蛻膜組織中SGK1的表達。3.TRIZOL法抽提子宮蛻膜組織的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后Real time PCR測定兩組子宮蛻膜組織中SGK1 mRNA相對表達量。4.用含蛋白酶抑制劑的RIPA蛋白質(zhì)裂解液提取人子宮蛻膜組織蛋白質(zhì),采用BCA法進行組織蛋白定量,Western blot技術(shù)進行檢測人子宮蛻膜組織中SGK1蛋白質(zhì)相對表達量。結(jié)果:1.早期自然流產(chǎn)組和正常妊娠組在年齡、妊娠周數(shù)、初潮年齡、月經(jīng)周期、行經(jīng)天數(shù)等方面無顯著差異。早期自然流產(chǎn)患者血清雌二醇(E2)的水平低于正常妊娠者,差異有統(tǒng)計學意義(p0.001)。2.免疫組織化學法及免疫熒光發(fā)現(xiàn)SGK1在早期自然流產(chǎn)患者和正常妊娠者的子宮蛻膜組織中均有表達。3.早期自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中的SGK1的mRNA水平較早期正常妊娠者蛻膜組織中的表達下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。4.早期自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜組織中SGK1總的蛋白質(zhì)表達低于正常妊娠者,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。并且,早期自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜組織中SGK1磷酸化的蛋白表達低于正常妊娠者,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001),這與SGK1總蛋白在兩組之間的表達趨勢相一致。5.早期自然流產(chǎn)患者子宮蛻膜組織中SGK1的磷酸化蛋白與總蛋白的比值低于正常妊娠組,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.001)。結(jié)論:1.SGK1在早期妊娠子宮蛻膜組織中表達。2.早期自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中的SGK1的mRNA水平、總蛋白以及活化的蛋白表達均下降。第二部分SGK1的下調(diào)與早期自然流產(chǎn)發(fā)生相關(guān)機理研究目的:通過建立體外子宮蛻膜細胞,以蛻膜細胞中SGK1蛋白活性的變化為著眼點,進一步探究早期自然流產(chǎn)的發(fā)生機理,為病理妊娠發(fā)病機制及防治的研究提供新的思路和途徑。材料及方法:1.培養(yǎng)體外子宮蛻膜細胞,用免疫熒光法鑒定其純度。2.MTT比色試驗檢測蛻膜細胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI檢測蛻膜細胞凋亡。3.靶向性SGK1 siRNA干擾研究SGK1對蛻膜細胞凋亡的影響。4.脂多糖處理蛻膜細胞建立自然流產(chǎn)的體外細胞模型。5.酶聯(lián)免疫吸附測定蛻膜細胞上清中的細胞因子的含量。結(jié)果:1.靶向性SGK1 siRNA轉(zhuǎn)染24小時后的子宮蛻膜細胞的凋亡高于對照組蛻膜細胞,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。2.經(jīng)雌二醇刺激蛻膜細胞中SGK1的表達高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。3.SGK1經(jīng)雌二醇活化后使脂多糖所引起的蛻膜細胞下降的增殖活性有一定程度的恢復。SGK1的活化使脂多糖所引起的蛻膜細胞凋亡的升高有一定程度的恢復,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);并且使脂多糖所引起的蛻膜細胞抗凋亡基因BCL-2和XIAP的降低有一定程度的恢復,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)4.SGK1經(jīng)雌二醇的刺激后活化增加IL-4和IL-5細胞因子的分泌,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001和P0.01);SGK1活化后下調(diào)IFN-γ細胞因子的分泌,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001);SGK1的活化上調(diào)細胞因子IL-4/IFN-γ的比值,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。5.SGK1經(jīng)雌二醇活化后可以使脂多糖處理所導致的增加的磷酸化的NF-κB蛋白下降以及活化的NF-κB蛋白下調(diào)(P0.01)。結(jié)論:1.蛻膜細胞中的SGK1經(jīng)雌二醇活化后促進細胞增殖,降低脂多糖引起的蛻膜細胞的凋亡。2.SGK1經(jīng)雌二醇活化后抑制蛻膜細胞NF-κB的活性,從而減少蛻膜細胞Th1型細胞因子的分泌,增加Th2型細胞因子的分泌,糾正脂多糖引起的免疫耐受的偏移,有利于正常妊娠的維持。
[Abstract]:The expression of the expression of SGK1 in Decidua Tissue in early abortion: by measuring the expression of serum and glucocorticoid regulated protein kinase 1 (SGK1) in the early decidual tissue of pregnancy, the difference of SGK1 expression in early spontaneous abortion and normal pregnancy decidua was compared, and SGK1 was investigated in the maternal fetal interface microenvironment during early pregnancy. Biological significance, materials and methods: 1. select 88 cases of unexplained spontaneous abortion in early pregnancy as experimental study group, 71 normal early pregnant women at the same time as control group.2. immunofluorescence and immunofluorescence technique to detect the expression of SGK1 in Decidua Tissue by.3.TRIZOL method to extract the total RNA of the uterus Decidua Tissue, retrotranscriptase The relative expression of SGK1 mRNA in two groups of uterine decidua tissues was measured by Real time PCR. The protein of human decidua tissue was extracted from the RIPA protein lysate of protease inhibitor, the tissue protein was quantified by BCA method. Western blot technique was used to detect the relative expression of SGK1 protein in human decidua tissue. Results: 1. early self There was no significant difference in age, number of gestational weeks, age of menarche, menstrual cycle, and the number of days. The levels of serum estradiol (E2) in patients with early spontaneous abortion were lower than those of normal pregnancy. The difference was statistically significant (p0.001).2. immunofluorescence and immunofluorescence found that SGK1 was in early spontaneous abortion patients. The mRNA level of SGK1 in Decidua Tissue of patients