本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點(diǎn)：表觀遺傳學(xué)　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景與目的:色素框同源蛋白7(Chromobox homolog 7,CBX7)是多梳蛋白家族(Polycomb protein,PcG)中多梳抑制復(fù)合物 1(polycomb repressor complex 1,PRC1)的核心成員之一,能夠識別被多梳抑制復(fù)合物2(polycomb repressor complex 2,PRC2)甲基化的組蛋白3第27位賴氨酸(H3K27me3),進(jìn)而招募其他PRC1蛋白至靶基因的啟動子附近的組蛋白殘基,催化組蛋白2第119位賴氨酸殘基發(fā)生單泛素化(H2AK119ub1),最終導(dǎo)致靶基因轉(zhuǎn)錄抑制。CBX7的功能在不同腫瘤中表現(xiàn)出不同甚至相互矛盾:在淋巴瘤、卵巢癌和前列腺癌中,CBX7有促進(jìn)增殖、抑制凋亡的功能,而在乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和肺癌中,CBX7往往低表達(dá)而且發(fā)揮著抑癌功能。之前關(guān)于CBX7和膠質(zhì)瘤的研究只集中在侵襲相關(guān)表型,而且沒有探討CBX7表達(dá)量與膠質(zhì)瘤級別和預(yù)后的關(guān)系,因此我們首先利用多個(gè)公共數(shù)據(jù)庫分析了 CBX7轉(zhuǎn)錄水平與膠質(zhì)瘤的病理級別和病人預(yù)后的相關(guān)性,并且在不同級別的膠質(zhì)瘤組織樣本中進(jìn)行了驗(yàn)證。我們發(fā)現(xiàn)CBX7在高級別膠質(zhì)瘤中表達(dá)量較低,而且CBX7低表達(dá)預(yù)示著預(yù)后不良。我們發(fā)現(xiàn)與CBX7表達(dá)量呈正或負(fù)相關(guān)的基因的功能主要集中于周期調(diào)控,因此我們重點(diǎn)研究了CBX7對膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的調(diào)控作用和機(jī)制,我們發(fā)現(xiàn)CBX7能夠結(jié)合于CCNE1啟動子,繼而招募組蛋白去乙�；�(histone deacetylase2,HADC2)于啟動子附近的組蛋白,最終導(dǎo)致CCNE1轉(zhuǎn)錄抑制,細(xì)胞周期被阻滯于G1/S期。我們的研究提供了新的膠質(zhì)瘤預(yù)后標(biāo)志物并且闡述了 CBX7抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的分子生物學(xué)機(jī)制。材料與方法:1.我們在四個(gè)膠質(zhì)瘤公共數(shù)據(jù)庫,包括Chinese Glioma Genome Atlas(CGGA)database,The Cancer Genome Atlas database(TCGA),Repository of Molecular Brain Neoplasia Data(REMBRANDT)以及 GSE16011 中分析了 CBX7 表達(dá)量與膠質(zhì)瘤級別和預(yù)后的關(guān)系,利用KEGG和GO生物信息學(xué)分析方法篩選出CBX7相關(guān)基因主要涉及的生物學(xué)功能。2.利用慢病毒載體構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)CBX7的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87和LN229,在內(nèi)源性高表達(dá)CBX7的U251細(xì)胞中利用瞬轉(zhuǎn)小干擾RNA敲低CBX7水平。我們用蛋白電泳檢驗(yàn)了過表達(dá)和敲低CBX7的效率。利用CCK8和EdU實(shí)驗(yàn)檢測了細(xì)胞增殖能力,利用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測了細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3.我們利用流式細(xì)胞儀檢測了細(xì)胞周期的分布,接著利用免疫熒光和蛋白電泳以及q-PCR檢測了 cyclin E1的表達(dá)量,隨后我們憑借染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測了 CBX7對CCNE1啟動子的結(jié)合能力,利用蛋白質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測了CBX7和HDAC2的結(jié)合程度。4.我們在裸鼠顱內(nèi)注射了穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶和CBX7的U87細(xì)胞,進(jìn)而構(gòu)建了原位膠質(zhì)瘤模型,利用活性生物成像儀監(jiān)測了顱內(nèi)模型的生長,觀察期結(jié)束后利用免疫組化技術(shù)檢測了裸鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞中CBX7和cyclinE1的表達(dá)量。研究結(jié)果:1.在膠質(zhì)瘤數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn)CBX7轉(zhuǎn)錄水平隨著膠質(zhì)瘤級別而降低,與膠質(zhì)瘤病人預(yù)后呈正相關(guān)。本院病人組織標(biāo)本驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)高級別膠質(zhì)瘤中的CBX7蛋白質(zhì)、mRNA表達(dá)量顯著低于低級別膠質(zhì)瘤。2.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),CBX7相關(guān)基因的功能主要與周期調(diào)控相關(guān)。3.在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中上調(diào)或下調(diào)CBX7表達(dá)量后,可以影響腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移侵襲能力。4.CBX7可以結(jié)合于CCNE1啟動子區(qū)并招募HDAC2,導(dǎo)致cyclin E1表達(dá)量下降,細(xì)胞周期被阻滯于G1/S期。5.裸鼠顱內(nèi)模型證實(shí),過表達(dá)CBX7可以抑制腫瘤的生長并延長裸鼠生存時(shí)間。研究結(jié)論:1.CBX7表達(dá)量與膠質(zhì)瘤級別呈反相關(guān),與膠質(zhì)瘤病人預(yù)后呈正相關(guān),CBX7低表達(dá)提示病人預(yù)后不良,因此CBX7可以作為評估膠質(zhì)瘤預(yù)后的預(yù)測因子。2.CBX7在不同腫瘤中起著不同的作用,在膠質(zhì)瘤中,CBX7通過抑制CCNE1的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞通過G1/S檢查點(diǎn),發(fā)揮著抑制膠質(zhì)瘤增殖的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

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本文編號：1720593