本文選題：人類獲得性免疫缺陷病毒 + 快速檢測方法�。� 參考：《中國疾病預(yù)防控制中心》2017年博士論文

【摘要】：研究背景利用實驗室檢測技術(shù)從橫斷面人群樣本中獲得HIV-1新發(fā)感染率,對于監(jiān)測疾病流行動態(tài),評價干預(yù)效果,及時發(fā)現(xiàn)高危人群等具有重要意義。目前各國普遍應(yīng)用的新發(fā)感染檢測是酶聯(lián)免疫方法,如BED捕獲酶聯(lián)免疫法(BED capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)、親和力方法等,均存在著耗時長,價格高,樣本集中檢測時工作量大等問題。本課題組前期建立了基于金標(biāo)銀染免疫滲濾技術(shù)能同時篩查HIV-1常規(guī)抗體和檢測新發(fā)感染的快速方法,初步評價顯示與商品化的酶聯(lián)免疫方法具有較好的一致性和相關(guān)性,但仍沒有達(dá)到實際應(yīng)用效果。本研究在優(yōu)化該方法的基礎(chǔ)上,建立同時進(jìn)行HIV-1/2常規(guī)抗體篩查和新發(fā)感染檢測的快速方法,并嘗試應(yīng)用于哨點樣本,獲取HIV新發(fā)感染率,開發(fā)更經(jīng)濟(jì)、有效、實用的新發(fā)感染檢測方法。研究目的一、建立和優(yōu)化能同時進(jìn)行HIV-1型和2型(HIV-1/2)常規(guī)抗體篩查和新發(fā)感染檢測的快速方法;二、獲取新發(fā)感染快速檢測方法的兩個參數(shù)(窗口期和假近期感染率)及其適用條件;三、評價快速檢測方法進(jìn)行常規(guī)HIV-1/2抗體篩查和新發(fā)感染檢測的性能,并與現(xiàn)有的商品化試劑進(jìn)行比較,開發(fā)可實時監(jiān)測HIV新發(fā)感染的快速方法;初步應(yīng)用快速方法檢測我國江西和云南省哨點橫斷面人群樣本,進(jìn)行新發(fā)感染應(yīng)用性研究,為今后該方法的使用和可能存在的問題提供理論依據(jù)。研究方法一、方法建立:以HIV gp41/gp36重組抗原和HIV-1 M組多亞型基因重組gp41抗原(rIDR-M)作為探針,應(yīng)用金標(biāo)銀染免疫滲濾快速檢測技術(shù),建立可同時進(jìn)行HIV-1/2常規(guī)抗體篩查和HIV-1新發(fā)感染的快速檢測方法,優(yōu)化試驗體系后,用已知感染時間的HIV-1抗體陽性和HIV-2抗體陽性樣本進(jìn)行初步驗證;二、方法評價:建立評價血清盤一陽轉(zhuǎn)血清盤(包括系列陽轉(zhuǎn)樣本250份,感染時間大于一年的樣本414份)和常規(guī)血清盤(包括NARL親和力血清樣本76份、Boca盤樣本133份,國家快速檢測考核品樣本42份和試劑評估血清盤樣本403份,以及HIV-2樣本2份),其中陽轉(zhuǎn)血清盤用于評價快速檢測方法檢測新發(fā)感染的基本性能,常規(guī)血清盤用于評價快速檢測方法的總體性能。用快速檢測方法分別對血清盤進(jìn)行盲法檢測,對檢測結(jié)果與現(xiàn)有的商品化試劑進(jìn)行比對分析,以窗口期和假近期感染率兩個參數(shù)評價快速方法檢測新發(fā)感染的基本性能,以方法間的相關(guān)性、一致性、檢測靈敏度、特異性和功效性等指標(biāo)評價新建方法的總體性能;三、應(yīng)用研究:選取2014年江西省和2011年云南省HIV國家級哨點樣本進(jìn)行應(yīng)用性評估。用快速檢測方法檢測兩個省哨點DUS、MSM、FSW和STD四類人群的新發(fā)感染樣本(江西省127份,云南省561份)。將檢測結(jié)果分別與LAg-Avidity EIA和BED CEIA的檢測結(jié)果進(jìn)行比較,分別以相關(guān)性和一致率等指標(biāo)進(jìn)行評價。進(jìn)一步分析2011年云南省哨點樣本,按照世界衛(wèi)生組織推薦的實驗室檢測方法計算HIV新發(fā)感染率的公式,比較三種方法在該樣本中計算HIV-1新發(fā)感染率的差異。另外,通過對117份抗病素治療樣本的檢測,分析抗病素治療對快速檢測方法的誤判情況。研究結(jié)果一、鑒定和純化了 rIDR-M蛋白;確定HIV-1/2重組抗原以0.5 mg/ml作為包被濃度時檢測信號最佳,此探針的Cutoff值為4.00;同時將15.3 μg/ml的rIDR-M抗原制備滲濾卡,用新構(gòu)建的快速方法(DIGSSA)檢測基本血清盤(包括已知HIV-1感染時間的陽性樣本5份、HIV-2抗體陽性血清1份和陰性樣本1份),結(jié)果全部判讀正確;密封保存的滲濾卡在37℃內(nèi)可保存9天,即4度可保存約一年。