本文選題：阿爾茨海默病　切入點(diǎn)：中藥復(fù)方金思維　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：目的阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種年齡相關(guān)的進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病,其特征在于記憶和認(rèn)知功能的進(jìn)行性衰退,以及行為和性格的變化。多項(xiàng)研究指出AD早期階段表現(xiàn)腦葡萄糖代謝的異常,且在認(rèn)知能力下降之前已經(jīng)存在,可能是AD臨床無(wú)癥狀早期發(fā)展的關(guān)鍵病理改變。金思維是中藥復(fù)方專利制劑,由補(bǔ)腎、化痰、益氣和活血藥物組成,包括肉蓯蓉、人參、石菖蒲、郁金等。前期研究結(jié)果表明金思維可以改善和延緩AD患者記憶衰退,但對(duì)AD早期階段的具體治療靶點(diǎn)未有研究。本研究通過(guò)觀察中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠腦葡萄糖代謝損傷的影響,探討金思維治療AD早期階段的作用靶點(diǎn),為金思維早期治療AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料和方法1.采用3月齡APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠為AD模型小鼠,將其隨機(jī)分為5組,分別為模型組、多奈哌齊組、金思維大、中、小劑量組。同窩C57/BL6J小鼠為正常對(duì)照組。多奈哌齊組予鹽酸多奈哌齊(0.92mg/kg/d)灌胃;金思維大劑量組予金思維(20g/kg/d)灌胃;金思維中劑量組予金思維(lOg/kg/d)灌胃;金思維小劑量組予金思維(5g/kg/d)灌胃;正常對(duì)照組和模型組予等體積0.5%CMC灌胃。1次/日,連續(xù)灌胃3個(gè)月。2.應(yīng)用Morris水迷宮和跳臺(tái)檢測(cè)中藥復(fù)方金思維治療3個(gè)月后小鼠行為學(xué)變化,評(píng)價(jià)中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的影響。3.運(yùn)用透射電子顯微鏡觀察中藥復(fù)方金思維治療3個(gè)月后,AD小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元和突觸超微結(jié)構(gòu)的改變,評(píng)價(jià)中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠神經(jīng)元、突觸結(jié)構(gòu)和數(shù)量的影響。4.通過(guò)Micro-PET檢測(cè)中藥復(fù)方金思維治療3個(gè)月后AD小鼠顳葉、頂葉、額葉和海馬的腦葡萄糖攝取情況。5.運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Western-blot和RT-PCR方法從蛋白水平和mRNA水平上觀察AD小鼠海馬GLUT1、GLUT3和胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白PI3K、Akt、p-GSK3β、p-mTOR的表達(dá),評(píng)價(jià)中藥復(fù)方金思維對(duì)腦葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的影響在Morris水迷宮隱藏平臺(tái)實(shí)驗(yàn)中,各組小鼠逃避潛伏期隨訓(xùn)練次數(shù)增加均呈下降趨勢(shì)。與正常對(duì)照組相比,模型組從第1天到第5天逃避潛伏期均有明顯延長(zhǎng)(P0.01)。與模型組相比,各治療組第1-2天無(wú)差異(P0.05),第3天金思維小劑量逃避潛伏期縮短(P0.05),第4-5天,各治療組均有縮短或者明顯縮短(P0.01或P0.05)。各組小鼠在尋找潛藏平臺(tái)的游泳距離隨訓(xùn)練次數(shù)的增加而有所減少。和正常對(duì)照組相比,模型組從第1天到第5天逃游泳距離均有減少(P0.01或P0.05)。與模型組相比,第1-2天,各治療組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);第3天,金思維各劑量組游泳距離縮短(P0.01或P0.05);第4-5天,各治療組均有減少或者明顯減少(P0.01或P0.05)。在Morris水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)中,與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠120s內(nèi)穿越平臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間顯著減少(P0.01);與模型組相比,各治療組目標(biāo)停留時(shí)間均增加(P0.01或P0.05),金思維中、小劑量組穿越平臺(tái)次數(shù)增加(P0.05)。在小鼠跳臺(tái)測(cè)試中,與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠經(jīng)過(guò)訓(xùn)練后錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加(P0.01)。與模型組相比,多奈哌齊組和金思維中劑量組錯(cuò)誤次數(shù)減少(P0.05),金思維小劑量組錯(cuò)誤次數(shù)明顯減少(P0.01)。比較各組小鼠訓(xùn)練后潛伏期,與正常對(duì)照組相比,模型組潛伏期明顯縮短(P0.01);與模型組比,金思維各組潛伏期均有延長(zhǎng)或者明顯延長(zhǎng)(P0.01或者P0.05),多奈哌齊組無(wú)差異(P0.05)。2.中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠神經(jīng)元和突觸超微結(jié)構(gòu)影響電鏡觀察正常對(duì)照組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元和突觸結(jié)構(gòu)均正常。