本文選題：IgG4-相關性疾病　切入點：濾泡輔助性T細胞　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:研究IgG4相關性疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)中濾泡輔助性T(Tfh)細胞及其亞型的表達及功能。方法:收集初治IgG4-RD患者的外周血及新鮮受累組織細胞懸液,同時收集性別、年齡相匹配的健康人作為對照,運用流式染色技術研究IgG4-RD患者外周血和組織中Tfh細胞及其亞型的表達;運用RT-PCR技術比較IgG4-RD患者和健康對照組中與Tfh表達密切相關的重要轉錄因子Bcl-6和Blimp-1以及與其功能密切相關的重要細胞因子IL-21在外周血中轉錄水平上表達的差異;運用免疫組化和免疫熒光技術定位IL-21和(CD4+CXCR5+)Tfh細胞在IgG4-RD受累組織中的分布;進一步通過將IgG4-RD患者的循環(huán)Tfh(cTfh)及其亞型分別與健康正常人的B細胞共培養(yǎng),探索Tfh及其亞型在IgG4-RD中對B細胞增殖、細胞損傷、凋亡及分化分泌抗體的影響。結果:IgG4-RD患者外周血和受累組織中的(CD4+CXCR5+)T、(CD4+CXCR5+ICOS+)T、(CD4+CXCR5+PD-1+)T、(CD4+CXCR5+ICOS+PD-1+)T細胞群均較正常人比明顯高表達,且這些細胞群在組織中的表達水平遠遠高于其在外周血中的表達,其中,(CD4+CXCR5+ICOS+PD-1+)T以及PD-1在(CD4+CXCR5+ICOS+)T細胞群中的表達水平與IgG4-RD患者的血清IgG、IgG4、IgG4/IgG水平及受累器官數(shù)目均呈顯著正相關性,后者還與高分泌IgG4的漿母細胞(CD19+CD24-CD38hi)顯著正相關。決定Tfh細胞表達的重要轉錄因子Bcl-6在IgG4-RD外周血CD4+T細胞中的轉錄水平較正常人無差異,而與Tfh功能相關的重要細胞因子IL-21的mRNA轉錄水平在IgG4-RD外周血中明顯增高,且與IgG4、IgG、IgG4/IgG的水平呈顯著正相關性。在IgG4-RD患者受累組織中,(CD4+CXCR5+)Tfh細胞和IL-21均顯示為高表達,主要定位于腺體細胞或異位生發(fā)中心周圍,部分為彌漫分布;較正常人而言,IgG4-RD的cTfh細胞更能促進B細胞增殖和加重細胞損傷,并抑制其凋亡,并且能更多地促使naive B細胞向(CD19+CD27+IgD-)switched(S)memory B細胞和(CD19+CD24-CD38hi)B亞群分化,從而產生分泌更多的IgG4抗體。進一步通過對cTfh細胞亞型的研究,我們發(fā)現(xiàn),三種cTfh亞型在IgG4-RD中均具有很強的促進B細胞增殖并向S memory B細胞分化,而抑制其凋亡的功能,但主為cTfh1和cTfh2而非cTfh17在IgG4-RD中高表達,cTfh1和cTfh2均能促進B細胞向(CD19+CD24-CD38hi)B細胞亞群分化并產生分泌更多的IgG4抗體,以cTfh2細胞的能力更為顯著。結論:Tfh在IgG4-RD的發(fā)病中起重要作用,(CD4+CXCR5+ICOS+)T細胞中PD-1的表達水平在促進GC中B細胞向分泌IgG4為主的漿細胞分化中起著關鍵的作用。主因cTfh細胞分泌的IL-21在IgG4-RD的發(fā)病機制中可能扮演著重要的角色。此外,IgG4-RD中的Tfh細胞功能異�；罨�,可顯著促進B細胞的增殖、加重細胞損傷,抑制其凋亡,促進naive B細胞向switched(S)memory B細胞和(CD19+CD24-CD38hi)B 細胞亞群分化。其中,cTfh1 和 cTfh2 細胞在 IgG4-RD中高表達,具有促進IgG4-RD中B細胞向漿細胞分化及分泌IgG4抗體而抑制其凋亡的功能,且以cTfh2細胞最為顯著。
[Abstract]:Objective: to study the expression and function of follicular helper TFH cells and their subtypes in IgG4-related disease (IgG4-RD) of patients with IgG4. Methods: peripheral blood and fresh tissue cell suspensions were collected from patients with IgG4-RD. The expression of Tfh cells and their subtypes in peripheral blood and tissues of IgG4-RD patients was studied by flow cytometry in age-matched healthy controls. RT-PCR technique was used to compare the expression of Bcl-6 and Blimp-1, which were closely related to the expression of Tfh, and the important cytokines IL-21, which were closely related to the expression of Tfh, in the peripheral blood of patients with IgG4-RD and healthy controls. Immunohistochemical and immunofluorescence techniques were used to locate the distribution of IL-21 and CD4 CXCR5 tfh cells in the affected tissues of IgG4-RD, and to further co-culture the circulating TfhcTfh cells of IgG4-RD patients and their subtypes with B cells of healthy people. To explore the effects of Tfh and its subtypes on the proliferation and damage of B cells in IgG4-RD. Results the expression of CD4 CXCR5 in peripheral blood and