本文選題：膀胱癌　切入點(diǎn)：YAP1　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：膀胱癌(Bladder cancer)是人類泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,其中絕大部分為尿路上皮癌(Bladder urothelial carcinoma)。隨著膀胱腫瘤電切、膀胱癌根治技術(shù)的不斷普及和提高,膀胱癌的治療效果得到了不斷的改善;但是,初發(fā)膀胱癌經(jīng)正規(guī)治療后,仍容易復(fù)發(fā)和進(jìn)展,甚至導(dǎo)致死亡,因而,膀胱癌的治療仍然是一個(gè)世界性的難題。本實(shí)驗(yàn)通過探討YAP1促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)分子機(jī)制,將有助于臨床上尋找防治膀胱癌浸潤、轉(zhuǎn)移的方法和策略,為膀胱癌的治療提供新的思路;為將來實(shí)現(xiàn)膀胱癌的分子靶向治療,提供新的治療靶點(diǎn)。第一章膀胱癌組織、細(xì)胞株中YAP1、E-cadherin和Vimentin的表達(dá)及其臨床意義目的:檢測膀胱癌細(xì)胞株、膀胱癌組織和癌旁組織中YAP1、E-cadherin和Vimentin的表達(dá)水平,并分析三者表達(dá)的相關(guān)性,以及YAP1、E-cadherin的表達(dá)與膀胱癌病理分級、分期、預(yù)后之間的關(guān)系。方法:收集18例膀胱癌組織及癌旁粘膜組織,用熒光定量PCR法檢測YAP 1、E-cadherin、Vimentin表達(dá)。IHC法檢測55例膀胱癌組織(組織芯片)、10例癌旁粘膜組織(組織芯片)中YAP1、E-cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)的差異。并統(tǒng)計(jì)分析三者的表達(dá)與病理分級、分期之間的關(guān)系,以及YAP1、E-cadherin表達(dá)與膀胱癌預(yù)后之間的關(guān)系。RT-qPCR、Western-blot法檢測膀胱癌細(xì)胞株T24、UMUC3及正常膀胱粘膜細(xì)胞中YAP1、E-cadherin、Vimentin表達(dá)的差異。結(jié)果:55例膀胱癌組織的免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)癌組織中YAP1和Vimentin表達(dá)升高,E-cadherin表達(dá)降低;且高級別癌組織中的YAP1表達(dá)高于低級別組;肌層浸潤性膀胱癌組中的YAP1表達(dá)高于非肌層浸潤性膀胱癌組;生存分析發(fā)現(xiàn)YAP1高表達(dá)組、E-cadherin低表達(dá)組的總體生存率均分別低于YAP1低表達(dá)組、E-cadherin高表達(dá)組。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)YAP1的表達(dá)與E-cadherin的表達(dá)成負(fù)相關(guān),與Vimentin的表達(dá)成正相關(guān)。同時(shí)熒光定量PCR檢測也發(fā)現(xiàn)18例膀胱癌組織中YAP1、Vimentin表達(dá)高于癌旁組織,而E-cadherin的表達(dá)低于癌旁組織。膀胱癌細(xì)胞中三者的表達(dá)與膀胱癌組織結(jié)果相符。結(jié)論:YAP1在膀胱癌組織、膀胱癌細(xì)胞株中高表達(dá),與E-cadherin的表達(dá)成負(fù)相關(guān),與Vimentin的表達(dá)成正相關(guān),與膀胱癌組織的惡性程度、分期密切相關(guān),并且YAP1高表達(dá)提示更差的預(yù)后。第二章YAP1對人膀胱癌細(xì)胞侵襲功能及EMT的影響目的:通過siRNA干擾技術(shù)下調(diào)膀胱癌細(xì)胞中YAP1的表達(dá),研究YAP1對細(xì)胞侵襲功能、EMT的影響。方法:采用YAP1 siRNA轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞株UMUC3和T24,下調(diào)YAP1表達(dá);然后利用Transwell法檢測YAP1被抑制后對細(xì)胞侵襲能力的影響;RTqPCR 和 Western blot 法檢測 EMT 相關(guān)蛋白 E-cadherin、Vimentin 的表達(dá)。結(jié)果:下調(diào)膀胱癌細(xì)胞YAP1的表達(dá)后,細(xì)胞的侵襲能力受到顯著抑制。下調(diào)YAP1后EMT標(biāo)志蛋白Vimentin表達(dá)下降,E-cadherin表達(dá)升高。