本文選題：潰瘍性結(jié)腸炎　切入點(diǎn)：代謝組學(xué)　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：第一部分安腸湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜組織代謝組學(xué)變化的影響背景與目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種慢性炎癥性腸病,近年來(lái)探究其發(fā)病機(jī)制及尋找有效防治藥物,進(jìn)展仍然有限。安腸湯是臨床應(yīng)用和研究20余年治療UC的中藥復(fù)方,臨床療效肯定。安腸湯與UC的相關(guān)研究已有一定研究基礎(chǔ),但安腸湯治療UC的作用機(jī)制仍未明確。代謝組學(xué)及腸道微生態(tài)是近年最為關(guān)注的研究熱點(diǎn),但兩者結(jié)合在UC中的研究報(bào)道甚少。本研究采用代謝組學(xué)來(lái)探索安腸湯治療UC的作用機(jī)制。方法:1.采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)造模,TNBS劑量90mg/kg,建立UC大鼠模型。2.選擇最佳方案造模,隨機(jī)分為模型組,麗珠腸樂(lè)組、美沙拉嗪組(陽(yáng)性藥物對(duì)照組),安腸湯低、中、高劑量組(治療組)。3.各組分別在治療后第5、10、15天各處死1/3存活大鼠,實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠一般情況及糞便情況,進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index,DAI)評(píng)分;取大鼠黏膜組織進(jìn)行病理分析,以結(jié)腸損傷指數(shù)(colon macroscopic damage index,CMDI)評(píng)判大鼠黏膜損傷情況,Geboes指數(shù)評(píng)價(jià)結(jié)腸黏膜組織病理學(xué)情況;取病變結(jié)腸黏膜組織進(jìn)行氣象色譜-質(zhì)譜檢測(cè)(GC-MS),并采用主成分分析法、正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA),最后采用OPLS-DA模型第一主成分的VIP值(閾值1),并結(jié)合t檢驗(yàn)的P值(P0.05)來(lái)尋找差異性代謝物。結(jié)果:1.UC大鼠模型在疾病癥狀、結(jié)腸損傷和病理表現(xiàn)上均與UC疾病表現(xiàn)基本一致,造模后10天模型表現(xiàn)最佳。2.檢測(cè)到的色譜圖與質(zhì)譜庫(kù)進(jìn)行匹配鑒定,得到準(zhǔn)確定性的代謝化合物47個(gè),安腸湯治療組與陽(yáng)性藥物對(duì)照組均對(duì)UC大鼠均有治療作用。3.經(jīng)差異物篩選鑒定,最終得到UC大鼠病變結(jié)腸黏膜潛在代謝標(biāo)志物10個(gè),分別為腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷、甘氨酸、葡萄糖、木糖、β-丙氨酸、甘露糖、乳酸、肌氨酸。4.安腸湯可降低腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷、乳酸、甘氨酸和葡萄糖含量,提升甘露糖、木糖、肌氨酸和β-丙氨酸含量,回調(diào)幅度較陽(yáng)性藥物組明顯(P0.05),其中安腸湯中劑量組的回調(diào)幅度最佳。結(jié)論:1.采用2,4,6-三硝基苯磺酸液建立UC大鼠模型可行,安腸湯和美沙拉嗪、麗珠腸樂(lè)對(duì)UC大鼠均具有治療或緩解作用。2.UC大鼠結(jié)腸黏膜組織中存在10種內(nèi)源性差異性代謝物:腺嘌呤、甘氨酸、胞嘧啶、尿苷、甘露糖、乳酸、β-丙氨酸、葡萄糖、肌氨酸和木糖,它們有可能作為診斷UC的潛在分子代謝標(biāo)志物。3.安腸湯可能是通過(guò)降低腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷、乳酸、甘氨酸和葡萄糖含量,提升甘露糖、木糖、肌氨酸和β-丙氨酸含量來(lái)調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)。4.安腸湯治療組對(duì)UC大鼠10種內(nèi)源性差異性代謝物調(diào)節(jié)作用相對(duì)優(yōu)于陽(yáng)性藥物組。第二部分安腸湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群變化的影響背景與目的:近年來(lái)認(rèn)為UC的發(fā)病機(jī)制與遺傳、免疫、腸道微生態(tài)等因素可能有著密切關(guān)聯(lián)。腸道菌群、乙酸、內(nèi)毒素均是腸道微生態(tài)的重要組成部分,腸道微生態(tài)的穩(wěn)定對(duì)于維持正常腸道功能至關(guān)重要,而腸道微生態(tài)失衡可能是UC的發(fā)病機(jī)制之一。本研究通過(guò)對(duì)比UC大鼠腸道菌群及乙酸、內(nèi)毒素變化,探索UC大鼠的腸道微生態(tài)特征及安腸湯干預(yù)機(jī)制。方法:1.按照試驗(yàn)一采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)造模法進(jìn)行造模并分組,造模后第10天開始灌胃,灌胃7天后處死大鼠并取材。2.取病變部位結(jié)腸內(nèi)容物提取糞便細(xì)菌基因組DNA,采用SYBRGreen熒光染料法對(duì)提取物進(jìn)行各菌屬實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè),各組菌屬含量采用Delta-deltaCt相對(duì)定量法定量并制作柱狀圖直觀分析;以液相色譜法檢測(cè)乙酸含量;鱟試劑法檢測(cè)大鼠腸道內(nèi)毒素含量。