本文選題：非小細胞肺癌 + miR-186��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：在中國乃至世界人群內(nèi),肺癌的發(fā)病率與死亡率在所有癌癥中居于首位。非小細胞肺癌是肺癌的主要臨床類型,約占肺癌總數(shù)的80%。臨床上對肺癌的手術治療和化療治療手段一直在改進,可是肺癌患者的預后依然不容樂觀。近幾年肺癌分子生物學的研究進展為尋找新的肺癌治療方式及新的藥物研發(fā)提供了重要的思路,也為肺癌患者帶來了新的希望。在分子生物學水平上對肺癌的發(fā)生、發(fā)展的研究有助于我們發(fā)現(xiàn)新的肺癌治療的靶標和生物標志物。為此我們研究了轉(zhuǎn)錄因子Yin Yang-1(YY1),microRNAmiR-186,lncRNAPVT1及其相互作用網(wǎng)絡在肺癌中的作用。YY1是一種多功能轉(zhuǎn)錄因子,能夠正負調(diào)節(jié)大量細胞內(nèi)基因和病毒基因。大量研究表明,PVT1在人類多種類型的癌癥組織中均存在異常表達。miR-186在多種人類惡性腫瘤中下調(diào),發(fā)揮腫瘤抑制劑的作用。但是,miR-186在非小細胞肺癌的發(fā)展和代謝過程中的調(diào)節(jié)機制目前仍不明確。在本研究中,我們收集了非小細胞肺癌患者的癌組織和癌旁組織,及人類不同肺癌細胞系A549、95-D、HCC827、NCI-H1650和肺上皮HPAEpiC細胞系。首先我們采用qRT-PCR或者western blot的方法檢測這些因子在肺癌組織、癌旁組織及肺癌細胞系中的表達水平。通過CCK-8實驗檢測細胞的增殖情況,流式細胞儀檢測細胞的凋亡情況,Transwell檢測細胞的遷移和侵襲能力。通過熒光素酶報告試驗、電泳遷移實驗以及染色質(zhì)免疫沉降試驗驗證各因子之間的相互靶向作用。結果發(fā)現(xiàn)YY1在肺癌腫瘤組織以及肺癌細胞系中的表達量顯著上調(diào);且YY1的過表達促進了癌細胞增殖,遷移和侵襲,并抑制了細胞凋亡。YY1能夠直接結合于lncRNA-PVT1啟動子,并激活其轉(zhuǎn)錄。PVT1也能促進肺癌細胞的細胞增殖、遷移以及侵襲。miR-186在肺癌組織和細胞中顯著下調(diào);且miR-186的過表達抑制了肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲,誘導細胞凋亡。MAP3K2在肺癌組織中高表達,且MAP3K2可促進肺癌細胞的增殖,遷移和侵襲,并抑制了細胞凋亡;miR-186能靶向MAP3K2并抑制MAP3K2的表達。此外,MAP3K2過表達在一定程度上反轉(zhuǎn)了 miR-186對肺癌細胞系增殖和代謝的抑制效果。miR-186與YY1在肺癌組織和肺癌細胞系中的表達呈現(xiàn)負相關,miR-186能直接靶向作用于YY1。YY1siRNA在抑制細胞增殖、細胞侵襲和細胞遷移,以及誘導細胞凋亡所發(fā)揮的作用要顯著強于miR-186。綜上,我們的研究表明,YY1在肺癌發(fā)生過程中在一定程度上是通過影響其下游靶點PVT1而發(fā)揮腫瘤促進作用。miR-186可通過抑制MAP3K2表達來調(diào)節(jié)肺癌組織生長和代謝;也可通過直接靶向作用YY1而誘導非小細胞肺癌細胞凋亡。因此,針對非小細胞肺癌,miR-186-MAP3K2及miR-186-YY1可能是一種全新的、有用的、潛在的臨床治療和診斷靶點,為非小細胞肺癌的治療提供新的手段。
[Abstract]:Lung cancer is the leading cause of morbidity and mortality in China and the world.Non-small cell lung cancer is the main clinical type of lung cancer, accounting for about 80% of the total number of lung cancer.The surgical and chemotherapeutic methods for lung cancer have been improved, but the prognosis of lung cancer patients is still not optimistic.Recent advances in molecular biology of lung cancer have provided important ideas for finding new treatments and new drugs for lung cancer, as well as new hopes for lung cancer patients.The research on the occurrence and development of lung cancer at the level of molecular biology helps us to find new targets and biomarkers for the treatment of lung cancer.Therefore, we have studied the role of the transcription factor Yin Yang-1 (YY1) microRNAmiR-186ncRNAPVT1 and its interaction network in lung cancer. YY1 is a multifunctional transcription factor which can positively and negatively regulate a large number of intracellular and viral genes.A large number of studies have shown that PVT1 has abnormal expression in various types of human cancer tissues. MiR-186 is down-regulated in a variety of human malignant tumors and plays the role of tumor inhibitor.However, the regulatory mechanism of miR-186 in the development and metabolism of non-small cell lung cancer is still unclear.In this study, we collected the cancer tissues and adjacent tissues of patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), as well as different human lung cancer cell lines A549NC827NCI-H1650 and lung epithelial HPAEpiC cell lines.First, qRT-PCR or western blot were used to detect the expression of these factors in lung cancer tissues, paracancerous tissues and lung cancer cell lines.CCK-8 assay was used to detect cell proliferation and flow cytometry was used to detect cell apoptosis. Transwell was used to detect cell migration and invasion.Luciferase report test, electrophoresis migration test and chromatin immuno deposition test were used to verify the mutual targeting of each factor.The results showed that the expression of YY1 was significantly up-regulated in lung cancer tumor tissues and lung cancer cell lines, and the overexpression of YY1 promoted the proliferation, migration and invasion of cancer cells, and inhibited apoptosis. YY1 could directly bind to lncRNA-PVT1 promoter.Activation of its transcription. PVT1 also promoted the proliferation of lung cancer cells, migration and down-regulation of invasion. MiR-186 in lung cancer tissues and cells, and the overexpression of miR-186 inhibited the proliferation, migration and invasion of lung cancer cells.Apoptosis. MAP3K2 was highly expressed in lung cancer tissues, and MAP3K2 could promote the proliferation, migration and invasion of lung cancer cells, and inhibit the apoptosis of miR-186 targeting MAP3K2 and inhibiting the expression of MAP3K2.In addition, the overexpression of MAP3K2 reversed to some extent the inhibitory effect of miR-186 on proliferation and metabolism of lung cancer cells. MiR-186 was negatively correlated with the expression of YY1 in lung cancer tissues and lung cancer cell lines. MiR-186 could directly target YY1.YY1siRNA to inhibit the proliferation of lung cancer cells.The effect of cell invasion and migration and apoptosis induction was stronger than that of miR-1866.In conclusion, our study shows that YY1 plays a role in promoting tumor growth and metabolism by inhibiting the expression of MAP3K2 in lung cancer, to a certain extent, by affecting its downstream target PVT1.Apoptosis of non-small cell lung cancer cells can also be induced by direct targeting of YY1.Therefore, for non-small cell lung cancer, miR-186-MAP3K2 and miR-186-YY1 may be a new, useful and potential clinical treatment and diagnostic target, and provide a new method for the treatment of non-small cell lung cancer.
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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