發(fā)布時(shí)間：2018-03-20 04:06

  本文選題：急性呼吸窘迫綜合征　切入點(diǎn)：炎癥　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由多種直接致病因素(如肺挫傷、吸入性損傷、肺炎、誤吸、機(jī)械通氣)和間接致病因素(如感染、輸血、胰腺炎、創(chuàng)傷性腦損傷)引起的常見危重病征�；A(chǔ)研究證實(shí),ARDS的本質(zhì)是炎癥反應(yīng)導(dǎo)致肺上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,其中炎性細(xì)胞因子和趨化因子構(gòu)成的復(fù)雜“網(wǎng)絡(luò)”在調(diào)節(jié)、放大、維持肺部炎癥過程扮演了重要角色。ARDS早期,肺巨噬細(xì)胞可被巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)等炎性細(xì)胞因子活化,分泌其它多種炎癥因子(IL-1,IL-6,IL-8,IL-10,TNF-α),同時(shí)促進(jìn)趨化因子的釋放,進(jìn)而募集、活化中性粒細(xì)胞�；罨闹行粤＜�(xì)胞又可以進(jìn)一步釋放氧化物、蛋白酶、白三烯及其他炎癥介質(zhì)損傷肺組織。這提示,MIF可能是肺部炎性因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)中處在較為上游的促炎因子。臨床研究發(fā)現(xiàn)MIF在ARDS異常升高,提示MIF是潛在的ARDS發(fā)生和預(yù)后的重要生物標(biāo)志物,但其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值并未確立。2003年,Leng等發(fā)現(xiàn)CD74是MIF的高親和力受體。Takahashi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)MIF與CD74結(jié)合后激活下游信號(hào)通路,誘導(dǎo)炎癥因子的釋放,參與ARDS肺炎性損傷,抗CD74抗體可阻斷上述通路,抑制炎癥因子的表達(dá),起到治療作用。2014年2月,Assis等率先在自身免疫性肝病患者的血清中檢測(cè)到CD74的可溶型形式,即可溶型CD74(Soluble CD74,sCD74),且其濃度顯著高于正常人群。此外,自身免疫性肝病患者外周sCD74主要是由肝星狀細(xì)胞分泌的,可競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合循環(huán)中升高的MIF并形成MIF-sCD74復(fù)合物,通過減少M(fèi)IF與成纖維細(xì)胞膜上CD74的結(jié)合干擾MIF介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而中和MIF的生物活性。根據(jù)既往研究基礎(chǔ),MIF通過與膜表面CD74結(jié)合,啟動(dòng)下游信號(hào)通路,誘導(dǎo)效應(yīng)蛋白表達(dá),參與ARDS肺炎癥的發(fā)生。另一方面,sCD74來源于膜表面CD74,并且能在患者血清中被檢測(cè)到,但sCD74在肺部疾病領(lǐng)域至今尚無文獻(xiàn)報(bào)道。因此,我們猜想sCD74與燒創(chuàng)傷所致ARDS具有何種關(guān)系呢?為了闡明上述問題,我們開展了兩部分研究?jī)?nèi)容。第一部分是采用經(jīng)典炎性肺損傷小鼠模型,比較肺損傷小鼠與正常小鼠肺組織CD74的表達(dá)量及外周sCD74的水平,并與肺損傷嚴(yán)重程度和炎癥程度進(jìn)行相關(guān)性分析,以了解sCD74與ARDS可能存在的關(guān)系。隨后,通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探索sCD74的細(xì)胞來源和生物學(xué)功能。第二部分是通過回顧性病例對(duì)照研究分析ARDS患者臨床數(shù)據(jù)和生物學(xué)指標(biāo),驗(yàn)證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,評(píng)估血清sCD74預(yù)測(cè)ARDS患者臨床結(jié)局的價(jià)值。第一部分炎性肺損傷小鼠外周scd74的表達(dá)水平及其生物學(xué)作用初探(基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn))研究目的:(1)觀察scd74在炎性肺損傷小鼠外周血及肺泡腔內(nèi)表達(dá)水平,探討scd74與肺損傷嚴(yán)重程度的關(guān)系;(2)探索scd74的細(xì)胞來源和生物學(xué)作用。研究方法:建立脂多糖(lipopolysaccharide,lps)氣道滴入和盲腸結(jié)扎穿刺(cecalligationpuncture,clp)所致炎性肺損傷小鼠模型,在指定時(shí)間點(diǎn)取血清、肺組織、肺泡灌洗液等標(biāo)本;采用rt-pcr法檢測(cè)肺組織cd74的mrna含量,westernblot法檢測(cè)肺組織cd74蛋白表達(dá)量,免疫組化和免疫熒光法對(duì)肺組織cd74進(jìn)行定位;采用斑點(diǎn)印跡法及elisa法檢測(cè)血清和肺泡灌洗液scd74含量,分析scd74及炎癥因子水平的相關(guān)性;采用he染色、肺泡灌洗液蛋白濃度、肺組織濕/干重比反應(yīng)肺損傷程度,分析scd74與肺損傷程度的關(guān)系;采用rmmif刺激巨噬細(xì)胞raw264.7和肺上皮細(xì)胞mle-12,檢測(cè)細(xì)胞cd74表達(dá)量及上清scd74含量,并檢測(cè)細(xì)胞活性和凋亡情況;采用rmscd74-fc與rmmif同時(shí)或單獨(dú)刺激巨噬細(xì)胞raw264.7,檢測(cè)上清炎癥因子水平。