本文關(guān)鍵詞： 上皮 化生 幽門 桿菌 感染 CDX2 表達 間的 關(guān)系 評估　出處：《吉林大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：概論盡管在診斷和治療技術(shù)方面取得了顯著進步,胃癌(GC)仍是中國第三大常見癌癥,也是全球所有癌癥的第三大死亡原因。在1965年,胃癌被分為兩大類:腸型胃癌和彌漫型胃癌。腸型胃癌可由癌前病變慢性萎縮性胃炎,腸化生(GIM),不典型增生逐漸發(fā)展而來(Correa級聯(lián)學(xué)說)。胃炎是指“顯微鏡下觀察到的胃粘膜的炎癥”。因此,組織學(xué)檢查是確診的必要條件。組織學(xué)也有助于區(qū)分萎縮性和非萎縮性胃炎。萎縮性胃炎(AG)是指由于長期胃炎導(dǎo)致的胃粘膜“固有”腺體的萎縮,數(shù)量減少。固有腺體主要位于胃竇及胃體部。腸上皮化生在慢性非萎縮性胃炎和萎縮性胃炎中可見,是胃炎和腸型胃癌的中間過渡階段,也是目前公認(rèn)的腸型胃癌的癌前病變,但是,并不是所有腸上皮化生的患者都會發(fā)展成胃癌,GIM進展為癌的潛在發(fā)病機制仍然不完全清楚。腸上皮化生是指胃粘膜上皮被腸型上皮所替代。大多數(shù)GIM患者并無臨床癥狀。在亞洲東部等國家,AG和GIM通常僅由內(nèi)窺鏡檢查即可確診,然而在內(nèi)窺鏡下活檢的組織學(xué)檢查在西方國家則是診斷的必要條件。雖然嚴(yán)重的AG和GIM的病例可以通過內(nèi)窺鏡檢查確診,但是輕度AG和GIM的診斷通常還是很具有挑戰(zhàn)性的。此外,有時內(nèi)鏡診斷并不符合組織學(xué)診斷。盡管與GC關(guān)聯(lián)的GIM的分類有多種,但是公認(rèn)的還是由Jass和Filipe提出的分類法,因為它有助于不完全表型的亞型之間的鑒別。粘蛋白表達分類可鑒別完全和不完全類型,但不能能鑒別不完全類型的各種亞型。Jass和Filipe分類法是基于某些類型的細胞的存在或不存在以及被稱為“粘蛋白”的物質(zhì)的分泌將GIM分成三個亞型。1985年,IIa和IIb型分別更新為II和III。I型:完全化生,小腸型,其特征在于存在分泌酸性唾液酸粘蛋白和硫酸粘蛋白的杯狀細胞,可觀察到Paneth細胞和成熟的、非粘液分泌的吸收細胞。II型:不完全的硫酸粘蛋白陰性GIM,其特征在于存在分泌非硫酸化粘蛋白的杯狀細胞,Paneth細胞通常完全缺失。III型:不完全硫酸黏蛋白陽性型腸化生,柱狀粘液細胞主要分泌硫酸粘蛋白。GIM的發(fā)病率在全球各地不同。全世界人群的萎縮性胃炎和GIM的流行率分別為33.4%和25%,而廣泛的GIM發(fā)生率為13%�；仡櫸墨I,GIM在亞洲的中國和土耳其,歐洲的愛爾蘭和意大利,大洋洲的新西蘭,非洲的埃及,美國的哥倫比亞和委內(nèi)瑞拉是高度普遍的。盡管GIM是公認(rèn)的癌前病變,GIM的病情發(fā)展監(jiān)測和隨訪在西方國家尚未被批準(zhǔn)。2006年美國胃腸內(nèi)鏡學(xué)會指南并沒有統(tǒng)一推薦對胃部無發(fā)育不良的化生性損傷進行監(jiān)測。然而,對于GIM高�；颊�(陽性家族史,種族背景,來自胃癌高發(fā)病率的地區(qū)的移民),建議其內(nèi)窺鏡檢查隨訪(未明確具體監(jiān)測時間間隔)。2012年,歐洲胃腸內(nèi)鏡學(xué)會提出了對所有胃竇和胃體部的組織病理學(xué)診斷為GIM的患者進行一個為期3年的監(jiān)測。根據(jù)流程,應(yīng)用窄帶成像和/或放大內(nèi)鏡來識別病變,隨后從胃竇和胃體部各取兩個活檢。微小的胃竇GIM無需監(jiān)測。白光內(nèi)鏡檢查是進行多種活檢以繪制化生性病變程度圖的標(biāo)準(zhǔn)方法。然而,最近發(fā)表的京都全球共識會議(在日本)發(fā)表的報告建議使用圖像增強內(nèi)鏡檢查而不是常規(guī)內(nèi)窺鏡檢查對GIM進行檢查,以增加活檢檢出率。幽門螺桿菌是在胃中發(fā)現(xiàn)的革蘭氏陰性,微需氧性細菌,是導(dǎo)致胃癌前期病變和胃癌GIM的發(fā)展的確切原因。