本文選題：豬溶血素 + 腦膜炎�。� 參考：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：豬鏈球菌被認(rèn)為是一種重要的人畜共患病的病原菌。自1968年首次在丹麥發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)了人感染豬鏈球菌的病例后,四百多例豬鏈球菌散發(fā)感染在隨后的四十多年中被陸續(xù)的報道出來,并且大部分的臨床病癥包括敗血癥,腦膜炎,心內(nèi)膜炎,關(guān)節(jié)炎,肺炎等。腦膜炎患者在這些患者中的比例占到了70%以上,并且造成了一些死亡案例。之前中國兩次大規(guī)模的豬鏈球菌疫情(1998年在江蘇和2005年在四川)的爆發(fā)造成了兩百多人的感染和53人死亡,幾乎全部的死亡病例所表現(xiàn)出的癥狀為鏈球菌中毒性休克綜合癥。因此,對豬鏈球菌造成的這兩種主要疾病的理解,有助于我們應(yīng)對隨時可能爆發(fā)的大規(guī)模的豬鏈球菌疫情并且有助于我們對持續(xù)不斷的散發(fā)病例的防控與治療。豬鏈球菌從最開始的感染到最后的致病,是多步驟的、復(fù)雜的,并且各種不同的毒力因子在不同的時空上發(fā)揮相應(yīng)的作用。關(guān)于腦膜炎,因為之前的研究集中在豬鏈球菌與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用,以及豬鏈球菌引起腦實質(zhì)的炎癥反應(yīng)上,所以我們的研究重點關(guān)注豬鏈球菌是如何穿過血腦屏障的這一問題,確認(rèn)豬溶血素是否有助于豬鏈球菌穿過單層的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞組成的屏障;關(guān)于中毒性休克綜合癥,我們沒有像之前的研究一樣,把關(guān)注點放在爆發(fā)疫情的菌株新出現(xiàn)的89K毒力島上,而是發(fā)現(xiàn)豬鏈球菌引起的中毒性休克綜合癥最主要的臨床特征和血管滲漏有關(guān),并且通過文獻(xiàn)調(diào)研以及病人血清中肝素結(jié)合蛋白含量的測量,確認(rèn)豬鏈球菌引起的血管滲漏與肝素結(jié)合蛋白有關(guān),并且在豬鏈球菌中豬溶血素被確認(rèn)是引起中性粒細(xì)胞釋放肝素結(jié)合蛋白最主要的因素,本研究的關(guān)注點在于豬溶血素是通過什么樣的機(jī)制引起肝素結(jié)合蛋白從中性粒細(xì)胞中釋放并試圖通過動物模型確認(rèn)關(guān)鍵分子的作用。因而本論文從如下兩個部分探討豬溶血素在豬鏈球菌導(dǎo)致的兩種主要疾病發(fā)病過程中的作用:在第一部分的研究中,為了驗證豬鏈球菌是否能借助中性粒細(xì)胞的“改良的特洛伊木馬”模型穿過血腦屏障,我們首先通過實時定量和酶聯(lián)免疫吸附法對細(xì)菌和內(nèi)皮細(xì)胞相互作用后細(xì)胞因子的基因水平和蛋白水平進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)由豬鏈球菌野生株05ZYH33敲除sly基因獲得的Δsly敲除株不再能像野生株一樣刺激細(xì)胞因子兩種水平的表達(dá),因而確認(rèn)了豬溶血素是豬鏈球菌促使人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的最主要毒力因子;接下來我們通過中性粒細(xì)胞穿過單層內(nèi)皮屏障的體外transwell模型和感染豬鏈球菌的CD1小鼠大腦病理切片證實豬溶血素有助于中性粒細(xì)胞穿過血腦屏障到達(dá)腦組織,但豬鏈球菌野生株和敲除株在CD1小鼠血液和腦中的計數(shù)沒有差異提示中性粒細(xì)胞穿過血腦屏障的過程中并沒有通過“改進(jìn)的特洛伊木馬”模型幫助豬鏈球菌穿過血腦屏障。因此,豬鏈球菌在致腦膜炎的過程中,豬溶血素有助于中性粒細(xì)胞浸潤等腦部炎癥的發(fā)展,但并沒有幫助豬鏈球菌穿過血腦屏障。在第二部分的研究中,為了確認(rèn)豬溶血素引起中性粒細(xì)胞釋放肝素結(jié)合蛋白的具體機(jī)制,我們通過流式的方法檢測了豬溶血素刺激后中性粒細(xì)胞表面脫顆粒標(biāo)志物的表達(dá)并通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測了中性粒細(xì)胞顆粒內(nèi)含物的釋放,確認(rèn)豬溶血素通過引起中性粒細(xì)胞脫顆粒的方式而非直接裂解細(xì)胞來釋放肝素結(jié)合蛋白;接下來通過激光共聚焦檢測中性粒細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量,我們解釋了由豬溶血素引起的中性粒細(xì)胞的肝素結(jié)合蛋白的釋放是鈣離子內(nèi)流依賴性的;利用抑制劑途徑的分析方式,我們認(rèn)為豬溶血素會與中性粒細(xì)胞表面的TLR4受體結(jié)合,并激活下游p38 MAPK的磷酸化,從而激活核轉(zhuǎn)錄因子并促進(jìn)ALOX5 mRNA的表達(dá),轉(zhuǎn)錄合成5-脂加氧酶;5-脂加氧酶可以催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為白三烯A4,經(jīng)水解酶作用合成白三烯B4并分泌到細(xì)胞外;白三烯B4與中性粒細(xì)胞表面的G蛋白偶聯(lián)受體BLT1結(jié)合,激活細(xì)胞內(nèi)的PI3K通路從而導(dǎo)致中性粒細(xì)胞內(nèi)的顆粒物向細(xì)胞膜表面移動,釋放肝素結(jié)合蛋白;通過構(gòu)建小鼠局部皮膚滲漏的Miles Assay模型,我們確認(rèn)了豬溶血素能在體內(nèi)實驗中引起小鼠的血管滲漏。5-脂加氧酶的抑制劑Zileuton能顯著的降低由豬溶血素引起的肝素結(jié)合蛋白的釋放和小鼠的血管滲漏,證實了5-脂加氧酶在上述過程中起到了關(guān)鍵作用。我們的研究不僅闡釋了由豬溶血素導(dǎo)致的中性粒細(xì)胞肝素結(jié)合蛋白的釋放并引起血管滲漏的機(jī)制,豐富了由非A族鏈球菌引起的鏈球菌中毒性休克的理論,也有助于由豬鏈球菌引起的中毒性休克綜合癥的靶向治療藥物的研發(fā),有助于未來豬鏈球菌疫情的防治工作。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R515