二、快速方法的rIDR-M抗原探針的Cutoff值為3.50時區(qū)分新發(fā)和長期感染能力最佳,此時新發(fā)感染快速方法的窗口期為176天,假近期感染率為2.17%(9/414,95%CI 0.80%-3.58%);進(jìn)一步評價該方法檢測新發(fā)感染的性能,其與LAg-AvidityEIA的符合率為96.78%(317/346),且兩方法具有非常好的一致性和相關(guān)性(Kappa=0.81,R2=0.9678),與BED CEIA的符合率為92.10%(177/213),兩方法也具有較好的一致性和相關(guān)性(Kappa=0.59,R2=0.9323);快速檢測方法常規(guī)HIV-1/2抗體篩查的敏感性為100%(160/160),特異性為 98.61%(283/287),功效率為 99.10%(443/447)。三、快速檢測方法對江西省哨點樣本常規(guī)抗體篩查判讀結(jié)果全部正確;對重點人群的新發(fā)感染判讀結(jié)果與LAg-Avidity EIA、BED CEIA均具有較高一致率(Kappa=0.81,0.73)和相關(guān)性(R2=0.9475,0.9234);在 MSM 人群中快速檢測方法與兩種酶聯(lián)方法的一致性也很高(Kappa=0.88,0.74)。四、快速檢測方法對云南省哨點樣本常規(guī)抗體篩查判讀結(jié)果全部正確;對四類重點人群的新發(fā)感染判讀結(jié)果與LAg-Avidity EIA的符合率為84.62%～95.81%,Kappa值為0.45～0.81;與BED CEIA的符合率為 83.78%～93.26%,Kappa值為0.40～0.77。符合率和一致率最高的為MSM人群,最低的為DUS人群。五、快速檢測方法應(yīng)用第二部分的參數(shù)計算云南省DUS、MSM和FSW 3類重點人群的新發(fā)感染率分別為0.61%(95%CI 0.22-1.01)、4.04%(95%CI 2.01-6.07)和 0.28%(95%CI 0.10-0.45,經(jīng)卡方檢驗,與 LAg-AvidityEIA、BED CEIA獲得新發(fā)感染率比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。六、對抗病毒治療樣本的誤判率為16.24%(19/117)。研究結(jié)論一、本研究建立的金標(biāo)銀染免疫滲濾快速檢測技術(shù)可同時進(jìn)行HIV-1/2常規(guī)抗體篩查和HIV-1新發(fā)感染檢測。對HIV常規(guī)抗體篩查,具有高敏感性和高特異性;新發(fā)感染檢測的窗口期為176天,假近期感染率為2.17%,檢測結(jié)果與LAg-Avidity EIA和BED CEIA方法均具有較高的一致性和相關(guān)性。二、本研究建立的快速新發(fā)感染檢測方法可為HIV-1新發(fā)感染的現(xiàn)場檢測提供可靠、便捷和高效的工具,具有推廣和應(yīng)用價值。三、抗病毒治療對快速檢測方法影響較大,建議在橫斷面人群調(diào)查時刪除抗病毒治療樣本。
[Abstract]:A rapid method for the screening of HIV - 1 / 2 antibody and the detection of new infections by HIV - 1 / 2 antibody was established . A rapid detection method was used to evaluate the overall performance of new infections . The results were compared with the existing commercial reagents . The results were compared with the existing commercial reagents . The results were compared with the existing commercial reagents . The results were compared with the results of LAg - Avidin EIA and BED CEIA respectively . The results were as follows : 1 case of HIV - 1 infection time , 1 part of HIV - 2 antibody positive serum and 1 part of negative samples . The results showed that the rapid detection of HIV - 1 infection could provide a reliable , convenient and efficient tool for the detection of HIV - 1 new infections .

【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R512.91

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本文編號：1777080