本文選題：膽囊癌 + microRNA-21��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景:膽囊癌(Gallbladder Carcinoma,GBC)是常見(jiàn)的膽道系統(tǒng)腫瘤,早期無(wú)特異性的臨床表現(xiàn),發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已到臨床中晚期,預(yù)后較差。臨床上GBC確診時(shí),多半已經(jīng)發(fā)生了鄰近器官浸潤(rùn)和/或通過(guò)血液系統(tǒng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,很難進(jìn)行根治性手術(shù),且手術(shù)效果較差,術(shù)后五年生存率不足5%。近年的流行病學(xué)調(diào)查調(diào)查顯示我國(guó)大部分地區(qū)GBC發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。因此,提高GBC患者的遠(yuǎn)期生存率除了要在手術(shù)結(jié)合放化療方面進(jìn)一步規(guī)范和探索外,還應(yīng)該在分子水平上進(jìn)一步研究GBC的發(fā)生、發(fā)展及其侵襲的機(jī)制。通過(guò)在分子水平的研究、探索GBC的生物學(xué)行為,尋找特異性生物學(xué)標(biāo)記提高早期診斷率,針對(duì)發(fā)病基因進(jìn)行分子靶向治療并在預(yù)后評(píng)估等方面進(jìn)行探索。這也是目前GBC分子生物學(xué)研究的重點(diǎn)、熱點(diǎn)方向之一。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一類(lèi)內(nèi)源性非編碼短鏈RNA,約22個(gè)核苷酸大小,它主要通過(guò)與靶m RNA的3’UTR不完全性互補(bǔ)配對(duì)抑制m RNA的翻譯,介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控。mi RNA不僅在細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生物學(xué)功能起到重要的調(diào)控作用,而且和腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)效應(yīng)密切相關(guān)。PTEN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因編碼的蛋白具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重特異性磷酸酶活性,與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本課題組發(fā)現(xiàn)在GBC-SD細(xì)胞系中mi RNA-21表達(dá)水平與PTEN表達(dá)密切相關(guān),并進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)在GBC-SD細(xì)胞系中PTEN為mi RNA-21靶基因,初步認(rèn)為mi RNA-21通過(guò)抑制PTEN基因影響了GBC發(fā)生、發(fā)展的可能機(jī)制;同時(shí)mi RNA-21與細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1和occludin表達(dá)密切相關(guān),提示mi RNA-21可能參與GBC的侵襲與遷移。這為進(jìn)一步研究mi RNA-21在GBC生物功能的機(jī)制拓寬了思路。方法:1.在GBC-SD細(xì)胞系沉默micro RNA 21;1)沉默mi RNA-21后分別在m RNA和蛋白水平檢測(cè)PTEN、緊密連接相關(guān)蛋白Occludin、ZO-1蛋白表達(dá)水平;2)在GBC-SD細(xì)胞系過(guò)表達(dá)/抑制mi RNA-21表達(dá),分別檢測(cè)PTEN的蛋白水平和m RNA水平變化;2.Transwell assay檢測(cè)GBC-SD細(xì)胞系沉默mi RNA-21后細(xì)胞遷移與侵襲能力;3.熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PTEN與mi RNA-21的相互作用機(jī)制;4.收集67例GBC臨床標(biāo)本,原位雜交技術(shù)檢測(cè)mi RNA-21,免疫組化SP法檢測(cè)PTEN、ZO-1和occludin表達(dá)水平;5.采用對(duì)mi RNA-21與臨床參數(shù)、PTEN等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析;Kaplan-Meier方法進(jìn)行生存分析,并采用Log-rank檢驗(yàn)比較兩組生存率;采用Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型進(jìn)行各個(gè)協(xié)變量的聯(lián)合效應(yīng)分析。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.發(fā)現(xiàn)micro RNA 21與PTEN、緊密連接蛋白之間的關(guān)系:1)沉默micro RNA 21后,PTEN表達(dá)上調(diào),Occludin、ZO-1蛋白水平升高;2)沉默micro RNA 21后,發(fā)現(xiàn)Occludin、ZO-1m RNA表達(dá)上升。2.證實(shí)mi RNA-21與PTEN在GBC中的表達(dá)負(fù)相關(guān):1)GBC-SD細(xì)胞中過(guò)表達(dá)mi RNA-21可下調(diào)PTEN的m RNA和蛋白表達(dá);2)GBC-SD細(xì)胞中抑制mi RNA-21可上調(diào)PTEN的m RNA和蛋白表達(dá);3)GBC-SD細(xì)胞中抑制mi RNA-21后,細(xì)胞遷移與侵襲能力明顯減弱;4)PTEN的3’UTR是mi RNA-21的靶序列;5)GBC患者術(shù)后生存結(jié)果分析顯示,mi RNA-21表達(dá)與患者預(yù)后呈反比。結(jié)論:1.在GBC-SD細(xì)胞中mi RNA21可被沉默;體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)mi RNA21基因表達(dá)與PTEN、緊密連接蛋白表達(dá)水平密切相關(guān);在進(jìn)一步的GBC-SD細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明沉默mi RNA21后,GBC侵襲和轉(zhuǎn)移能力減弱;2.初步認(rèn)為PTEN的3’UTR是mi RNA-21在GBC細(xì)胞中作用的靶區(qū)域,mi RNA21可通過(guò)抑制靶基因PTEN的功能參與GBC的發(fā)生、發(fā)展;GBC病人癌組織mi RNA21表達(dá)上調(diào),其表達(dá)與腫瘤的TNM分期相關(guān),且高表達(dá)患者生存期短,預(yù)后差。mi RNA21或可成為GBC治療的靶目標(biāo)。
[Abstract]:Background: Gallbladder Carcinoma (GBC) is a common biliary system tumor. It has no specific clinical manifestations in the early stage. It is often found in the middle and late stages of the clinic, and the prognosis is poor. In the clinical GBC diagnosis, most of them have occurred adjacent organ infiltration and / or distant metastasis through the blood system, so it is difficult to perform radical operation. The effect of the operation is poor and the five year survival rate is less than five years after the operation. The epidemiological survey in recent years shows that the incidence of GBC in most areas of our country is obviously rising. Therefore, in addition to further standardization and exploration in the field of operation combined with radiotherapy and chemotherapy, the forward survival rate of GBC patients should be further studied at the molecular