involved tissues was significantly higher than that in normal controls. And the expression level of these cell groups in tissues is much higher than that in peripheral blood. The expression of CD4 CXCR5 ICOS PD-1 T and PD-1 in the CD4 CXCR5 ICOS T cell group were positively correlated with the serum IgG4 / IgG4 / IgG4 / IgG4 / IgG4 / IgG4 / IgG4 and the number of affected organs in patients with IgG4-RD. The latter was also positively correlated with CD19 CD24-CD38hi. the transcription level of Bcl-6, an important transcription factor that determines the expression of Tfh cells, in IgG4-RD peripheral blood CD4 T cells was not different from that in normal controls. However, the mRNA transcription level of IL-21, an important cytokine related to the function of Tfh, was significantly increased in the peripheral blood of IgG4-RD, and positively correlated with the level of IgG4 / IgG4 / IgG4.In the involved tissues of IgG4-RD patients, both the CD4 CXCR5 Tfh cells and IL-21 were highly expressed. The cTfh cells located mainly around glandular cells or ectopic germinal centers, and some of them were diffuse, and the cTfh cells of IgG4-RD could promote the proliferation of B cells, aggravate the damage of B cells and inhibit the apoptosis of B cells. And it can induce naive B cells to differentiate into CD19 CD27 IgD-)switched(S)memory B cells and CD19 CD24-CD38hi)B subsets, thus producing more IgG4 antibodies. Further studies on cTfh cell subtypes show that, All of the three cTfh subtypes have the function of promoting the proliferation of B cells and differentiating into S memory B cells in IgG4-RD, while inhibiting the apoptosis of B cells. However, the high expression of cTfh1 and cTfh2 in IgG4-RD was mainly composed of cTfh1 and cTfh2 instead of cTfh17, which promoted the differentiation of B cells into subsets of CD19 CD24-CD38hi)B cells and produced more IgG4 antibodies. Conclusion cTfh2 plays an important role in the pathogenesis of IgG4-RD. The expression of PD-1 in CD4 CXCR5 ICOS T cells plays a key role in promoting the differentiation of B cells into plasmacytes mainly secreting IgG4 in GC. IL-21 secreted by cTfh cells may play an important role in the pathogenesis of IgG4-RD. In addition, the function of Tfh cells in IgG4-RD is abnormal. It can significantly promote the proliferation of B cells, aggravate the injury of B cells, inhibit the apoptosis of B cells, promote the differentiation of naive B cells into switched(S)memory B cells and the subsets of CD19 CD24-CD38hi)B cells, in which the expression of Tfh1 and cTfh2 cells in IgG4-RD is high. It can inhibit the apoptosis of IgG4-RD by promoting the differentiation of B cells into plasma cells and secreting IgG4 antibody, especially cTfh2 cells.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R593.2

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