結(jié)果:1.UC模型組大鼠腸道菌群變化:與正常對(duì)照組相比,UC模型組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭菌屬、脆弱擬桿菌屬、單形擬桿菌、多形擬桿菌、卵形擬桿菌、普通擬桿菌中表達(dá)含量明顯降低(p0.05),在擬桿菌屬、梭桿菌屬、肉毒桿菌、艱難桿菌、吉氏擬桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌中則表達(dá)含量明顯升高(p0.05)。2.美沙拉嗪組和麗珠腸樂(lè)組大鼠腸道菌群變化:與UC模型組相比,美沙拉嗪組和麗珠腸樂(lè)組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭菌屬、脆弱擬桿菌屬、多形擬桿菌、卵形擬桿菌、普通擬桿菌中表達(dá)含量明顯升高(p0.05);在單形擬桿菌中,美沙拉嗪組較UC模型組表達(dá)含量升高無(wú)明顯差異(p0.05),而麗珠腸樂(lè)組較UC模型組表達(dá)含量明顯升高(p0.05);在梭桿菌屬、肉毒桿菌、艱難桿菌、吉氏擬桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌中美沙拉嗪組與麗珠腸樂(lè)組相對(duì)表達(dá)含量較UC模型組明顯降低(p0.05);在擬桿菌屬中,美沙拉嗪組較UC模型組降低無(wú)差異(p0.05),而麗珠腸樂(lè)組較UC模型組明顯降低(p0.05)。3.安腸湯各組大鼠腸道菌群變化:與UC模型組相比,安腸湯各組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭菌屬、脆弱擬桿菌屬、多形擬桿菌、卵形擬桿菌、普通擬桿菌中表達(dá)含量明顯升高(p0.05);在梭桿菌屬、肉毒桿菌、艱難桿菌、吉氏擬桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌中表達(dá)含量明顯降低(p0.05);在單形擬桿菌中,安腸湯低劑量組較UC模型組升高無(wú)明顯差異(p0.05),而中劑量組和高劑量組較UC模型組明顯升高(p0.05)。4.安腸湯各組組間大鼠腸道菌群變化:安腸湯中劑量組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭桿菌屬、脆弱擬桿菌、單形擬桿菌、多形擬桿菌、肉毒桿菌、普通擬桿菌、艱難桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌較其他兩組更明顯接近空白對(duì)照組(p0.05),而高劑量組在擬桿菌屬、梭菌屬、卵形桿菌、吉氏擬桿菌則較其他兩組更明顯接近空白對(duì)照組(p0.05)。5.安腸湯中劑量組與美沙拉嗪組、麗珠腸樂(lè)組腸道菌群變化對(duì)比:安腸湯中劑量組的表達(dá)含量在乳酸桿菌、脆弱擬桿菌、吉氏擬桿菌中較麗珠腸樂(lè)組更明顯接近空白對(duì)照組(p0.05),在雙歧桿菌、梭菌屬、單形擬桿菌、肉毒桿菌中較美沙拉嗪組更明顯接近空白對(duì)照組(p0.05),在大腸桿菌、屎腸球菌、糞腸球菌、艱難桿菌、普通擬桿菌、卵形桿菌、多形擬桿菌和擬桿菌屬中的相對(duì)表達(dá)含量較美沙拉嗪組和麗珠腸樂(lè)組均更明顯接近空白對(duì)照組(p0.05)。6.乙酸和內(nèi)毒素變化:模型組明顯高于空白對(duì)照組和各治療組p0.05㖞,但各治療組間比較均無(wú)明顯差別p㧐0.05㖞結(jié)論:1.UC大鼠腸道菌群變化具有明顯差異性和特征性,雙歧桿菌、乳酸桿菌、脆弱擬桿菌屬、梭菌屬、卵形擬桿菌、多形擬桿菌、單形擬桿菌、普通擬桿菌中相對(duì)表達(dá)含量降低;艱難桿菌、擬桿菌屬、肉毒桿菌、梭桿菌屬、糞腸球菌、吉氏擬桿菌、大腸桿菌、屎腸球菌中則相對(duì)表達(dá)含量升高,這種變化可能在UC的發(fā)病中可能起到重要作用。2.安腸湯對(duì)UC大鼠總體腸道菌屬具有明顯的調(diào)節(jié)作用,在總體上與美沙拉嗪和麗珠腸樂(lè)具有一致性,調(diào)控幅度相對(duì)優(yōu)于美沙拉嗪組及麗珠腸樂(lè)組,安腸湯對(duì)UC腸道菌群的調(diào)控作用可能是其治療UC的作用機(jī)制。3.安腸湯中劑量相較高劑量組和低劑量組對(duì)UC大鼠疾病癥狀和腸道菌群具有更顯著的調(diào)節(jié)作用,或許提示適當(dāng)上調(diào)臨床應(yīng)用劑量是合適的。4.UC大鼠的乙酸和內(nèi)毒素變化可能是UC發(fā)病原因或表現(xiàn)特點(diǎn),美沙拉嗪、麗珠腸樂(lè)及安腸湯對(duì)兩者均有一定的調(diào)節(jié)意義,但各組間的調(diào)節(jié)作用沒(méi)有明顯差異。
[Abstract]:Objective : To study the effect of Anchang Decoction on UC in rats . The results showed that 1 . The rats were divided into three groups : 1 , 4 , 6 - trinitrobenzene sulfonic acid ( TNBS ) and TNBS dose of 90 mg / kg . The intestinal microecological characteristics of UC rats were determined by using 2,4,6 - trinitrobenzene sulfonic acid ( TNBS ) .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1716687