本文關(guān)鍵詞： 膠質(zhì)母細胞瘤 低氧 微小RNA 巨噬細胞遷移抑制因子 自噬和血管擬態(tài)　出處：《山東大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景人腦膠質(zhì)母細胞瘤(Glioblastoma Mutiforme,GBM)是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見并且惡性程度最高的原發(fā)性腫瘤,在全部類型的腦膠質(zhì)瘤中能夠占到50%以上。根據(jù)組織病理學(xué)特征,世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)將腦膠質(zhì)瘤按照惡性程度由低到高分為Ⅰ-Ⅳ四個等級,其中GBM被認定為星形細胞瘤病理類型中惡性程度最高的Ⅳ級。近年來,雖然針對GBM的傳統(tǒng)手術(shù)切除聯(lián)合放化療、新型的抗血管生成治療以及靶向免疫治療等策略不斷豐富和改進,但是在臨床實踐中仍未能取得令人滿意的效果,GBM治愈率低,復(fù)發(fā)率高,患者預(yù)后極差。為了完善和補充當(dāng)前的GBM治療策略,改善患者的生存預(yù)后,進一步探索和揭示GBM惡性生物學(xué)進展的分子調(diào)控機制仍然十分迫切。低氧(Hypoxia)是實體性腫瘤微環(huán)境中最為普遍存在的標(biāo)志性特征。由于氧氣輸送和氧氣消耗之間的不平衡,約一半以上的實體腫瘤中存在廣泛的低氧區(qū)域。低氧微環(huán)境和低氧誘導(dǎo)因子(Hypoxia Inducible Factor,HIF)所依賴的下游分子通路在腫瘤的惡性生物學(xué)進展中起到關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用,其參與調(diào)控了腫瘤細胞的增殖、侵襲遷移,上皮表型向間充質(zhì)表型的轉(zhuǎn)變(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT),內(nèi)皮血管新生,以及免疫逃逸。此外,臨床研究數(shù)據(jù)表明低氧與多種腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移、放化療耐受性以及患者的不良預(yù)后有著緊密的聯(lián)系。GBM作為惡性程度極高的實體腫瘤,存在廣泛的低氧區(qū)域,然而其低氧下的分子調(diào)控機制尚未完全闡明。因此對這一機制的深入探索,有利于尋找新的治療靶點,進而采取適當(dāng)?shù)氖侄谓档湍z質(zhì)瘤細胞的惡性進展,改善膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后。細胞自噬(Autophagy)是一種利用自噬溶酶體回收、清除細胞內(nèi)受損、變性或衰老的蛋白質(zhì)和細胞器的自我消化分解代謝過程。這種自我清除代謝廢物、重新回收能量的生理性代謝過程在細胞正常運轉(zhuǎn)、自我修復(fù)、逃避惡劣環(huán)境等方面起到重要的作用。腫瘤細胞自噬的誘導(dǎo)為其自身提供了有效的額外供養(yǎng)途徑,提高了清除細胞內(nèi)有害物質(zhì)的能力,有利于腫瘤細胞在低氧、低養(yǎng)、饑餓等惡劣微環(huán)境中的生存以及惡性生物學(xué)進展。越來越多的研究表明,低氧能夠誘導(dǎo)GBM細胞自噬活性的增強,并且在一定程度上提高了其對化療藥物的耐受性。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一類長約19-22核苷酸的內(nèi)源性、非編碼單鏈RNA,通過作用于靶基因的3'非翻譯區(qū)(3' untranslated region,3' UTR)導(dǎo)致靶基因mRNA降解或抑制其翻譯,在轉(zhuǎn)錄后水平對基因進行調(diào)控。MiRNA在細胞生理學(xué)活動過程中的調(diào)節(jié)作用極其廣泛,其中包括增殖、分化、凋亡以及自噬等。在GBM中,低氧微環(huán)境誘導(dǎo)大量miRNAs產(chǎn)生了差異性的表達,給miRNA表達譜留下了特定的低氧印跡。這些差異表達的miRNAs可能在低氧誘導(dǎo)的GBM細胞自噬水平的增高、侵襲遷移能力的增強以及耐藥性的產(chǎn)生中起到關(guān)鍵性的調(diào)控作用。然而,低氧在GBM自噬活性以及惡性進展中作用的關(guān)鍵調(diào)控miRNAs仍然不十分明確,需要進一步深入研究。血管擬態(tài)(Vasculogenic Mimicry,VM)是完全不依賴于血管內(nèi)皮細胞,由惡性腫瘤細胞自身形成的管道樣脈絡(luò)結(jié)構(gòu),具有供血功能。從血管擬態(tài)這種現(xiàn)象被定義以來,它在多種惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn),其中包括GBM。血管擬態(tài)的形成增加了 GBM血流量,能夠為低氧下生長迅速的膠質(zhì)瘤細胞提供額外營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的供應(yīng)。