本文選題：激素性股骨頭壞死 + HRMRI��； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：目的:1.觀察兔激素性股骨頭壞死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SIONFH)模型自然修復(fù)過程中骨小梁空間結(jié)構(gòu)參數(shù)的變化以及改建方式。2.觀察活血祛瘀法對(duì)兔激素性股骨頭壞死修復(fù)的影響。3.評(píng)價(jià)體外Micro-CT和體內(nèi)高分辨率磁共振(HRMRI)檢測動(dòng)物模型骨小梁空間結(jié)構(gòu)改變的一致性。4.觀察藥物作用下模型壞死骨周圍組織細(xì)胞因子的變化,分析活血祛瘀法對(duì)成骨-破骨偶聯(lián)的調(diào)控。5.評(píng)價(jià)臨床上活血祛瘀法治療SIONFH療效,觀察骨小梁空間結(jié)構(gòu)參數(shù)變化及骨小梁改建方式,剖析"活血祛瘀法"防治激素性股骨頭壞死塌陷的作用機(jī)理。方法:1.第一部分,評(píng)價(jià)活血祛瘀法對(duì)兔激素性股骨頭壞死修復(fù)的影響:50只健康的成年新西蘭大白兔,將其隨機(jī)分入模型組、中藥組和空白組,其中模型組和中藥組各20只,空白組10只。內(nèi)毒素(LPS)聯(lián)合甲強(qiáng)龍(MPS)按照LPS×1(10μg/kg)耳緣靜脈注射結(jié)合MPS×6(40mg/kg)肌肉注射制作兔激素性股骨頭壞死模型。中藥組使用《醫(yī)宗金鑒》方桃紅四物湯按照兔與人等效劑量灌胃處理。分別于第2、4、8、12周行HE染色和HRMRI、Micro-CT檢測,觀察壞死及修復(fù)情況。HRMRI最小空間分辨率≤0.03mmm,Micro-CT最小空間分辨率≤0.035mm,設(shè)定骨小梁成像結(jié)構(gòu)參數(shù),比較HRMRI和Micro-CT在測量股骨頭壞死骨小梁改建過程中的作用。在上述相同時(shí)間點(diǎn),利用Western Blot技術(shù)檢測兔股骨頭RANK、RANKL、VEGF、OPG、RUNX2、0PN、ABCB1、PPARγ蛋白表達(dá)水平。2.第二部分,討論活血祛瘀法防治人股骨頭壞死塌陷的作用機(jī)理:參照《成人股骨頭壞死診療標(biāo)準(zhǔn)專家共識(shí)(2012年版)》及《股骨頭壞死診斷與治療的專家建議》的診斷標(biāo)準(zhǔn),篩選自2011年12月～2014年10月,于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨關(guān)節(jié)科就診并符合納入標(biāo)準(zhǔn)的SIONFH病例共36例64髖。其中雙側(cè)發(fā)病28例,男性20例,女性16例。年齡20～50歲,平均35歲�；颊呔驮\時(shí)出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛的時(shí)間為2～24周,平均17周。簽署知情同意書,經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后入組。每3個(gè)月行雙髖正、蛙位X線檢查,分別測量記錄股骨頭發(fā)生塌陷時(shí)間和塌陷高度。每6個(gè)月行HRMRI平掃,測量骨小梁相關(guān)空間結(jié)構(gòu)參數(shù)。在治療前、服藥3個(gè)月、服藥6個(gè)月、服藥1年、服藥2年,分別記錄患者Harris評(píng)分。隨訪時(shí)間14～38個(gè)月,平均為27個(gè)月�；诨颊叩腍RMRI影像資料,利用Mimics 13.1醫(yī)學(xué)影像控制系統(tǒng)重建壞死區(qū)、硬化區(qū)的三維結(jié)構(gòu);利用圖像處理軟件ImageJ評(píng)價(jià)承重區(qū)冠狀面壞死面積和硬化區(qū)面積在股骨頭縱切面中的比值。通過表觀骨小梁空間結(jié)構(gòu)改變,分析活血祛瘀法防治股骨頭壞死塌陷的作用機(jī)理。結(jié)果:1.SIONFH造模評(píng)估:40只新西蘭大白兔,中藥組(n=20)與模型組(n=20)同時(shí)注射內(nèi)毒素后,48h內(nèi)共死亡7只,33只存活,存活率82.5%。