模型組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則,電子密度增高,染色質(zhì)邊集,高爾基體腫脹,部分線粒體變性,可見明顯增多的脂褐素,神經(jīng)氈內(nèi)突觸數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)不清晰。中藥復(fù)方金思維可使神經(jīng)氈內(nèi)的突觸數(shù)量增加,并使神經(jīng)元和突觸結(jié)構(gòu)有不同程度的改善。3.中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠腦葡萄糖攝取的影響Micro-PET定量分析各組小鼠在興趣區(qū)的腦葡萄糖攝取率,模型組小鼠在四個(gè)興趣區(qū)的腦葡萄糖攝取率平均值均比正常對(duì)照組減少。與模型組相比,金思維中、小劑量組和多奈哌齊組小鼠腦葡萄糖攝取率平均值均增加,而金思維大劑量組攝取率平均值與模型組相比無(wú)較大差異。4.中藥復(fù)方金思維對(duì)AD小鼠腦葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響Western blot檢測(cè)海馬GLUT1蛋白表達(dá)。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬GLUT1的蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01);與模型組相比,多奈哌齊組和金思維中劑量組小鼠海馬GLUT1蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01),金思維大劑量和金思維小劑量組小鼠海馬GLUT1蛋白表達(dá)增加(P0.05)。免疫組織化學(xué)染色后,可見海馬CA1區(qū)陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞胞膜著色。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬CA1區(qū)GLUT1陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少(P0.01);與模型組小鼠相比,各治療組GLUT1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯增加(P0.01)。Western blot檢測(cè)海馬GLUT3蛋白表達(dá)。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬GLUT3的蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01);與模型組相比,多奈哌齊組、金思維大、中劑量組小鼠海馬GLUT3蛋白表達(dá)增加(P0.05)。Western blot檢測(cè)海馬PI3K蛋白表達(dá)。與正常對(duì)照組小鼠相比,模型組小鼠海馬PI3K的蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01);與模型組相比,多奈哌齊組小鼠海馬PI3K蛋白表達(dá)增加(P0.05),金思維大、中劑量組蛋白表達(dá)增加或明顯增加(P0.05或P0.01)。Western blot檢測(cè)海馬Akt蛋白表達(dá)。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬Akt的蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01);與模型組相比,金思維大劑量組Akt蛋白表達(dá)增加(P0.05),多奈哌齊組和金思維中劑量組小鼠海馬Akt蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01)。免疫組織化學(xué)染色后,可見海馬CA1區(qū)陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞胞漿著色。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬CA1區(qū)Akt陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少(P0.01);與模型組小鼠相比,各治療組小鼠海馬CA1區(qū)Akt陽(yáng)性細(xì)胞增加(P0.01)。Western blot檢測(cè)海馬p-GSK3β蛋白表達(dá)。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬p-GSK3β的蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01);與模型組相比,金思維大、小劑量組小鼠海馬P-GSK3β蛋白表達(dá)增加(P0.05),多奈哌齊組和金思維中劑量組p-GSK3β蛋白表達(dá)明顯增加(P0.01)。Western blot檢測(cè)海馬p-mTOR蛋白表達(dá)。與正常對(duì)照組相比,模型組小鼠海馬p-mTOR的蛋白表達(dá)明顯增多(P0.01);與模型組小鼠相比,多奈哌齊組、金思維大和小劑量組小鼠海馬p-mTOR蛋白表達(dá)減少(P0.05),金思維中劑量組蛋白表達(dá)明顯減少(P0.01)。RT-PCR檢測(cè)PI3K和Akt mRNA的表達(dá)。與模型組小鼠相比,正常對(duì)照組PI3K和Akt mRNA表達(dá)平均值增高,治療各組PI3K和Akt mRNA也有不同程度的增高。結(jié)論中藥復(fù)方金思維可以通過(guò)改善AD小鼠在特定腦區(qū)的葡萄糖攝取率,增加葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、修復(fù)受損胰島素信號(hào)通路,從而改善AD小鼠早期存在的腦葡萄糖代謝損傷,同時(shí)可以維護(hù)神經(jīng)元和突觸結(jié)構(gòu)功能,進(jìn)而提高AD小鼠早期階段空間學(xué)習(xí)和記憶保持能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：1665097