本文關(guān)鍵詞： 肢體缺血后處理 自噬 腦缺血再灌注 JNK AMPK/mTOR　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：科研工作來源廣西自然科學基金面上項目 NO 2016GXNSFAA380310研究目的和意義我們前期研究發(fā)現(xiàn)肢體缺血后處理對腦缺血再灌注損傷具有保護作用,其機制可能與激活P38MAPK等通路有關(guān)。自噬是通過依賴溶酶體途徑降解長半衰期蛋白及細胞器的一種細胞內(nèi)自我分解代謝過程,是細胞生存、死亡的重要調(diào)節(jié)者。但肢體缺血后處理是否通過激活自噬對腦缺血再灌注損傷發(fā)揮保護作用及其具體機制如何尚未明確。本實驗通過建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型,并給予大鼠肢體缺血后處理,探討肢體缺血后處理是否通過激活自噬途徑發(fā)揮腦保護作用,同時進一步明確JNK和AMPK/mTOR信號通路是否是肢體缺血后處理激活自噬的上游通路,以期為肢體缺血后處理可能應用于臨床實踐提供理論依據(jù)。研究方法第一部分:自噬參與肢體缺血后處理對腦缺血再灌注損傷的作用:實驗大鼠隨機分成假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(I/R組)、缺血再灌注+肢體缺血后處理組(LpostC組)、缺血再灌注+肢體缺血后處理+自噬激動劑雷帕霉素組(Rapa組)和缺血再灌注+肢體缺血后處理+自噬抑制劑3-MA組(3-MA組)。通過HE和TTC染色法觀察病理形態(tài)學變化和腦梗死體積;免疫組化和WB檢測LC3Ⅱ、Beclin 1和Cathepsin B的蛋白表達和蛋白水平。第二部分:JNK信號通路依賴的自噬參與肢體缺血后處理的作用機制:實驗大鼠隨機分成Sham組、I/R組、LPostC組、缺血再灌注+肢體缺血后處理+JNK抑制劑sp600125組(sp6組)。WB檢測Beclin 1、LC3Ⅱ和p-JNK的蛋白水平。第三部分:AMPK/mTOR依賴的自噬參與肢體缺血后處理的作用機制:實驗大鼠隨機分成Sham組、I/R組、LPostC組、缺血再灌注+肢體缺血后處理+AMPK 抑制劑 compound C 組(compound C 組)。WB 檢測 Beclin 1、LC3Ⅱ、p-AMPK和p-mTOR的蛋白水平。研究結(jié)果第一部分:1、HE染色結(jié)果:I/R組神經(jīng)元排列紊亂,許多神經(jīng)元核固縮深染,呈空泡狀改變。LPostC組病理學改變較I/R組輕。Rapa組病理學改變更輕,3-MA病理學改變重。2、TTC染色結(jié)果:與I/R組相比,LPostC組梗死體積小(P0.05);與LPostC組相比,Rapa組梗死體積更小(P0.05),而3-MA組梗死體積大(P0.05)。3、免疫組化Beclin 1和Cathepsin B蛋白表達結(jié)果:與Sham組相比,I/R組兩者的蛋白表達均增高(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白表達均增高(P0.05);與LPostC組相比,Rapa組蛋白表達進一步增高,3-MA組均降低(P0.05)。4、WB檢測Beclin 1、LC3Ⅱ和Cathepsin B蛋白水平結(jié)果:與Sham組相比,I/R組三者的蛋白水平均增高(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白水平均增高(P0.05);與LPostC組相比,Rapa組蛋白水平均進一步增高,3-MA組均降低(P0.05)。第二部分:1、Beclin 1和LC3Ⅱ的蛋白水平結(jié)果:與Sham組相比,I/R組兩者的蛋白水平增高(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白水平更高(P0.05);與LPostC組相比,sp6組蛋白水平降低(P0.05)。2、p-JNK的蛋白水平結(jié)果:與Sham組相比,I/R組蛋白水平增高(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白水平更高(P0.05);與LPostC組相比較,sp6組蛋白水平降低(P0.05)。第三部分:1、Beclin 1和LC3Ⅱ的蛋白水平結(jié)果:與Sham組相比,I/R組兩者的蛋白水平增高(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白水平更高(P0.05);與LPostC組相比,compound C組蛋白水平降低(P0.05)。2、p-AMPK的蛋白水平結(jié)果:與Sham組相比,I/R組蛋白水平增高(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白水平更高(P0.05);與LPostC組相比,compound C組蛋白水平降低(P0.05)。3、p-mTOR的蛋白水平結(jié)果:與Sham組相比,I/R組蛋白水平降低(P0.05);與I/R組相比,LPostC組蛋白水平更低(P0.05);與LPostC組相比,compound C組蛋白水平升高(P0.05)。研究結(jié)論1.肢體缺血后處理通過激活自噬在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護作用。2.JNK信號通路是腦缺血再灌注時肢體缺血后處理激活自噬的可能途徑之一。3.AMPK/mTOR信號通路是腦缺血再灌注時肢體缺血后處理激活自噬的可能途徑之一。
[Abstract]:The mechanism of self - autophagy in ischemia - reperfusion injury in rats was studied by means of HE and TTC staining . Compared with group I / R , the expression of protein in group I / R increased significantly ( P0.05 ) . Compared with group I / R , the level of protein in group I / R increased ( P0.05 ) . Compared with the group I / R , the level of protein in group I / R was higher ( P0.05 ) . Compared with group I / R , the level of protein in I / R group was higher than that in group I / R ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3

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本文編號：1537568