本文關(guān)鍵詞： 電針 缺血性腦卒中 學(xué)習(xí)記憶 局部一致性 突觸可塑性 微小RNA　出處：《福建中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探討電針"百會"、"神庭"穴對缺血性腦卒中模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能以及靜息態(tài)功能磁共振成像(resting-state fumctional magnetic resonance imaging,rs-fMRI)的影響。在神經(jīng)影像學(xué)的基礎(chǔ)之上,探討腦區(qū)突觸結(jié)構(gòu)和功能的可塑性變化,并進(jìn)一步基于microRNA(miRNA)組學(xué)探討其分子生物學(xué)機(jī)制。方法1.根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法:將SPF級雄性sprague dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和缺血性腦卒中造模組,然后依據(jù)干預(yù)前神經(jīng)功能缺損評分和行為學(xué)結(jié)果將大鼠隨機(jī)分為3組,模型組、電針組和非穴組。2.復(fù)制缺血性腦卒中大鼠模型,術(shù)后第2天開始取"百會"、"神庭"穴及非經(jīng)非穴實(shí)施電針干預(yù),電壓峰值為6 V,疏密波,頻率2/20 Hz,每次治療30 min,1次/天,共14天;3.干預(yù)前后各組大鼠采用跳臺實(shí)驗(yàn)檢測其學(xué)習(xí)記憶功能;干預(yù)后采用Morris水迷宮檢測其空間學(xué)習(xí)記憶能力;4.采用小動物rs-fMRI掃描以及腦區(qū)BOLD信號局部一致性(regional homogeneity,ReHo)分析各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞活動變化;5.采用高爾基染色(Golgi)觀察各組大鼠神經(jīng)突觸和樹突棘形態(tài)變化,以及場電位電生理檢測各組大鼠長時程增強(qiáng)(long-termpotentiation,LTP)反應(yīng);6.采用Western blotting法檢測學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白的表達(dá)和磷酸化水平;7.采用miRNA芯片檢測miRNAs的差異表達(dá),以及靶基因預(yù)測和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析,實(shí)時熒光定量PCR法驗(yàn)證miRNA表達(dá)水平。結(jié)果1.本研究發(fā)現(xiàn)干預(yù)前,模型組、電針組和非穴組跳臺實(shí)驗(yàn)觀察的學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);干預(yù)后,電針組相對模型組、非穴組大鼠跳臺實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮觀察的潛伏期縮短(P0.05)。2.采用T2WI發(fā)現(xiàn)缺血性模型大鼠海馬、內(nèi)嗅皮層、運(yùn)動皮層、感覺皮層、背側(cè)丘腦和紋狀體等腦區(qū)出現(xiàn)梗死,而電針"百會"、"神庭"穴減少其腦區(qū)梗死體積(P0.05);3.對各組大鼠進(jìn)行rs-fMRI分析,發(fā)現(xiàn)缺血性腦卒中模型大鼠BOLD信號局部一致性降低的腦區(qū)包括雙側(cè)杏仁核、雙側(cè)海馬、雙側(cè)內(nèi)嗅皮層、雙側(cè)島葉皮層、雙側(cè)梨狀皮質(zhì)、雙側(cè)感覺皮層、雙側(cè)運(yùn)動皮層、雙側(cè)扣帶回、雙側(cè)背側(cè)丘腦、左側(cè)聽覺皮層和左側(cè)紋狀體(P0.005)。而電針干預(yù)后雙側(cè)杏仁核、雙側(cè)海馬、右側(cè)島葉皮層、雙側(cè)內(nèi)嗅皮層、右側(cè)梨狀皮層和右側(cè)感覺皮層BOLD信號局部一致性升高(P0.005);非穴干預(yù)后左側(cè)杏仁核、左側(cè)梨狀皮質(zhì)和左側(cè)紋狀體BOLD信號局部一致性升高(P0.005);4.