with early spontaneous abortion of.3. and normal pregnancy was lower than that in the Decidua Tissue of early normal pregnancy. The difference was statistically significant (P0.001) the total protein expression of SGK1 in the Decidua Tissue of early.4. patients with.4. was lower than that of normal pregnancy. The difference was statistically significant (P0.001). And the protein expression of SGK1 phosphorylation in the uterine decidua tissues of early spontaneous abortion patients was lower than those of normal pregnancy, and the difference was statistically significant (P0.001). This was in accordance with the expression trend of SGK1 total protein in the two groups, which was consistent with the phosphorylated eggs of SGK1 in the uterine decidua tissues of patients with early spontaneous abortion. The ratio of white to total protein was lower than that in normal pregnancy group, the difference was statistically significant (p0.001). Conclusion: the expression of SGK1, total protein and activated protein in decidua tissues of early pregnancy induced abortion patients with.2. decreased. The decrease of the second part of SGK1 and the occurrence of early spontaneous abortion in the decidua tissues of early spontaneous abortion patients. Objective: by establishing ecutic cells in vitro, the changes in the activity of SGK1 protein in decidua cells are the eye points, and the mechanism of early spontaneous abortion is further explored, and new ideas and ways are provided for the pathogenesis and prevention and treatment of pathological pregnancy. Materials and methods: 1. the culture of ecutic cells in vitro and immunization of the ecutic cells in vitro Fluorescence assay to identify the proliferation activity of decidual cells by.2.MTT colorimetric assay, Annexin V-FITC/PI detection of.3. targeting SGK1 siRNA interference in decidual cell apoptosis the effect of SGK1 on the apoptosis of decidua cells.4. LPS treated decidual cells to establish spontaneous abortion in vitro cell model.5. enzyme linked immunosorbent assay in decidua cell supernatant Results: the apoptosis of the uterus decidua cells after the transfection of 1. targeted SGK1 siRNA was higher than that of the control group decidua cells. The difference was statistically significant (P0.01), the expression of SGK1 in the decidual cells stimulated by estradiol was higher than that of the control group. The difference was statistically significant (P0.01).3.SGK1 was activated by estradiol to make lipopolysaccharide. The proliferation activity of decidual cells caused by decidua caused by the activation of.SGK1 caused a certain degree of recovery of the apoptosis of the decidua cells caused by lipopolysaccharide, and the difference was statistically significant (P0.01), and the reduction of the anti apoptotic gene BCL-2 and XIAP of the decidual cells caused by lipopolysaccharide recovered to a certain extent. There were statistically significant (P0.01) 4.SGK1 activation by estradiol to increase the secretion of IL-4 and IL-5 cytokines, the difference was statistically significant (P0.001 and P0.01), and the secretion of IFN- gamma cytokines after SGK1 activation was statistically significant (P0.001), and the ratio of activation up to IL-4/IFN- gamma of SGK1 was statistically significant (P). 0.01).5.SGK1 can increase the increased phosphorylation of NF- kappa B protein induced by lipopolysaccharide treatment and the activation of NF- kappa B protein down regulation (P0.01). Conclusion: SGK1 in the 1. decidual cells promotes cell proliferation after estradiol activation, and reduces the apoptosis of the decidual cells induced by lipopolysaccharide after the activation of estradiol activation. The activity of NF- kappa B in decidual cells reduces the secretion of Th1 - type cytokines in decidual cells, increases the secretion of Th2 - type cytokines, and corrects the migration of immune tolerance induced by lipopolysaccharide, which is beneficial to the maintenance of normal pregnancy.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R714.21

