發(fā)布時間：2018-03-31 21:48

  本文選題：IL-17A　切入點：Act1　出處：《南京醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：目的:糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病后期最嚴重的并發(fā)癥之一,造成全世界范圍內(nèi),i青壯年的患者致盲而失去勞動能力的主要原因,糖尿病視網(wǎng)膜病變的病因機制復雜的,涉及炎癥因子,血管及神經(jīng)等各個方面,糖網(wǎng)發(fā)展過程引起糖尿病視網(wǎng)膜的結構和功能的改變,引起越來越多臨床醫(yī)師的重視,整個病程中最主要顯示糖尿病視網(wǎng)膜病變的早期,調(diào)節(jié)炎癥的細胞因子包括白介素IL-1,白介素IL-6白介素IL-8,白介素IL-10,白介素IL-12和白介素IL-18,在糖尿病患者的眼內(nèi)液中有明顯的增加,糖尿病視網(wǎng)膜的病理炎癥性改變促使了血視網(wǎng)膜屏障破壞,視網(wǎng)膜新生血管化,造成視網(wǎng)膜中谷氨酸代謝的障礙,隨后引發(fā)視網(wǎng)膜神經(jīng)元的凋亡,核心的實驗研究主要通過挑選研究白介素家族中IL-17A在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的作用,來闡明白介素和糖網(wǎng)的關系。實驗一開始先以Ins2秋田糖尿病鼠和高血糖培養(yǎng)的原代的Muller細胞作為模擬糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理學模型。高糖和糖尿病都可以誘導了網(wǎng)膜表達IL-17A,再由IL-17A去激動的Act1信號通路下游的信號通路,從而誘導了 Muller細胞的激動并引發(fā)其細胞功能的障礙。實驗中還可以證實用IL-17A進行玻璃體腔內(nèi)注射可以加劇糖尿病誘導的視網(wǎng)膜血管的白細胞淤滯和血管滲漏以及節(jié)細胞的凋亡等病理變化,反之,對于Act1信號的壓制或者抗IL-17A單克隆抗體可以改善視網(wǎng)膜血管的損傷和其造成的神經(jīng)元細胞的凋亡,這些發(fā)現(xiàn)證實了 IL-17A通過Act1信號通路而損傷Muller細胞功能,進而加速惡化了糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理過程。而對其進行阻斷性的實驗治療研究則可能在將來代表著一種對于糖尿病視網(wǎng)膜病變的嶄新的治療方法。方法:本項研究分兩方面進行。第一方面在于動物模型實驗雄性雜合秋田鼠可以自行發(fā)展出胰島素依賴的糖尿病,這些秋田鼠都接受了玻璃體腔內(nèi)的注射,高血糖的秋田鼠的視網(wǎng)膜會表現(xiàn)出糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理學特征。玻璃體腔內(nèi)的注射用鼠源性重組IL-17A(8或40ng/2uL或者是中性化的單克隆抗體抗-IL-17A。(mAb,2或10ng/2ul)注射入實驗秋田鼠的玻璃體腔內(nèi)。另一種是以腺病毒作載體基因表達的短發(fā)夾RNA,標定為Act1(Ad-Act1-shRNA)的制成品,也被注射入秋田鼠的玻璃體腔內(nèi)。這批實驗小鼠接受了玻璃體體腔內(nèi)的腺病毒注射,并用于網(wǎng)膜造影的檢查。詳細計數(shù)每張網(wǎng)膜上粘附的白細胞,評估網(wǎng)膜血管的白細胞淤滯。用免疫熒光顯微鏡觀察網(wǎng)膜造影的結果。通過免疫組化和TUNEL染色確認凋亡的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞。第二方面在于細胞培養(yǎng)和處理原代的大鼠網(wǎng)膜Muller細胞的培養(yǎng),高糖處理,注入IL-17A(25ngml-1)和/或者/IKK的阻斷劑(菊內(nèi)酯),高糖條件下,腺病毒載體-Act-shRNA作為多樣性感染感染原代Muller細胞。分別進行免疫著色分析,酶聯(lián)免疫吸附測定,以及通過高效液相色譜法進行數(shù)量化計算。結果:相對于野生型小鼠,在糖尿病開始后的三個月后,在秋田鼠的糖尿病動物模型中,網(wǎng)膜Muller細胞IL-17A和IL-17RA的表達被上調(diào)了,同時在網(wǎng)膜中也表現(xiàn)出了 IL-17A的成分明顯增加。在高糖處理的Muller細胞中和秋田鼠的網(wǎng)膜組織中,Act1/TRAF6/IKK/NF-κB信號系統(tǒng)會被加強,如用IL-17A處理后,會進一步加強。通過Act1/IKK信號系統(tǒng)IL-17A惡化了高糖誘導的Muller細胞的活動和功能不良.通過Act1信號系統(tǒng),IL-17A惡化了秋田鼠的血視網(wǎng)膜屏障的崩解,在秋田鼠中,通過Act1信號系統(tǒng)IL-17A可以增加網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡.結論:在網(wǎng)膜的Muller細胞中,糖尿病誘導了 IL-17A的制造和IL-17RA/Act1/TRAF6/IKK/NF-κB的信號系統(tǒng)的起動,外因性的IL-17A注入可以惡化糖尿病誘導的Muller細胞的活動和功能不良,以及血視網(wǎng)膜屏障的分裂以及網(wǎng)膜神經(jīng)元的凋亡,然而,阻斷IL-17A可以減輕這些網(wǎng)膜的病理改變,另外,阻斷這些炎癥信號的通路,用Act1調(diào)低或者一種IKK的阻斷劑,可以減緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理性改變,這些發(fā)現(xiàn)都表明,在糖尿病中,在網(wǎng)膜Muller細胞中IL-17A的產(chǎn)出和Act1信號系統(tǒng)的活動代表了一種炎性反應,這一反應加速了糖尿病視網(wǎng)膜病變的進展。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between IL - 17A and IL - 17A in diabetic retinopathy . The expression of IL - 17A and IL - 17RA in the retinal ganglion cells induced by high glucose was investigated by immunohistochemistry and TUNEL staining .

【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2;R774.1

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