在感染該菌的受試者中,有30%發(fā)展為GIM,僅7%發(fā)展為胃癌。幽門螺桿菌對p H小于4敏感,其定植在胃粘膜下方,胃粘膜很好地保護了其免收胃酸影響。此外,幽門螺桿菌產(chǎn)生大量脲酶,其將尿素代謝為氨和CO2,對胃酸起到了緩沖作用。因此,在這種感染中觀察到胃酸缺乏,其有利于幽門螺桿菌的定植和增殖。幽門螺桿菌產(chǎn)生的毒素和酶是在沒有實質(zhì)性細菌侵入的情況下導(dǎo)致胃粘膜損傷的重要原因,其包括1.含有內(nèi)肽酶活性,能降解胃粘蛋白能力的細胞外蛋白酶。2.具有細胞毒性,導(dǎo)致細胞內(nèi)空泡形成的熱不穩(wěn)定蛋白。3.能使尿素代謝為氨和CO2,加重胃粘膜損傷的脲酶。氨能(i)對上皮細胞有直接的毒性,(ii)介導(dǎo)氫離子反向擴散間接引起組織損傷。目前有多種可用于檢測幽門螺桿菌的方法。侵入性方法需內(nèi)窺鏡檢查以獲取粘膜用于組織學(xué)檢查,快速脲酶測試或培養(yǎng)。而非侵入性方法包括尿素呼氣試驗,血清學(xué)檢測和糞便抗原檢測。培養(yǎng)不再是確診必需。蘇木精—曙紅(HE)染色法的組織學(xué)檢查的靈敏度和特異性分別為69-93%和87-90%。Giemsa染色,Warthin-Starry銀染,Gent染色和免疫組織化學(xué)(IHC)染色顯著提高了檢查的特異性。在所有非侵入性檢測中,UBT是最可靠的,其靈敏度和特異性分別能達到99%和98%。尿素呼氣試驗是由幽門螺桿菌脲酶將攝取的C-13或C-14標(biāo)記的尿素轉(zhuǎn)化成CO2和氨,放射性標(biāo)記的CO2經(jīng)血流吸收后,在呼出的氣體中被檢測出。然而,該檢測需要專業(yè)的設(shè)備,因此尿素呼氣試驗在小診所的使用受限。與UBT相比,糞便抗原檢測更經(jīng)濟可行,對提供的糞便標(biāo)本,使用幽門螺桿菌免疫檢測卡即可檢測出幽門螺桿菌的感染情況,即使在小型醫(yī)療機構(gòu)也容易實現(xiàn)。該檢測的靈敏度和特異性分別達到94.1%和91.8%。該檢測唯一受限的是患者需提供糞便標(biāo)本。血清學(xué)可檢測針對幽門螺桿菌的Ig G抗體,且價格低廉,可行性強。然而,該測試有兩個局限性:首先,它不能鑒別近期感染和既往感染;其次,其不能作為衡量抗幽門螺桿菌治療是否治愈的指標(biāo)。血清學(xué)對于近期感染的敏感度和特異性分別為85%和79%。如上所述,幽門螺桿菌是可以在活檢組織中檢測到的。然而,如果在長期萎縮性胃炎中發(fā)現(xiàn)存在廣泛的化生,且合并單核細胞和中性粒細胞浸潤的慢性炎癥,可需考慮幽門螺桿菌感染,而幽門螺桿菌攜帶具有發(fā)展為胃癌的高風(fēng)險。因此,幽門螺桿菌被幽門螺桿菌高感染,胃癌高發(fā)的國家的國際癌癥研究機構(gòu)指定為I類致癌物,并且幽門螺桿菌感染在AG和GIM中也越來越傾向于普遍流行。除幽門螺桿菌以外,年齡增長,男性,嗜酒,吸煙,高鹽攝入和胃癌家族史都是明確與GIM進展相關(guān)的因素。而鼓勵從兒童時期開始多攝入蔬菜和水果可預(yù)防發(fā)展為胃癌。導(dǎo)致GIM的遺傳因素仍然是一個謎。多種基因已被認(rèn)為在粘膜分化中起作用,包括(但不限于)p53,同源盒基因(Cdx2),微衛(wèi)星不穩(wěn),單克隆抗體Das-1和最近報道的SCHLAFEN基因。MSI是重復(fù)DNA序列中長度的“變異”。而正�；蚪M(細胞)具有“均勻長度”的短重復(fù)DNA序列,盡管在個體之間這些序列的長度存在多樣性。MSI與胃化生,發(fā)育不良和胃癌相關(guān)。Shlafen(SLFN)家族是在干擾素-1的作用下,調(diào)節(jié)T細胞發(fā)育和成熟的一組蛋白質(zhì)。在人類基因組中,存在Schlafen家族的SLFN5亞型。最近已報道,相比于未進展為GC的正常組織中,在GIM組織中Schfln5的表達含量更高。P53(抑癌基因)調(diào)控機體多種重要功能,如DNA修復(fù),細胞凋亡和細胞周期改變。