本文選題：膽囊癌 + microRNA-21��； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：研究背景:膽囊癌(Gallbladder Carcinoma,GBC)是常見的膽道系統(tǒng)腫瘤,早期無特異性的臨床表現(xiàn),發(fā)現(xiàn)時往往已到臨床中晚期,預后較差。臨床上GBC確診時,多半已經(jīng)發(fā)生了鄰近器官浸潤和/或通過血液系統(tǒng)發(fā)生遠處轉移,很難進行根治性手術,且手術效果較差,術后五年生存率不足5%。近年的流行病學調查調查顯示我國大部分地區(qū)GBC發(fā)病率呈明顯上升趨勢。因此,提高GBC患者的遠期生存率除了要在手術結合放化療方面進一步規(guī)范和探索外,還應該在分子水平上進一步研究GBC的發(fā)生、發(fā)展及其侵襲的機制。通過在分子水平的研究、探索GBC的生物學行為,尋找特異性生物學標記提高早期診斷率,針對發(fā)病基因進行分子靶向治療并在預后評估等方面進行探索。這也是目前GBC分子生物學研究的重點、熱點方向之一。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一類內源性非編碼短鏈RNA,約22個核苷酸大小,它主要通過與靶m RNA的3’UTR不完全性互補配對抑制m RNA的翻譯,介導轉錄后基因調控。mi RNA不僅在細胞的增殖、分化和凋亡等生物學功能起到重要的調控作用,而且和腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉移等生物學效應密切相關。PTEN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因編碼的蛋白具有脂質磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重特異性磷酸酶活性,與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。本課題組發(fā)現(xiàn)在GBC-SD細胞系中mi RNA-21表達水平與PTEN表達密切相關,并進一步實驗證實在GBC-SD細胞系中PTEN為mi RNA-21靶基因,初步認為mi RNA-21通過抑制PTEN基因影響了GBC發(fā)生、發(fā)展的可能機制;同時mi RNA-21與細胞緊密連接蛋白ZO-1和occludin表達密切相關,提示mi RNA-21可能參與GBC的侵襲與遷移。這為進一步研究mi RNA-21在GBC生物功能的機制拓寬了思路。方法:1.在GBC-SD細胞系沉默micro RNA 21;1)沉默mi RNA-21后分別在m RNA和蛋白水平檢測PTEN、緊密連接相關蛋白Occludin、ZO-1蛋白表達水平;2)在GBC-SD細胞系過表達/抑制mi RNA-21表達,分別檢測PTEN的蛋白水平和m RNA水平變化;2.Transwell assay檢測GBC-SD細胞系沉默mi RNA-21后細胞遷移與侵襲能力;3.熒光素酶實驗檢測PTEN與mi RNA-21的相互作用機制;4.收集67例GBC臨床標本,原位雜交技術檢測mi RNA-21,免疫組化SP法檢測PTEN、ZO-1和occludin表達水平;5.采用對mi RNA-21與臨床參數(shù)、PTEN等指標進行相關性分析;Kaplan-Meier方法進行生存分析,并采用Log-rank檢驗比較兩組生存率;采用Cox風險比例模型進行各個協(xié)變量的聯(lián)合效應分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果:1.發(fā)現(xiàn)micro RNA 21與PTEN、緊密連接蛋白之間的關系:1)沉默micro RNA 21后,PTEN表達上調,Occludin、ZO-1蛋白水平升高;2)沉默micro RNA 21后,發(fā)現(xiàn)Occludin、ZO-1m RNA表達上升。2.證實mi RNA-21與PTEN在GBC中的表達負相關:1)GBC-SD細胞中過表達mi RNA-21可下調PTEN的m RNA和蛋白表達;2)GBC-SD細胞中抑制mi RNA-21可上調PTEN的m RNA和蛋白表達;3)GBC-SD細胞中抑制mi RNA-21后,細胞遷移與侵襲能力明顯減弱;4)PTEN的3’UTR是mi RNA-21的靶序列;5)GBC患者術后生存結果分析顯示,mi RNA-21表達與患者預后呈反比。結論:1.在GBC-SD細胞中mi RNA21可被沉默;體外實驗證實mi RNA21基因表達與PTEN、緊密連接蛋白表達水平密切相關;在進一步的GBC-SD細胞和動物實驗證明沉默mi RNA21后,GBC侵襲和轉移能力減弱;2.初步認為PTEN的3’UTR是mi RNA-21在GBC細胞中作用的靶區(qū)域,mi RNA21可通過抑制靶基因PTEN的功能參與GBC的發(fā)生、發(fā)展;GBC病人癌組織mi RNA21表達上調,其表達與腫瘤的TNM分期相關,且高表達患者生存期短,預后差。mi RNA21或可成為GBC治療的靶目標。
[Abstract]:Background: Gallbladder Carcinoma (GBC) is a common biliary system tumor. It has no specific clinical manifestations in the early stage. It is often found in the middle and late stages of the clinic, and the prognosis is poor. In the clinical GBC diagnosis, most of them have occurred adjacent organ infiltration and / or distant metastasis through the blood system, so it is difficult to perform radical operation. The effect of the operation is poor and the five year survival rate is less than five years after the operation. The epidemiological survey in recent years shows that the incidence of GBC in most areas of our country is obviously rising. Therefore, in addition to further standardization and exploration in the field of operation combined with radiotherapy and chemotherapy, the forward survival rate of GBC patients should be further studied at the molecular level of GBC. The mechanism of occurrence, development and invasion is explored by molecular level research, to explore the biological behavior of GBC, to find specific biological markers to improve early diagnosis rate, to explore the molecular targeting therapy and to evaluate the prognosis of the disease genes, which is also the focus of the current GBC molecular biology research. The small RNA (micro RNA, MI RNA) is a class of endogenous non coding short chain RNA, about 22 nucleotides size. It mainly mediates posttranscriptional