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王珊;趙躍然;焦玉蓮;王來誠;許成巖;陳子江;;殺傷細胞免疫球蛋白樣受體基因多態(tài)性與不明原因復發(fā)性早期自然流產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究[J];中華微生物學和免疫學雜志;2005年12期

2 史延超;郭志偉;李慧娟;;早期自然流產(chǎn)夫婦78對臨床分析[J];中國婦幼保健;2008年05期

3 王大章;;早期自然流產(chǎn)102例相關(guān)因素分析及預防探討[J];河南醫(yī)學研究;2010年01期

4 陳莉;張艷;張珠蘭;;血清中胰島素樣生長因子系統(tǒng)與早期自然流產(chǎn)相關(guān)性研究[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2011年02期

5 高海玲;侯興華;管英俊;;育齡婦女早期自然流產(chǎn)危險因素的Logistic回歸分析[J];中國科技信息;2012年01期

6 曾貴紅;唐婕;周鳳;;血清中胰島素樣生長因子系統(tǒng)與早期自然流產(chǎn)的關(guān)系[J];中國當代醫(yī)藥;2012年20期

7 沙愛國;;早期自然流產(chǎn)婦女的非手術(shù)治療對生育的影響[J];國外醫(yī)學.婦產(chǎn)科學分冊;1992年04期

8 陳靜;孕早期自然流產(chǎn)的預測[J];國外醫(yī)學(計劃生育分冊);1995年03期

9 徐苗厚,張振國,呂淑華;反復性早期自然流產(chǎn)的病因與治療進展(下)[J];中級醫(yī)刊;1997年08期

10 陳一紅;陳麗紅;胡繼芬;陳虹;陳余朋;;白細胞介素-18與核轉(zhuǎn)錄因子以及誘導型一氧化氮合酶在早期自然流產(chǎn)患者中的表達[J];中國臨床藥理學雜志;2014年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉欣燕;邊旭明;范光升;郝娜;周京;;453例早期自然流產(chǎn)絨毛的細胞遺傳學分析[A];中華醫(yī)學會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學術(shù)大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

2 樊偉;李尚為;汪燕;;一氧化氮合酶3基因多態(tài)性與復發(fā)性早期自然流產(chǎn)的關(guān)系[A];第一屆中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會、中國動物學會生殖生物學分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

3 王道萍;;黃體功能不健致反復性早期自然流產(chǎn)28例分析[A];全國第七屆中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科學術(shù)會議論文及摘要集[C];2007年

4 孫平;王玉;楊瑞芳;張麗華;李娜;;864對早期自然流產(chǎn)夫婦細胞遺傳學分析[A];中華醫(yī)學會第十次全國婦產(chǎn)科學術(shù)會議產(chǎn)科會場（產(chǎn)科學組、妊高癥學組）論文匯編[C];2012年