模型組共14只出現(xiàn)壞死征象,壞死發(fā)生率為82.4%(14/17);中藥組5只出現(xiàn)壞死征象,壞死發(fā)生率為 31.3%(5/16)。2.組織學(xué)觀察:兔股骨頭切片HE染色顯示:模型組:軟骨面皺褶,骨小梁顯著較正常組稀疏,局部骨小梁斷裂,骨細(xì)胞核固縮,大量空骨陷窩形成,骨髓脂肪細(xì)胞堆積;正常組:骨小梁結(jié)構(gòu)完整,空間排布規(guī)則,小梁內(nèi)的骨細(xì)胞清晰可見,空骨陷窩的數(shù)量較少,骨髓中存在豐富的造血細(xì)胞,脂肪細(xì)胞含量相對(duì)較少,且形態(tài)正常;中藥組:骨小梁相較正常組稀疏,形態(tài)尚可,成骨細(xì)胞活躍。4周時(shí)模型組空骨陷窩率為(17.24±1.08)%,正常組(5.33±0.96)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),中藥組4周時(shí)組織學(xué)觀察與模型組無明顯差異,8周及12周檢測可見成骨細(xì)胞活躍,骨小梁形態(tài)較前完整,空骨陷窩率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.HRMRI掃描分析:T1WI可見模型組股骨頭內(nèi)存在明顯低信號(hào)帶;中藥組在股骨頭內(nèi)近骨骺處存在小斑片樣低信號(hào)改變,但大部分骨組織的灰度值正常。HRMRI結(jié)構(gòu)參數(shù)分析結(jié)果顯示,模型組與正常組相比,前者的ROE值(即壞死水腫區(qū)面積)增加,ROE/NR比例升高,中藥組與模型組相比,中藥組的ROE值減少,ROE/NR的比例下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示活血祛瘀法可促進(jìn)激素性股骨頭壞死修復(fù)。4.Micro-CT掃描分析:在各時(shí)間節(jié)點(diǎn)分別取各組兔左側(cè)股骨頭行Micro-CT檢測,表觀可見模型組骨小梁較正常組稀疏,部分?jǐn)嗔�。中藥組與模型組相比,骨質(zhì)改善,骨小梁存在局部性修復(fù)。Micro-CT檢測發(fā)現(xiàn),模型組與正常組相比,前者BV、Conn.D.、SMI、Tb.N、Tb.Th 值降低,BV/TV 比例下降,BS/BV、SMI、Tb.Sp 值升高。中藥組與模型組相比,前者BV、Conn.D.、SMI、Tb.N值升高,BV/TV比例增加,BS/BV、Tb.Sp、Tb.Th值下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.SIONFH 相關(guān)蛋白檢測:Western blot 檢測 RANK、RANKL、ABCB1、RUNX2、VEGF、OPN、PPAR γ、OPG的蛋白表達(dá)。與模型組相比,中藥組RUNX2、OPG表達(dá)上調(diào)而RANK、RANKL表達(dá)下調(diào)(P0.05),而模型組相較于正常組,其RANK、RANKL、RUNX2蛋白均上調(diào),OPG蛋白表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與模型組相比,中藥組的ABCB1蛋白表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而模型組ABCB1的蛋白表達(dá)相較正常組下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);相對(duì)于正常組,模型組內(nèi)VEGF的蛋白表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。相對(duì)于模型組,中藥組VEGF的蛋白上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組間OPN和PPAR y的蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.