gene regulation and regulates the biological functions of cell proliferation, differentiation and withering by inhibiting the translation of M RNA by complementary pairing with the 3 'UTR incompleteness of the target M RNA. The biological effects such as tumor development, metastasis and other biological effects are closely related to.PTEN, the first protein encoded by the.PTEN gene with double phosphatase activity, which has double specific phosphatase activity of the lipid phosphatase and protein phosphatase, is closely related to the development of a variety of tumors. The expression level of MI RNA-21 in the GBC-SD cell line is closely related to the expression of PTEN. Further experiments have proved that PTEN is the target gene of MI RNA-21 in the GBC-SD cell line. It is preliminarily believed that MI RNA-21 affects the occurrence of GBC and the possible mechanism of development by inhibiting PTEN gene. Mi RNA-21 may be involved in the invasion and migration of GBC. This is a way to further study the mechanism of MI RNA-21 in the biological function of GBC. Method: 1. in GBC-SD cell line silencing micro RNA 21; 1) mi RNA-21 after MI RNA-21, respectively, connected to the associated egg white, protein expression level; 2) in the cell To express / inhibit the expression of MI RNA-21, the protein level of PTEN and the level of M RNA were detected, and 2.Transwell assay was used to detect the cell migration and invasion ability of GBC-SD cell line after MI RNA-21. 3. luciferase test was used to detect the interaction mechanism between PTEN and MI. The expression level of PTEN, ZO-1 and occludin was detected by immunohistochemical SP method; 5. the correlation analysis between MI RNA-21 and clinical parameters, PTEN and other indexes was used. Kaplan-Meier method was used for survival analysis, and the Log-rank test was used to compare the survival rate of the two groups. The joint effect analysis of each co variable by Cox risk proportion model was different. Results: 1. the relationship between micro RNA 21 and PTEN, close connexin was found: 1) after silent micro RNA 21, PTEN expression was up-regulated, Occludin, ZO-1 protein level increased; 2) after silent micro RNA 21, Occludin, ZO-1m expressions were found to be negatively correlated with the expression in the expression of 1) A-21 can down regulate the m RNA and protein expression of PTEN; 2) the inhibition of MI RNA-21 in GBC-SD cells can up regulate m RNA and protein expression of PTEN; 3) the cell migration and invasiveness decreased significantly in GBC-SD cells; 4) 3 'is a target sequence; 5) the analysis of postoperative survival results showed that the prognosis of the patients was and the prognosis of the patients. Inversely. Conclusion: 1. mi RNA21 in GBC-SD cells can be silenced; in vitro experiments confirmed that the expression of MI RNA21 gene is closely related to the expression level of PTEN and close connexin; in further GBC-SD cells and animal experiments, the invasion and metastasis ability of GBC is weakened after the silencing of MI RNA21, and 2. preliminarily believed that PTEN 3 'UTR is in the cells. The target area, MI RNA21, can be involved in the development of GBC by inhibiting the function of the target gene PTEN. The expression of MI RNA21 in the cancer tissue of GBC patients is up regulated, its expression is related to the TNM staging of the tumor, and the high expression of the patient's survival time is short, the prognosis is poor.Mi RNA21 or can be the target target of GBC treatment.

【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.8

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本文編號：1800961