本文選題：腎透明細胞癌　切入點：自然殺傷細胞　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：研究目的:腎透明細胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是我國常見的泌尿系腫瘤,發(fā)病率高,早期發(fā)現不易。腎透明細胞癌在其發(fā)生、發(fā)展的過程中容易受到腫瘤微環(huán)境中的各種細胞的調控影響。并且當其抗腫瘤免疫反應發(fā)生缺陷的時候,腎透明細胞癌患者往往臨床預后不良。自然殺傷(Natural killer cells,NK)細胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在抗腫瘤效應中發(fā)揮了關鍵性的作用。本研究目的旨在探索NK細胞在腎細胞癌中免疫應答發(fā)生缺陷的機制。研究方法:(1)從腎透明細胞癌患者和對照者中,搜集手術切除組織和外周血標本,采用流式細胞術檢測NK細胞的頻數和表型。(2)檢測NK細胞殺傷和分泌細胞因子的功能,分析其與腎透明細胞癌進展的關系。(3)培養(yǎng)腫瘤組織、癌旁組織及良性腫瘤旁組織原代細胞,將各組原代細胞與正常NK細胞在transwell小室上進行共孵育,判斷腫瘤細胞與NK細胞細胞間通訊方式。提取細胞外泌體,進行電鏡、WB、外泌體粒徑分布檢測,同時分析其與腎透明細胞癌進展的關系。將提取的外泌體與NK共孵育測NK細胞的功能。(4)分別提取腎癌腫瘤細胞系786-O、正常腎臟上皮細胞HK-2系培養(yǎng)上清中外泌體(exosome),并將提取的exosome與NK細胞進行共培養(yǎng)。使用ELISA檢測細胞上清外環(huán)境細胞因子分泌情況,同時將786-O敲減TGF-β1后提取的exosome與NK細胞共孵育,檢測NK細胞的殺傷功能,并使用WB檢測TGF-β下游信號通路,分析腎透明細胞癌來源的外泌體誘導NK細胞功能失調的機制。研究結果:(1)我們發(fā)現腎透明細胞癌組織中浸潤的NK細胞頻數較癌旁組織明顯較少,較非癌組織較多。而外周血中NK細胞比例并無明顯差異。表型檢測發(fā)現,腫瘤浸潤的NK細胞活化性受體表達減少,抑制性受體表達增多,呈抑制性表型。(2)進一步檢測NK細胞的功能,我們發(fā)現腫瘤浸潤的NK細胞殺傷和分泌細胞因子的功能發(fā)生缺陷。比較不同腫瘤分期NK分泌及殺傷功能,隨著患者腫瘤惡性程度增加,NK細胞的分泌及殺傷功能下降程度增加。(3)我們培養(yǎng)原代腫瘤細胞,通過transwell共培養(yǎng)體系我們發(fā)現,腫瘤細胞主要通過外泌體作用的方式抑制NK細胞功能。提取鑒定原代細胞的外泌體與NK細胞共孵育,發(fā)現外泌體可以抑制NK細胞的功能。比較不同腫瘤分期腫瘤組織分泌外泌體的情況,我們發(fā)現隨著患者腫瘤惡性程度增加,外泌體的分泌濃度增多。(4)ELISA顯示腫瘤細胞微環(huán)境大量分布TGF-β1,并且我們在外泌體上檢測到TGF-β1表達。通過敲減TGF-β1,我們發(fā)現腎透明細胞癌來源的外泌體通過TGF-β1/SMAD信號途徑作用于NK細胞,誘導其功能發(fā)生缺陷。結論:1.腎透明細胞癌中,腎透明細胞癌組織中浸潤的NK細胞頻數較癌旁組織明顯較少,較非癌組織較多。NK細胞呈現抑制性的表型。2.腫瘤侵潤的NK細胞分泌細胞因子及殺傷功能發(fā)生明顯缺陷,并且隨著患者腫瘤惡性程度增加,NK細胞的分泌及殺傷功能下降程度增加。3.成功培養(yǎng)了原代ccRCC細胞,ccRCC主要通過外泌體作用的方式抑制NK細胞功能。外泌體可以抑制NK細胞的功能,并且隨著患者腫瘤惡性程度增加,外泌體的分泌濃度增多,抑制效果越強。4.腎透明細胞癌來源的外泌體通過TGF-β1/SMAD信號通路誘導NK細胞功能發(fā)生缺陷。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the effects of NK cells on the immune response in renal cell carcinoma . ( 2 ) The function of NK cells was detected by means of TGF - 尾1 / SMAD signaling pathway .

【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

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本文編號：1680367