發(fā)布時間：2018-04-01 02:04

  本文選題：膀胱癌　切入點：YAP1　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：膀胱癌(Bladder cancer)是人類泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,其中絕大部分為尿路上皮癌(Bladder urothelial carcinoma)。隨著膀胱腫瘤電切、膀胱癌根治技術(shù)的不斷普及和提高,膀胱癌的治療效果得到了不斷的改善;但是,初發(fā)膀胱癌經(jīng)正規(guī)治療后,仍容易復(fù)發(fā)和進展,甚至導致死亡,因而,膀胱癌的治療仍然是一個世界性的難題。本實驗通過探討YAP1促進膀胱癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)分子機制,將有助于臨床上尋找防治膀胱癌浸潤、轉(zhuǎn)移的方法和策略,為膀胱癌的治療提供新的思路;為將來實現(xiàn)膀胱癌的分子靶向治療,提供新的治療靶點。第一章膀胱癌組織、細胞株中YAP1、E-cadherin和Vimentin的表達及其臨床意義目的:檢測膀胱癌細胞株、膀胱癌組織和癌旁組織中YAP1、E-cadherin和Vimentin的表達水平,并分析三者表達的相關(guān)性,以及YAP1、E-cadherin的表達與膀胱癌病理分級、分期、預(yù)后之間的關(guān)系。方法:收集18例膀胱癌組織及癌旁粘膜組織,用熒光定量PCR法檢測YAP 1、E-cadherin、Vimentin表達。IHC法檢測55例膀胱癌組織(組織芯片)、10例癌旁粘膜組織(組織芯片)中YAP1、E-cadherin、Vimentin蛋白表達的差異。并統(tǒng)計分析三者的表達與病理分級、分期之間的關(guān)系,以及YAP1、E-cadherin表達與膀胱癌預(yù)后之間的關(guān)系。RT-qPCR、Western-blot法檢測膀胱癌細胞株T24、UMUC3及正常膀胱粘膜細胞中YAP1、E-cadherin、Vimentin表達的差異。結(jié)果:55例膀胱癌組織的免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)癌組織中YAP1和Vimentin表達升高,E-cadherin表達降低;且高級別癌組織中的YAP1表達高于低級別組;肌層浸潤性膀胱癌組中的YAP1表達高于非肌層浸潤性膀胱癌組;生存分析發(fā)現(xiàn)YAP1高表達組、E-cadherin低表達組的總體生存率均分別低于YAP1低表達組、E-cadherin高表達組。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)YAP1的表達與E-cadherin的表達成負相關(guān),與Vimentin的表達成正相關(guān)。同時熒光定量PCR檢測也發(fā)現(xiàn)18例膀胱癌組織中YAP1、Vimentin表達高于癌旁組織,而E-cadherin的表達低于癌旁組織。膀胱癌細胞中三者的表達與膀胱癌組織結(jié)果相符。結(jié)論:YAP1在膀胱癌組織、膀胱癌細胞株中高表達,與E-cadherin的表達成負相關(guān),與Vimentin的表達成正相關(guān),與膀胱癌組織的惡性程度、分期密切相關(guān),并且YAP1高表達提示更差的預(yù)后。第二章YAP1對人膀胱癌細胞侵襲功能及EMT的影響目的:通過siRNA干擾技術(shù)下調(diào)膀胱癌細胞中YAP1的表達,研究YAP1對細胞侵襲功能、EMT的影響。方法:采用YAP1 siRNA轉(zhuǎn)染人膀胱癌細胞株UMUC3和T24,下調(diào)YAP1表達;然后利用Transwell法檢測YAP1被抑制后對細胞侵襲能力的影響;RTqPCR 和 Western blot 法檢測 EMT 相關(guān)蛋白 E-cadherin、Vimentin 的表達。結(jié)果:下調(diào)膀胱癌細胞YAP1的表達后,細胞的侵襲能力受到顯著抑制。下調(diào)YAP1后EMT標志蛋白Vimentin表達下降,E-cadherin表達升高。RTqPCR結(jié)果與其一致。結(jié)論:下調(diào)YAP1表達可以逆轉(zhuǎn)人膀胱癌細胞的EMT并降低其侵襲能力。第三章YAP1促進人膀胱癌細胞EMT的相關(guān)機制以及E-cadherin的反饋作用目的:探討YAP1對UMUC3和T24細胞EMT上游調(diào)節(jié)蛋白ZEB1、Snail1表達的影響,探討YAP1在膀胱癌細胞中促進EMT的內(nèi)在機制,以及E-cadherin表達下調(diào)后對YAP1、EMT相關(guān)蛋白的反饋作用。方法:YAP1-siRNA、E-cadherin-siRNA分別轉(zhuǎn)染人膀胱癌細胞株UMUC3和T24細胞下調(diào)YAP1或E-cadherin表達。檢測下調(diào)YAP1表達對Snail1、ZEB1、p-AKT 表達的影響;檢測下調(diào) E-cadherin 表達對 YAP1、Vimentin、ZEB1、Snail表達的影響。應(yīng)用pcDNA-YAP1轉(zhuǎn)染T24、UMUC3細胞過表達YAP1,檢測EMT相關(guān)蛋白及p-AKT蛋白表達,并應(yīng)用Ipatasertib抑制AKT后檢測EMT相關(guān)蛋白表達。結(jié)果:干擾YAP1后Snail1、ZEB1、p-AKT表達下調(diào),干擾E-cadherin后YAP1、ZEB1、Snail1與Vimentin表達上調(diào)。YAP1過表達后p-AKT表達上調(diào),EMT相關(guān)蛋白Vimentin、ZEB1、Snail1表達上調(diào),E-cadherin表達下調(diào);且這種影響可被AKT抑制劑部分抑制。結(jié)論:YAP1可通過AKT信號通路促進膀胱癌細胞EMT,E-cadherin可反饋作用于YAP1及EMT相關(guān)蛋白,使后兩者表達上調(diào)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

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本文編號：1693457