研究結(jié)果:lps氣道滴入和clp所致炎性肺損傷小鼠與對(duì)照組相比,肺組織cd74在基因和蛋白層面均表達(dá)增高;免疫組化和免疫熒光染色顯示cd74主要位于肺巨噬細(xì)胞膜表面;炎性肺損傷小鼠血清和肺泡灌洗液scd74含量明顯高于對(duì)照組,并且與肺組織損傷程度相關(guān);此外,肺泡灌洗液scd74濃度與mif、tnf-α、il-6成正相關(guān);rmmif刺激巨噬細(xì)胞raw264.7可于上清檢測(cè)到scd74,而rmmif刺激肺上皮細(xì)胞mle-12無scd74釋放;當(dāng)?shù)蜐舛萺mscd74-fc(10-~200ng/ml)與rmmif同時(shí)刺激巨噬細(xì)胞raw264.7時(shí),rmmif引起的tnf-α和mip-2的釋放被抑制;scd74單獨(dú)刺激raw264.7亦可引起炎癥因子釋放。研究結(jié)論:(1)炎性肺損傷會(huì)引起肺組織cd74表達(dá)增高,及血清和肺泡腔內(nèi)scd74水平增高,且scd74水平與炎性肺損傷嚴(yán)重程度和肺炎癥程度成正相關(guān)關(guān)系;(2)巨噬細(xì)胞是scd74的細(xì)胞來源之一,scd74不僅可中和mif的促炎作用,亦可刺激炎癥的發(fā)生。第二部分scd74在燒創(chuàng)傷所致ards中的臨床意義(臨床試驗(yàn))研究目的:探討ards患者血清scd74水平的變化及其對(duì)ards患者臨床結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值。研究方法:采用回顧性研究(clinicaltrial注冊(cè)號(hào):nct02201446),以elisa法檢測(cè)81例符合ards柏林診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者血清scd74的含量,比較第1日和第3日水平,并與58例健康志愿者作比較;根據(jù)ARDS患者結(jié)局分為存活組與死亡組,比較兩組一般數(shù)據(jù)及血清sCD74等指標(biāo)的差異;采用ROC曲線評(píng)估各檢測(cè)指標(biāo)預(yù)測(cè)ARDS患者預(yù)后的價(jià)值;采用線性回歸和Logistic分析法分析sCD74對(duì)ARDS患者預(yù)后的影響。研究結(jié)果:ARDS患者平均年齡48.02±16.05歲,其中男性患者44例(占比54.3%),創(chuàng)傷所致ARDS為35例(占比43.2%),吸入性損傷所致ARDS為46例(占比56.8%),入院當(dāng)日APACHE II評(píng)分為14.35±6.39,接收機(jī)械通氣患者51例(63.0%),28天脫機(jī)時(shí)間中位數(shù)為22天,氧合指數(shù)為2.1±0.46,ICU住院時(shí)間中位數(shù)為23天,死亡患者14例(17.3%);死亡患者與存活患者在原發(fā)致傷因素、APACHE II評(píng)分、機(jī)械通氣、28天脫機(jī)時(shí)間、氧合指數(shù)經(jīng)比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。ARDS患者第1日血清MIF、TNF-α、IL-6、sCD74濃度分別為73.64±23.27ng/ml,97.09(92.32,100.82)pg/ml,101.63(79.5,138.9)pg/ml,75.83(65.76,96.36)ng/ml,第3日血清MIF、TNF-α、IL-6、s CD74濃度分別為129.27±41.12ng/ml,138.67±64.26pg/ml,305.36±177.14pg/ml,117.0(105.2,160.1)ng/ml,均顯著增高。死亡患者第1日血清sCD74濃度77.96(65.82,124.63)ng/ml高于存活患者75.25(64.99,95.74)ng/ml,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);然而,死亡患者第3日血清sCD74濃度[(160.9(133.7,179.3)]與存活患者[115(103.9,147.0)]相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)�；颊叩�3日血清sCD74與MIF、TNF-α、IL-6均成正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)分別為:r=0.333,p0.01;r=0.409,p0.01;r=0.303,p0.05)。第1日、第3日血清MIF預(yù)測(cè)患者死亡的ROC曲線下面積分別為0.58,95%CI:(0.38-0.78)和0.52,95%CI:(0.38-0.72),第1日、第3日血清sCD74預(yù)測(cè)患者死亡的ROC曲線下面積分別為0.47,95%CI:(0.29-0.64)和0.75,95%CI:(0.61-0.89)。生存分析結(jié)果顯示第3日血清sCD74151 ng/ml組患者生存率高于sCD74151 ng/ml組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);第1日血清sCD74118 ng/ml組患者生存率高于sCD74118 ng/ml組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。線性回歸分析顯示第3日血清sCD74每增加1ng/ml,呼吸機(jī)使用天數(shù)增加0.11天,多元Logistic回歸分析顯示sCD74是ARDS患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(第1日血清sCD74:OR=13.21,95%CI:0.83-209.79,p=0.067;第3日血清sCD74:OR=6.72,95%CI,1.435 31.4,p=0.016)。研究結(jié)論:ADRS患者早期血清sCD74水平顯著升高,與ARDS病程、嚴(yán)重程度及不良預(yù)后密切相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R563.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 伍國(guó)勝;sCD74在急性呼吸窘迫綜合征中的表達(dá)水平及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

，

本文編號(hào)：1637416