【摘要】：目的癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,以反復(fù)的自發(fā)發(fā)作為特征,嚴重危害患者身心健康。目前癲癇的主要治療方法是手術(shù)和藥物治療,但約有30%癲癇病人對于抗癲癇藥物治療無效,被認為是難治性癲癇。目前,手術(shù)切除致癇灶是治療難治性癲癇的首選方法,但手術(shù)可帶來創(chuàng)傷引起偏癱、偏盲、記憶損害等。其中,顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy,TLE)是難治性癲癇中最常見的類型,采用藥物及手術(shù)治療都難以達到根治并修復(fù)致癇灶的效果。因此,探索新的方法用于治療TLE,是臨床治療的迫切需要。隨著干細胞技術(shù)的不斷完善,干細胞以其獨特的優(yōu)勢在再生醫(yī)學(xué)研究中展現(xiàn)出巨大的治療潛能。神經(jīng)干細胞(neuralstemcells,NSCs)是一類可多向分化成中樞神經(jīng)系統(tǒng)各種類型的細胞,已逐步被用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床前實驗研究。誘導(dǎo)多功能干細胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)加入特定的轉(zhuǎn)錄因子,將人/動物體細胞重新編程為具有多向分化潛能的干細胞。iPSCs可具有多種分化潛能,且不受倫理、免疫排斥等諸多方面的限制,因此在神經(jīng)系統(tǒng)疾病也有一定發(fā)展?jié)摿�。本研究采用NSCs和iPSCs移植方法,利用大鼠TLE浙江大學(xué)博士學(xué)位論文 中文摘要模型,應(yīng)用18F-FDG小動物正電子發(fā)射計算機斷層顯像(micro positron emission tomography,micro-PET)聯(lián)合視頻腦電(video-electroencephalography,Video-EEG),時空動態(tài)的共同監(jiān)測比較移植后干細胞治療TLE的功能代謝改善情況,可望為臨床TLE干細胞治療提供指導(dǎo)。方法通過在海馬區(qū)立體定向注射紅藻氨酸(kainicacid,KA)建立TLE大鼠模型,將28只雄性SD大鼠隨機分為4組(每組7只):NSCs治療組、iPSCs治療組、癲癇對照(E-CTR)組和正常對照(CTR)組。在模型建立成功后的24h及干細胞移植后1、3、5、6周分別行Video-EEG及連續(xù)的18F-FDGmicro-PET監(jiān)測。最后一次PET掃描結(jié)束后,將所有大鼠灌注取腦并行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色、免疫組織化學(xué)及免疫熒光分析。選取的指標如下:神經(jīng)元特異性核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、r-氨基丁酸(gamma amino butyric acid,GABA)、神經(jīng)肽 Y(neuropeptideY,NPY)和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白 1(GlucoseTransporter1,GLUT-1)。結(jié)果Video-EEG監(jiān)測發(fā)現(xiàn):干細胞治療后,在第3、5、6周,NSCs和iPSCs治療組癲癇發(fā)作頻率均明顯低于E-CTR組(p0.05);NSCs組的癲癇發(fā)作頻率在第5周時明顯低于iPSCs組(p0.05);iPSCs組和NSCs組的癲癇持續(xù)時間在第6周時均明顯低于E-CTR組(p0.05)。18F-FDG PET結(jié)果分析:在第3周時,NSCs和iPSCs治療組的18F-FDG攝取值均明顯高于E-CTR組(P0.05),NSCs組高于iPSCs組,但無統(tǒng)計學(xué)差異;NSCs組的18F-FDG攝取值在第5周時顯著高于其它三組(P值均小于0.05)且在第6周時顯著高于E-CTR組(P0.05)。浙江大學(xué)博士學(xué)位論文 中文摘要HE染色結(jié)果顯示:NSCs組雙側(cè)CA1區(qū)的神經(jīng)元數(shù)量明顯高于E-CTR組(P0.05),iPSCs組右側(cè)CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量明顯高于E-CTR組(P0.05)。左側(cè)CA3區(qū)NSCs組和iPSCs組神經(jīng)元數(shù)量均明顯高于E-CTR組(P0.05)。免疫組織化學(xué)及免疫熒光檢查證實移植的NSCs和iPSCs在腦內(nèi)存活、定植并分化為NeuN、GFAP、GABA、NPY 和 GLUT-1。此外,E-CTR組右側(cè)海馬CA1區(qū)18F-FDG攝取值與GFAP(P=0.037)呈顯著正相關(guān),與GLUT-1(P = 0.021)呈顯著負相關(guān)。結(jié)論18F-FDGmicro-PET、VEEG、免疫組化和免疫熒光的聯(lián)合研究證實,NSCs和iPSCs移植后能夠促進癲癇大鼠腦損傷區(qū)的代謝和功能恢復(fù)。與iPSCs相比,NSCs移植降低癲癇的發(fā)作頻率,更能促進癲癇大鼠腦葡萄糖代謝的恢復(fù)。
[Abstract]:Objective To study the effect of new methods on the treatment of intractable epilepsy , which is the most common type in the treatment of intractable epilepsy . NeuN ) , acidic protein ( GFAP ) , r - aminobutyric acid ( GABA ) , neuropeptides Y ( NPY ) and glucose transporter 1 ( GlucoseTransporter1 , GLUT - 1 ) . Results Compared with the E - CTR group ( P = 0.037 ) , there was a significant positive correlation between the uptake of 18F - FDG uptake and GFAP , GABA , NPY and GLUT - 1 at the 5th week .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742.1;R817.4

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本文編號：2136744