level of GBC. The mechanism of occurrence, development and invasion is explored by molecular level research, to explore the biological behavior of GBC, to find specific biological markers to improve early diagnosis rate, to explore the molecular targeting therapy and to evaluate the prognosis of the disease genes, which is also the focus of the current GBC molecular biology research. The small RNA (micro RNA, MI RNA) is a class of endogenous non coding short chain RNA, about 22 nucleotides size. It mainly mediates posttranscriptional gene regulation and regulates the biological functions of cell proliferation, differentiation and withering by inhibiting the translation of M RNA by complementary pairing with the 3 'UTR incompleteness of the target M RNA. The biological effects such as tumor development, metastasis and other biological effects are closely related to.PTEN, the first protein encoded by the.PTEN gene with double phosphatase activity, which has double specific phosphatase activity of the lipid phosphatase and protein phosphatase, is closely related to the development of a variety of tumors. The expression level of MI RNA-21 in the GBC-SD cell line is closely related to the expression of PTEN. Further experiments have proved that PTEN is the target gene of MI RNA-21 in the GBC-SD cell line. It is preliminarily believed that MI RNA-21 affects the occurrence of GBC and the possible mechanism of development by inhibiting PTEN gene. Mi RNA-21 may be involved in the invasion and migration of GBC. This is a way to further study the mechanism of MI RNA-21 in the biological function of GBC. Method: 1. in GBC-SD cell line silencing micro RNA 21; 1) mi RNA-21 after MI RNA-21, respectively, connected to the associated egg white, protein expression level; 2) in the cell To express / inhibit the expression of MI RNA-21, the protein level of PTEN and the level of M RNA were detected, and 2.Transwell assay was used to detect the cell migration and invasion ability of GBC-SD cell line after MI RNA-21. 3. luciferase test was used to detect the interaction mechanism between PTEN and MI. The expression level of PTEN, ZO-1 and occludin was detected by immunohistochemical SP method; 5. the correlation analysis between MI RNA-21 and clinical parameters, PTEN and other indexes was used. Kaplan-Meier method was used for survival analysis, and the Log-rank test was used to compare the survival rate of the two groups. The joint effect analysis of each co variable by Cox risk proportion model was different. Results: 1. the relationship between micro RNA 21 and PTEN, close connexin was found: 1) after silent micro RNA 21, PTEN expression was up-regulated, Occludin, ZO-1 protein level increased; 2) after silent micro RNA 21, Occludin, ZO-1m expressions were found to be negatively correlated with the expression in the expression of 1) A-21 can down regulate the m RNA and protein expression of PTEN; 2) the inhibition of MI RNA-21 in GBC-SD cells can up regulate m RNA and protein expression of PTEN; 3) the cell migration and invasiveness decreased significantly in GBC-SD cells; 4) 3 'is a target sequence; 5) the analysis of postoperative survival results showed that the prognosis of the patients was and the prognosis of the patients. Inversely. Conclusion: 1. mi RNA21 in GBC-SD cells can be silenced; in vitro experiments confirmed that the expression of MI RNA21 gene is closely related to the expression level of PTEN and close connexin; in further GBC-SD cells and animal experiments, the invasion and metastasis ability of GBC is weakened after the silencing of MI RNA21, and 2. preliminarily believed that PTEN 3 'UTR is in the cells. The target area, MI RNA21, can be involved in the development of GBC by inhibiting the function of the target gene PTEN. The expression of MI RNA21 in the cancer tissue of GBC patients is up regulated, its expression is related to the TNM staging of the tumor, and the high expression of the patient's survival time is short, the prognosis is poor.Mi RNA21 or can be the target target of GBC treatment.

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.8

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本文編號(hào)：1800961