5 孫永玉;夏革清;;早期自然流產(chǎn)絨毛組織中細胞凋亡的發(fā)生及其機制[A];第五屆全國優(yōu)生科學大會論文匯編[C];2000年

6 鐘福春;涂向東;鄭德柱;林炎鴻;蘭風華;;MLPA在早期自然流產(chǎn)胚胎絨毛染色體異�？焖贆z測中的應用[A];第九屆全國遺傳病診斷與產(chǎn)前診斷學術(shù)交流會暨產(chǎn)前診斷和醫(yī)學遺傳學新技術(shù)研討會論文集[C];2014年

7 鄒剛;陸建英;駱敏;郭銘;段濤;賀光;;利用微衛(wèi)星診斷早期自然流產(chǎn)絨毛組織染色體數(shù)目異常的研究[A];中華醫(yī)學會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學術(shù)大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

8 章勤;李陽洋;;236例自然流產(chǎn)絨毛染色體核型分析與中醫(yī)證型及相關(guān)因素研究[A];浙江省中醫(yī)藥學會第二屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨2012年學術(shù)年會文集[C];2012年

9 徐芳;狄玉芬;易朵;李麓蕓;盧光t;林戈;譚躍球;;MLPA結(jié)合FISH技術(shù)是一種檢測早期自然流產(chǎn)胚胎染色體異常的高性價比技術(shù)策略[A];第九屆全國遺傳病診斷與產(chǎn)前診斷學術(shù)交流會暨產(chǎn)前診斷和醫(yī)學遺傳學新技術(shù)研討會論文集[C];2014年

10 顏衛(wèi)華;林愛芬;李伯利;陳葆國;周美英;戴美珍;;NK細胞受體KIR2DL4在早期妊娠中的作用[A];中國細胞生物學學會醫(yī)學細胞生物學學術(shù)大會論文集[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 ;受孕2～6周，，吃藥最危險[N];醫(yī)藥導報;2008年

相關(guān)博士學位論文 前3條

1 樓毅云;血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶1在早期自然流產(chǎn)中的機制研究[D];浙江大學;2017年

2 劉欣燕;早期自然流產(chǎn)發(fā)病原因的初步探討[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

3 徐廣立;環(huán)境與基因的交互作用對早期自然流產(chǎn)的影響[D];鄭州大學;2014年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 馬妍;長鏈非編碼RNA H19對早期絨毛發(fā)育的作用及分子機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

2 王珊;殺傷細胞免疫球蛋白樣受體基因多態(tài)性與不明原因復發(fā)性早期自然流產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究[D];山東大學;2005年

3 張旭東;胰島素樣生長因子-II及基質(zhì)金屬蛋白酶-9與早期自然流產(chǎn)的相關(guān)性研究[D];泰山醫(yī)學院;2012年

4 趙靈琴;鉛、汞等重金屬元素和微量元素對胎兒先天畸形及早期自然流產(chǎn)影響的流行病學研究[D];復旦大學;2008年

5 王錫瑩;早期自然流產(chǎn)中醫(yī)證型分布及相關(guān)因素分析[D];成都中醫(yī)藥大學;2013年

6 李媛;不明原因早期自然流產(chǎn)體外反應系統(tǒng)中Th1/Th2型細胞因子的表達[D];四川大學;2004年

7 韓士廣;早期自然流產(chǎn)與精子DNA完整率的相關(guān)性研究[D];中國醫(yī)科大學;2010年

8 郭麗娜;熒光原位雜交檢測早期自然流產(chǎn)絨毛染色體數(shù)目異常[D];天津醫(yī)科大學;2011年

9 劉洪梅;表皮生長因子及其受體與早期自然流產(chǎn)相關(guān)性研究[D];安徽醫(yī)科大學;2005年

10 張艷霞;樹突狀細胞亞群與早期自然流產(chǎn)的相關(guān)性研究[D];南華大學;2011年

本文編號：2137626