人類癌癥(包括胃癌)中檢測到p53的突變。在GIM標(biāo)本中是否存在p53突變是有爭議的。Das-1單克隆抗體(原7E12H12抗體,免疫球蛋白[Ig]M亞型),是針對結(jié)腸上皮蛋白(CEP)開發(fā)的,其能特異性地與結(jié)腸上皮反應(yīng),不與胃腸道的任何其它部分反應(yīng),包括胃,小腸和胰腺。在2003年,Das-1 m Ab有助于識別胃中的結(jié)腸化生表型及其與胃癌的關(guān)聯(lián)。在胚胎發(fā)育中起重要作用的HOX基因,最早在黑腹果蠅中發(fā)現(xiàn)。人類中已經(jīng)鑒定出39個HOX基因,共分成A,B,C和D4組。這些基因起的的腫瘤抑制或腫瘤促進作用取決于它們在某些器官中的異常表達。尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2(CDX2),是尾型同源盒基因家族的成員,在胃腸發(fā)育過程中參與腸上皮細胞的早期分化和維持。人CDX2定位于13q12.3-13上,最新研究表明,在轉(zhuǎn)基因小鼠胃中,CDX2掌控胃癌發(fā)生引起異位小腸表型的早期事件。為明確CDX2在GIM發(fā)展中的作用,開發(fā)了兩種小鼠細胞系。盡管CDX1和CDX2小鼠均表現(xiàn)出顯著的腸化生,但是這2小鼠模型的組織學(xué)具有顯著差異。同樣,在人體中均可觀察到CDX1和CDX2的異位表達,但是僅CDX2是腸型胃腺癌的獨立因素。CDX2在人類GIM和萎縮性胃炎中的異常表達已經(jīng)在文獻中廣泛報道,但是假說提出CDX2在胃腺癌的發(fā)病過程中起的是抑癌作用,而非促癌作用。因此,需要進一步研究論證CDX2參與胃癌發(fā)展的具體作用。有報道稱幽門螺桿菌是胃粘膜中CDX2表達的致病因子之一,但是其潛在的機制尚未被明確。此外,在幽門螺桿菌根治后也觀察到胃CDX2表達降低�？梢�,CDX2在正�；虍惓５哪c分化中均起重要作用。雖然胃癌和胃癌前病變(萎縮性胃炎和GIM)在中國非常普遍,但是在這些病變中CDX2的表達罕有文獻報道。目的在本研究中,目的是確定幽門螺桿菌在胃腸化生中誘導(dǎo)GIM中CDX2表達的作用。此外,本研究還評估了CDX2在萎縮性胃炎,GIM,發(fā)育不良和胃癌中的表達。設(shè)計,地點和研究期限62例活檢在2016年8月至2017年1月內(nèi)鏡檢查中取得,從吉林大學(xué)第一醫(yī)院病理科,長春,中國)獲得,被列為進一步研究對象。患者與方法本研究納入32例GIM和萎縮性胃炎,發(fā)育不良和胃癌各10例,且該研究通過我院醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。從電子病歷中提取相關(guān)數(shù)據(jù),包括年齡,性別和病理報告。將活檢標(biāo)本置于含有10%緩沖福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,5μm連續(xù)切片后固定在載玻片上。載玻片用HE染色,用于免疫組織化學(xué)和幽門螺桿菌檢測,并由資深病理學(xué)專家閱片。免疫組織化學(xué)法評價CDX2表達,在微波爐中用0.01mol/L EDRA,p H9.0中處理載玻片3分鐘來進行抗原修復(fù)。使用CDX2(克隆EP125;ZSGB Biotechnology Co.,Beijing,China)進行免疫組織化學(xué)染色。連續(xù)變量(特征)的描述性統(tǒng)計被表示為平均值,標(biāo)準(zhǔn)偏差,最小值和最大值。此外,使用Fisher精確檢驗來分析所收集的數(shù)據(jù)。P值小于0.05被認(rèn)為是具有統(tǒng)計學(xué)差異的。結(jié)果大多數(shù)標(biāo)本(85.5%)CDX2染色陽性。在研究的62名患者中,37例是男性,25例是女性。參與者的平均年齡為59±11.2歲。CDX2表達陽性的患者的平均年齡為59歲(s.d.:11.3;范圍:38-87),包括86.5%的男性(32/37),84.0%的女性(21/25)。