RTqPCR結(jié)果與其一致。結(jié)論:下調(diào)YAP1表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)人膀胱癌細(xì)胞的EMT并降低其侵襲能力。第三章YAP1促進(jìn)人膀胱癌細(xì)胞EMT的相關(guān)機(jī)制以及E-cadherin的反饋?zhàn)饔媚康?探討YAP1對UMUC3和T24細(xì)胞EMT上游調(diào)節(jié)蛋白ZEB1、Snail1表達(dá)的影響,探討YAP1在膀胱癌細(xì)胞中促進(jìn)EMT的內(nèi)在機(jī)制,以及E-cadherin表達(dá)下調(diào)后對YAP1、EMT相關(guān)蛋白的反饋?zhàn)饔谩７椒?YAP1-siRNA、E-cadherin-siRNA分別轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞株UMUC3和T24細(xì)胞下調(diào)YAP1或E-cadherin表達(dá)。檢測下調(diào)YAP1表達(dá)對Snail1、ZEB1、p-AKT 表達(dá)的影響;檢測下調(diào) E-cadherin 表達(dá)對 YAP1、Vimentin、ZEB1、Snail表達(dá)的影響。應(yīng)用pcDNA-YAP1轉(zhuǎn)染T24、UMUC3細(xì)胞過表達(dá)YAP1,檢測EMT相關(guān)蛋白及p-AKT蛋白表達(dá),并應(yīng)用Ipatasertib抑制AKT后檢測EMT相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:干擾YAP1后Snail1、ZEB1、p-AKT表達(dá)下調(diào),干擾E-cadherin后YAP1、ZEB1、Snail1與Vimentin表達(dá)上調(diào)。YAP1過表達(dá)后p-AKT表達(dá)上調(diào),EMT相關(guān)蛋白Vimentin、ZEB1、Snail1表達(dá)上調(diào),E-cadherin表達(dá)下調(diào);且這種影響可被AKT抑制劑部分抑制。結(jié)論:YAP1可通過AKT信號通路促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞EMT,E-cadherin可反饋?zhàn)饔糜赮AP1及EMT相關(guān)蛋白,使后兩者表達(dá)上調(diào)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 嘉勉;膀胱癌基因被確認(rèn)[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2004年03期

2 青云;英國科學(xué)家辨別出與膀胱癌有關(guān)的基因[J];中國處方藥;2004年08期

3 ;特殊激素可導(dǎo)致男性患膀胱癌幾率升高[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年11期

4 肖建利;張麗芳;劉巧莉;;白花蛇舌草治療膀胱癌1例[J];臨床合理用藥雜志;2009年08期

5 丁虹彬，，余雪軒;培養(yǎng)膀胱癌細(xì)胞的新方法[J];南京醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1994年01期

6 張曉峰;劉訓(xùn)勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

7 孫宏志,凡杰,唐孝達(dá);自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對膀胱癌細(xì)胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

8 章小平,楊紅枚,魯功成;膀胱癌穩(wěn)定表達(dá)多藥耐受相關(guān)蛋白亞克隆的生物學(xué)特征[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2000年03期

9 漆少廷,徐錫坤,王心如;膀胱癌的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊;2000年04期

10 章小平,楊紅枚,魯功成;流式細(xì)胞儀在膀胱癌多藥耐受研究中的應(yīng)用[J];臨床泌尿外科雜志;2000年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e

本文編號：1693457