選擇學(xué)習(xí)記憶相關(guān)腦區(qū)海馬CA1、內(nèi)嗅皮層進(jìn)一步分析其突觸可塑性變化,低倍視野下顯示缺血性腦卒中模型大鼠海馬CA1、內(nèi)嗅皮層樹突棘脫落、萎縮,排列紊亂;而電針治療后其病理損傷程度緩解。高倍視野下電針治療后缺血性腦卒中模型大鼠樹突棘的分支、數(shù)量和密度均增加(P0.05);5.突觸功能可塑性檢測發(fā)現(xiàn)缺血性腦卒中模型大鼠在HFS誘導(dǎo)后缺血側(cè)海馬CA3-CA1和內(nèi)嗅皮層-海馬CA1的興奮性突觸后電位(fEPSP)斜率的百分比均下降(P0.05);而電針治療后其fEPSP斜率的百分比增加(P0.05),突觸后膜相關(guān)學(xué)習(xí)記憶蛋白AMPA受體、NMDA受體的磷酸化水平升高(P0.05);6.缺血側(cè)海馬CA1和內(nèi)嗅皮層進(jìn)行miRNA芯片分析顯示:缺血側(cè)海馬CA1差異表達(dá)≥1.5 miRNAs共48個miRNAs(P0.05),其中36個miRNAs表達(dá)下調(diào),12個miRNAs表達(dá)上調(diào);缺血側(cè)內(nèi)嗅皮層差異表達(dá)≥1.5miRNAs共90個(P0.05),其中70個miRNAs表達(dá)下調(diào),20個miRNAs表達(dá)上調(diào);其中rno-miR-668和rno-miR-3084b-5p在缺血側(cè)海馬CA1和內(nèi)嗅皮層均表達(dá)上調(diào);而rno-miR-28,rno-miR-10a,rno-miR-let-7b,rno-miR-425,rno-miR-7b,rno-miR-154,rno-miR-540,rno-miR-let-7f-2,mo-miR-186,rno-miR-219a,mo-miR-3072,rno-miR-344a,rno-miR-190b,rno-miR-100,rno-miR-92a的表達(dá)水平在兩個腦區(qū)均下調(diào);7.對以上缺血側(cè)海馬CA1和內(nèi)嗅皮層表達(dá)均上調(diào)和下調(diào)的miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析,發(fā)現(xiàn)富集分高的cGMP-PKG信號通路(P0.05)與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān),通過生物信息學(xué)預(yù)測和體外證實(shí)miR-219a負(fù)調(diào)控cGMP-PKG信號通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)PRKG2靶基因(P0.01);8.對miR-219a進(jìn)行在體功能分析,發(fā)現(xiàn)miR-219amimics可以阻斷電針"百會"、"神庭"穴下調(diào)miR-219a的表達(dá)水平,并影響PRKG2下游CREB的磷酸化,進(jìn)而減少學(xué)習(xí)記憶即刻早期基因c-fos和c-jun的蛋白表達(dá)(P0.05)。結(jié)論1.電針"百會"、"神庭"穴治療缺血性腦卒中模型大鼠14天,提高大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,減少海馬、內(nèi)嗅皮層的梗死體積,增強(qiáng)海馬、內(nèi)嗅皮層BOLD信號局部一致性,提示腦卒中模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善與海馬、內(nèi)嗅皮層結(jié)構(gòu)和功能損傷的修復(fù)相關(guān)。2.電針"百會"、"神庭"穴促進(jìn)缺血性腦卒中模型大鼠缺血側(cè)海馬、內(nèi)嗅皮層樹突棘形態(tài)的修復(fù)和易化海馬CA3-CA1和內(nèi)嗅皮層-海馬CA1的LTP反應(yīng),促進(jìn)突觸結(jié)構(gòu)和功能的可塑性。3.電針"百會"、"神庭"穴抑制腦卒中模型大鼠miR-219a的表達(dá),上調(diào)靶基因PRKG2,促進(jìn)下游CREB的磷酸化,從而促使學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白c-fos和c-jun的合成。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R245

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本文編號：1547418