本文選題：CYP2C亞家族 + DNA甲基化　； 參考：《浙江大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：CYP2亞家族是細(xì)胞色素P450酶(Cytochrome P450)的重要組成部分,編碼表達(dá)藥物代謝酶CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19,其組織特異性表達(dá)模式明顯,主要在肝臟表達(dá),CYP2C19在十二指腸有少量表達(dá)。肝臟特異性的核轉(zhuǎn)錄因子是目前已闡明的CYP2C亞家族轉(zhuǎn)錄表達(dá)的重要調(diào)控因素。此外,研究發(fā)現(xiàn),在肝細(xì)胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)腫瘤組織中CYP2C8, CYP2C9及CYP2C19基因的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平相對于癌旁組織顯著降低,說明CYP2C亞家族成員的表達(dá)水平變化與HCC腫瘤發(fā)生也有一定關(guān)聯(lián),但具體機(jī)制尚未明了。表觀遺傳學(xué)廣泛參與基因的表達(dá)調(diào)控,在細(xì)胞分化、腫瘤形成、機(jī)體發(fā)育等生命進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用。DNA甲基化、組蛋白甲基化和組蛋白乙�；悄壳把芯康米疃嗟谋碛^遺傳調(diào)控機(jī)制。研究表觀遺傳機(jī)制在CYP2C亞家族組織特異性表達(dá)中的作用,是對CYP2C亞家族調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的重要補(bǔ)充。在本研究中,我們首先通過分析不同組織的全基因組亞硫酸氫鹽測序(Whole genome bisulfite sequencing, WGBS)和染色質(zhì)免疫共沉淀測序(Chromatin immunoprecipitation sequencing, ChIP-seq)數(shù)據(jù),挖掘出了CYP2C亞家族轉(zhuǎn)錄起始位點附近CpG位點的甲基化水平,在肝臟組織中要明顯低于其他組織；對于組蛋白修飾,肝臟CYP2C8和CYP2C9啟動子的H3K9ac和H3K27ac修飾要顯著高于其他組織；肝臟CYP2C19啟動子的乙�；揎椝捷^低,與其他組織之間的差異不如CYP2C8和CYP2C9顯著。這些差異甲基化或乙�；揎椀奈稽c可能與CYP2C亞家族組織特異性表達(dá)有關(guān)。為了考察DNA甲基化和組蛋白乙�；瘜YP2C亞家族的調(diào)控作用,我們分別用組蛋白去乙�；敢种苿┣乓志谹 (TricostatinA, TSA)和DNA甲基化酶抑制劑5-aza-dC (5-Aza-2'-deoxycytidine)處理原代肝臟細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)在原代肝臟細(xì)胞中,CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19都能受到不同程度地誘導(dǎo)。此外,在5-aza-dC作用下,CYP2C亞家族重要的轉(zhuǎn)錄因子中的組成性雄甾烷受體(Constitutive androstane receptor, CAR)相應(yīng)地也受到誘導(dǎo)上調(diào)。進(jìn)一步考察給藥組和對照組細(xì)胞的DNA甲基化修飾狀況發(fā)現(xiàn),給藥組細(xì)胞基因組中CYP2C亞家族成員啟動子和CAR啟動子區(qū)域DNA甲基化水平降低,這證實,在正常肝臟中,組蛋白乙�；虳NA甲基化是CYP2C亞家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控的可能機(jī)制,CAR在DNA甲基化調(diào)控CYP2C亞家族成員表達(dá)的過程中起著一定作用。在此基礎(chǔ)上,我們接著研究HCC中CYP2C亞家族表達(dá)抑制是否與DNA甲基化有關(guān)。實時熒光定量PCR (Quantitative real-time PCR, qRT-PCR)檢測發(fā)現(xiàn),腫瘤組織中CYP2C亞家族成員和CAR的表達(dá)水平相對于癌旁組織顯著降低。亞硫酸氫鹽PCR (Bisulfite sequencing PCR, BSP)發(fā)現(xiàn),CYP2C亞家族成員啟動子甲基化水平在腫瘤和癌旁組織中不存在差異,但CAR轉(zhuǎn)錄起始位點(Transcriptional start site, TSS)附近e-box的CpG位點甲基化水平存在顯著差異,這一位點的甲基化水平與CYP2C亞家族和CAR的表達(dá)水平呈反相關(guān)。報告基因?qū)嶒炦M(jìn)一步證實該位點甲基化水平升高可抑制CAR的表達(dá),從而間接抑制下游CYP2C亞家族的表達(dá)。接著,我們又考察了組蛋白乙�；欠褚彩荋CC中CYP2C亞家族表達(dá)水平下降的因素。ChIP結(jié)果顯示,在腫瘤組織中,CYP2C8和CYP2C9啟動子的H3K9ac和H3K27ac水平顯著降低；而CYP2C19的H3K9ac和H3K27ac修飾水平在正常組織中就顯著低于CYP2C8和CYP2C9,在腫瘤組織中的下調(diào)也并不明顯。肝臟組織與腫瘤組織之間這一組蛋白修飾的差異與之前數(shù)據(jù)分析得到的肝臟與其他組織之間的差異相一致。綜上所述,本文初步揭示了DNA甲基化和組蛋白乙�；揎検荂YP2C亞家族組織特異性表達(dá)的可能機(jī)制。CYP2C亞家族在HCC中的異常表達(dá),也受到這些表觀遺傳機(jī)制的調(diào)控,然而具體通路可能有所區(qū)別,有待進(jìn)一步研究。研究這些機(jī)制將有助于我們了解表觀遺傳調(diào)控在細(xì)胞分化和腫瘤發(fā)生中的作用。
[Abstract]:In this study , we found that the transcription level and protein expression level of CYP2C subfamily were significantly lower than those of HCC .
For histone modifications , the H3K9ac and H3K27ac modifications of the liver CYP2C8 and 3 promoter were significantly higher than those of other tissues ;
In order to investigate the expression of CYP2C subfamilies in primary liver cells , it was found that the methylation level of CYP2C subfamily was significantly lower than that of CYP2C subfamilies .
In conclusion , this paper preliminarily reveals that DNA methylation and histone acetylation are the possible mechanisms for the specific expression of CYP2C subfamilies . In conclusion , this paper preliminarily reveals that DNA methylation and histone acetylation are the possible mechanisms for the specific expression of CYP2C subfamilies .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R440

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