本文選題：腎透明細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：自然殺傷細(xì)胞　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究目的:腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是我國常見的泌尿系腫瘤,發(fā)病率高,早期發(fā)現(xiàn)不易。腎透明細(xì)胞癌在其發(fā)生、發(fā)展的過程中容易受到腫瘤微環(huán)境中的各種細(xì)胞的調(diào)控影響。并且當(dāng)其抗腫瘤免疫反應(yīng)發(fā)生缺陷的時(shí)候,腎透明細(xì)胞癌患者往往臨床預(yù)后不良。自然殺傷(Natural killer cells,NK)細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在抗腫瘤效應(yīng)中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。本研究目的旨在探索NK細(xì)胞在腎細(xì)胞癌中免疫應(yīng)答發(fā)生缺陷的機(jī)制。研究方法:(1)從腎透明細(xì)胞癌患者和對(duì)照者中,搜集手術(shù)切除組織和外周血標(biāo)本,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測NK細(xì)胞的頻數(shù)和表型。(2)檢測NK細(xì)胞殺傷和分泌細(xì)胞因子的功能,分析其與腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)系。(3)培養(yǎng)腫瘤組織、癌旁組織及良性腫瘤旁組織原代細(xì)胞,將各組原代細(xì)胞與正常NK細(xì)胞在transwell小室上進(jìn)行共孵育,判斷腫瘤細(xì)胞與NK細(xì)胞細(xì)胞間通訊方式。提取細(xì)胞外泌體,進(jìn)行電鏡、WB、外泌體粒徑分布檢測,同時(shí)分析其與腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)系。將提取的外泌體與NK共孵育測NK細(xì)胞的功能。(4)分別提取腎癌腫瘤細(xì)胞系786-O、正常腎臟上皮細(xì)胞HK-2系培養(yǎng)上清中外泌體(exosome),并將提取的exosome與NK細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。使用ELISA檢測細(xì)胞上清外環(huán)境細(xì)胞因子分泌情況,同時(shí)將786-O敲減TGF-β1后提取的exosome與NK細(xì)胞共孵育,檢測NK細(xì)胞的殺傷功能,并使用WB檢測TGF-β下游信號(hào)通路,分析腎透明細(xì)胞癌來源的外泌體誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能失調(diào)的機(jī)制。研究結(jié)果:(1)我們發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌組織中浸潤的NK細(xì)胞頻數(shù)較癌旁組織明顯較少,較非癌組織較多。而外周血中NK細(xì)胞比例并無明顯差異。表型檢測發(fā)現(xiàn),腫瘤浸潤的NK細(xì)胞活化性受體表達(dá)減少,抑制性受體表達(dá)增多,呈抑制性表型。(2)進(jìn)一步檢測NK細(xì)胞的功能,我們發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤的NK細(xì)胞殺傷和分泌細(xì)胞因子的功能發(fā)生缺陷。比較不同腫瘤分期NK分泌及殺傷功能,隨著患者腫瘤惡性程度增加,NK細(xì)胞的分泌及殺傷功能下降程度增加。(3)我們培養(yǎng)原代腫瘤細(xì)胞,通過transwell共培養(yǎng)體系我們發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞主要通過外泌體作用的方式抑制NK細(xì)胞功能。提取鑒定原代細(xì)胞的外泌體與NK細(xì)胞共孵育,發(fā)現(xiàn)外泌體可以抑制NK細(xì)胞的功能。比較不同腫瘤分期腫瘤組織分泌外泌體的情況,我們發(fā)現(xiàn)隨著患者腫瘤惡性程度增加,外泌體的分泌濃度增多。(4)ELISA顯示腫瘤細(xì)胞微環(huán)境大量分布TGF-β1,并且我們在外泌體上檢測到TGF-β1表達(dá)。通過敲減TGF-β1,我們發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌來源的外泌體通過TGF-β1/SMAD信號(hào)途徑作用于NK細(xì)胞,誘導(dǎo)其功能發(fā)生缺陷。結(jié)論:1.腎透明細(xì)胞癌中,腎透明細(xì)胞癌組織中浸潤的NK細(xì)胞頻數(shù)較癌旁組織明顯較少,較非癌組織較多。NK細(xì)胞呈現(xiàn)抑制性的表型。2.腫瘤侵潤的NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及殺傷功能發(fā)生明顯缺陷,并且隨著患者腫瘤惡性程度增加,NK細(xì)胞的分泌及殺傷功能下降程度增加。3.成功培養(yǎng)了原代ccRCC細(xì)胞,ccRCC主要通過外泌體作用的方式抑制NK細(xì)胞功能。外泌體可以抑制NK細(xì)胞的功能,并且隨著患者腫瘤惡性程度增加,外泌體的分泌濃度增多,抑制效果越強(qiáng)。4.腎透明細(xì)胞癌來源的外泌體通過TGF-β1/SMAD信號(hào)通路誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能發(fā)生缺陷。
[Abstract]:The purpose of this study was to investigate the effects of NK cells on the immune response in renal cell carcinoma . ( 2 ) The function of NK cells was detected by means of TGF - 尾1 / SMAD signaling pathway .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.11

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本文編號(hào)：1680367