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3 劉敏;;新型溶血素在臨床檢驗中的價值分析[J];中國醫(yī)藥指南;2013年21期

4 ;抗鏈球菌“O”溶血素間接血凝法測定[J];人民軍醫(yī);1979年03期

5 唐仁芳;;用四種方法制備溶血素的結(jié)果比較[J];中級醫(yī)刊;1955年11期

6 張成武;蔡文英;金兆鵬;曾桂英;;鏈球菌溶血素O的制備及其影響因素[J];江西醫(yī)藥;1965年01期

7 鄒光楣;;血清溶血素動力學(xué)觀察及環(huán)磷酰胺對溶血素的影響[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1986年05期

8 臧星星,錢伯初;溶血素類型和含量的分光光度測定法[J];藥學(xué)學(xué)報;1987年04期

9 王天然;小鼠連續(xù)微量采血測定溶血素[J];上海免疫學(xué)雜志;1988年03期

10 Beutin L;王韌;;大腸桿菌的幾種溶血素[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);1992年06期

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2 張海燕;楊宏軍;王長法;何洪彬;馬衛(wèi)明;楊少華;;凝膠過濾與鎳柱親和純化基因工程蛋白金葡菌-溶血素的生物學(xué)特性比較[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

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8 殷月蘭;焦新安;潘志明;張曉明;顧志強(qiáng);;李斯特菌溶血素基因的原核表達(dá)及其生物學(xué)特性[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

9 王飛;劉代成;楊宏軍;何洪斌;王長法;高運(yùn)東;仲躋峰;;奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌溶血型及溶血素基因分布的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

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2 馬有智;豬鏈球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表達(dá)[D];浙江大學(xué);2003年

3 倪艷秀;豬鏈球菌2型江蘇分離株溶血素基因缺失株的構(gòu)建及特性分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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7 狄婷婷;致鵝敗血癥糞腸球菌鑒定及溶血素激活因子原核表達(dá)[D];內(nèi)蒙古民族大學(xué);2011年

8 王淑嫻;海洋弧菌中五類溶血素基因分布及其生物學(xué)活性研究[D];中國海洋大學(xué);2007年

9 孟祥莉;化膿隱秘桿菌溶血素蛋白誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞凋亡的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 趙媛媛;集胞藻Synechocystis sp. PCC 6803溶血素的理化特性及溶血機(jī)制的研究[D];中國海洋大學(xué);2007年

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本文編號：1764811