53例CDX2陽性患者中有27例低于59歲,26例為59歲或59歲以上。年齡和性別與CDX2的表達無統(tǒng)計學(xué)差異。AG,發(fā)育異常和癌癥組,每組各10例患者。每組各8例CDX2染色陽性。在四組中,CDX2的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.714)。在GIM中CDX2陽性表達率高(90.6%)。平均年齡為53歲(s.d.:8.7;范圍:38-70)。大多數(shù)是男性(17/29),部分女性(12/29)。雖然男性患者例數(shù)多,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.57)。在35.85%(19/53)的CDX2染色陽性標(biāo)本中幽門螺桿菌陽性,包括8例GIM,5例AG,3例發(fā)育不良和3例胃癌。然而,幽門螺桿菌陽性率對于誘導(dǎo)CDX2表達沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.14)。在29例GIM CDX2陽性標(biāo)本中僅有8例幽門螺桿菌陽性(P=1.0)。結(jié)論本文研究了胃癌和癌旁組織中系的CDX2的表達,以及年齡,性別和CDX2的關(guān)系。研究表明,首先CDX2在GIM高表達,達90.6%。同時,CDX2在不典型增生,腸上皮化生和胃癌中均顯著高表達,提示了CDX2在胃癌的發(fā)展過程中起了重要作用。GIM中幽門螺桿菌發(fā)病率較低。綜上,本研究提示CDX2在胃癌和癌旁組織中均高表達,CDX2可能是個致癌基因。年齡、性別、幽門螺桿菌感染和CDX2表達無顯著關(guān)系。因此,仍需進一步研究和腸上皮分化,以及進展為胃癌的危險因素,比如環(huán)境和基因,以期發(fā)現(xiàn)引起胃癌的高危因素。
[Abstract]:In spite of significant advances in diagnosis and treatment techniques , gastric cancer ( GC ) remains the third largest common cancer in China and is the third leading cause of death for all cancers in the world . A three - year monitoring of gastric mucosal injury is proposed by the European Society for Gastroenterology . According to the procedure , it is necessary to use narrow - band imaging and / or magnifying endoscopy to identify lesions , and then two biopsies are taken from gastric antrum and stomach . In addition to Helicobacter pylori , the expression of Schfln5 is higher in GIM tissue . In this study , the expression of CDX2 in gastric cancer was assessed by immunohistochemical method . The expression of CDX2 in gastric cancer and adjacent tissues was significantly higher ( P = 0 . 14 ) .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2;R573

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本文編號：1542423