臨床病例療效評(píng)價(jià):本研究36例患者64髖中,42髖與治療前相比,壞死水腫區(qū)面積減小(42/64)。至隨訪2年,未塌陷29髖中8髖塌陷,塌陷率27.6%(8/29),塌陷時(shí)間3個(gè)月～14個(gè)月,平均塌陷時(shí)間8.7個(gè)月。其中塌陷2mm者4例;2mmm～4mm者3例;4mm者1例。治療前、服藥3個(gè)月、6個(gè)月、1年、2年Harris評(píng)分分別為:81.5±10.8、83.7±9.1、87.3±4.7、87.5±7.8、79.4±5.2。其中服藥6個(gè)月、1年與服藥前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7.三維重建MRI表現(xiàn)與臨床癥狀相關(guān)性分析:股骨頭壞死中壞死體積、壞死病灶總表面積、壞死體積比、承重壞死區(qū)面積與Harris評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=0.171,P0.05;r=0.288,P0.05;r=0.452,P0.01;r=0.452,P0.01)。硬化區(qū)體積、承重硬化區(qū)面積與Harris評(píng)分呈正相關(guān)(r=-0.321,P0.01;r=0.452,P0.01)。結(jié)論:1.活血祛瘀法治療兔SIONFH后,HRMRI及Micro-CT顯示,兔股骨頭內(nèi)壞死骨小梁結(jié)構(gòu)改建優(yōu)于自然修復(fù),說明活血祛瘀法能夠改善SIONFH影像學(xué)表現(xiàn)。病理切片HE染色顯示,在12周結(jié)束時(shí)3組病理改變差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說明活血祛瘀法能夠促進(jìn)兔SIONFH修復(fù),12周時(shí)趨于修復(fù)完全。2.2周時(shí)HRMRI即出現(xiàn)壞死征象,并經(jīng)過病理驗(yàn)證壞死發(fā)生,同期Micro-CT未出現(xiàn)骨小梁形態(tài)及骨密度明顯改變。實(shí)驗(yàn)表明,HRMRI與Micro-CT作為高分辨率影像技術(shù)均能有效評(píng)價(jià)活血祛瘀法治療兔SIONFH療效,但HRMRI對(duì)股骨頭壞死診斷要早于Micro-CT,與臨床實(shí)踐相符合。3.Micro-CT顯示,中藥組相較于模型組BV、Conn.D.、SMI、Tb.N值升高,BS/BV、Tb.Sp值降低,但Tb.Th值下降。說明活血祛瘀法治療可增高骨密度,促進(jìn)修復(fù),但未能使骨量明顯增加。4.中藥組相較于模型組,除RANK、RANKL表達(dá)水平下調(diào)外,其余均為上調(diào);而模型組與正常組相比,RANK、RANKL、RUNX2的蛋白表達(dá)上調(diào),OPG、ABCB1、VEGF的蛋白表達(dá)下調(diào)。說明活血祛瘀法促進(jìn)壞死修復(fù)的機(jī)制可能與抑制RANK、RANKL表達(dá),促進(jìn) ABCB1、OPG、VEGF、RUNX2 表達(dá)有關(guān)。5."活血祛瘀法"可改善未塌陷SIONFH患者Harris評(píng)分,維持髖關(guān)節(jié)基本功能。同時(shí)三維重建MRI表現(xiàn)與臨床癥狀相關(guān)性分析顯示:股骨頭壞死中壞死體積、壞死病灶總表面積、壞死體積比、承重壞死區(qū)面積與Harris評(píng)分呈負(fù)相關(guān);硬化區(qū)體積、承重硬化區(qū)面積與Harris評(píng)分呈正相關(guān)。硬化面積的擴(kuò)大能夠促進(jìn)頭內(nèi)微結(jié)構(gòu)的重新平衡,增加結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,提高患者Harris評(píng)分。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R274.9

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本文編號(hào)：1743122