之前的研究表明,形成VM的腫瘤細胞具有產(chǎn)生可塑性表型的特性,這種表型的可塑性改變能夠受到低氧的調(diào)節(jié)。值得我們注意的是,低氧能夠通過誘導(dǎo)GBM細胞發(fā)生EMT促進血管擬態(tài)的形成。巨噬細胞遷移抑制因子(Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF)是具有促進炎癥發(fā)生和促進腫瘤惡性進展雙重功能的細胞因子。MIF在多種類型的惡性腫瘤中高度表達,其中包括GBM。近年來,對膠質(zhì)瘤的深入的研究發(fā)現(xiàn)MIF表達水平與其臨床病理分級以及浸潤擴散程度具有密切的正相關(guān)關(guān)系。更重要的是,低氧能夠進一步增加GBM中MIF的表達和分泌,而且MIF與GBM細胞的自噬、侵襲遷移、血管生成和免疫逃避有著密切聯(lián)系。然而,低氧下MIF對GBM的作用和具體調(diào)控分子機制尚不清楚,仍有待進一步深入研究。本課題主要從低氧促進GBM細胞自噬以及血管擬態(tài)生成兩方面進行研究,分別深入探討了相關(guān)的miR224-3p和MIF對GBM的作用以及其具體作用機制。首先,從低氧下GBM細胞miRNA表達譜基因芯片入手,我們通過全面分析篩選發(fā)現(xiàn)芯片中顯著下調(diào)的miR224-3p參與介導(dǎo)了低氧誘導(dǎo)的GBM自噬水平增強。隨后,進一步深入研究了其對GBM的自噬作用及其具體機制。除此以外,我們發(fā)現(xiàn)MIF對低氧下GBM細胞血管擬態(tài)的形成有著關(guān)鍵的調(diào)控作用,并且進一步探索了其具體的分子機制。本課題對低氧下GBM惡性生物學(xué)進展的基礎(chǔ)研究,為GBM患者提供了新的治療靶點,有著重要學(xué)術(shù)意義和廣闊的臨床應(yīng)用前景。第一部分MiR224-3p對低氧下膠質(zhì)母細胞瘤自噬水平的影響及其作用機制的研究1.目的(1)基于miRNA表達譜基因芯片,通過分析常氧、低氧下GBM細胞miRNAs的差異表達,篩選出低氧下調(diào)的miRNAs中與自噬相關(guān)的miRNAs(miR224-3p)。(2)明確miR224-3p對低氧下GBM細胞自噬水平的調(diào)節(jié)作用,闡明miR224-3p調(diào)節(jié)GBM細胞自噬的具體作用機制和直接作用靶基因。(3)揭示膠質(zhì)瘤組織中mmiR224-3p的表達水平,以及miR224-3p與靶基因表達量之間的相關(guān)性。(4)探究miR224-3p對GBM細胞增殖和低氧誘導(dǎo)凋亡的作用。(5)明確miR224-3p對GBM細胞體內(nèi)成瘤生長的影響。2.方法(1)細胞低氧處理及m i RNA芯片的檢測通過低氧培養(yǎng)箱實現(xiàn)物理性低氧,培養(yǎng)條件設(shè)定為:37℃,5%CO2,1%O2。分別提取低氧處理組(24h)和對照組U251細胞的總miRNAs,進行miRNA表達譜的檢測,經(jīng)過分析獲取全面的miRNA表達譜原始數(shù)據(jù)。(2)mRNA,miRNA和蛋白水平的檢測收集不同WHO級別臨床膠質(zhì)瘤組織后,提取總mRNA和制備石蠟切片,應(yīng)用熒光實時定量PCR(q-PCR)和免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測各相關(guān)miRNAs、mRNAs和蛋白分子的表達水平。對U251和U87兩種GBM細胞系進行特定的處理并分別提取總RNA和總蛋白,使用q-PCR和Western blot技術(shù)檢測U251和U87細胞內(nèi)相關(guān)mRNAs,miRNAs和蛋白分子的表達水平。(3)細胞轉(zhuǎn)染及GFP-LC3穩(wěn)定細胞系的構(gòu)建分別用 miR224-3p mimics,miR224-3p inhibitor,ATG5 質(zhì)粒,FIP200 質(zhì)粒,含有miR224-3p互補結(jié)合序列的ATG5 3' UTR突變型或野生型熒光素酶報告基因質(zhì)粒,含有miR224-3p互補結(jié)合序列的FIP200 3' UTR突變型或野生型熒光素酶報告基因質(zhì)粒對U251和U87細胞進行Lipo2000脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染,用于過表達或敲除目的蛋白或miR224-3p,進而研究各種相關(guān)指標(biāo)的表達水平的變化。將含有GFP-LC3B編碼序列的質(zhì)粒用慢病毒進行包裝,通過共培養(yǎng)轉(zhuǎn)染U251和U87細胞系,構(gòu)建穩(wěn)定表達GFP-LC3B綠色熒光蛋白細胞系后,對自噬水平進行動態(tài)監(jiān)測。(4)膠質(zhì)瘤細胞自噬水平檢測對自噬水平的檢測分為以下幾種方法:①透射電子顯微鏡直接觀察U251細胞中典型雙層膜結(jié)構(gòu)自噬小體的數(shù)量,此方法為監(jiān)測自噬的金標(biāo)準(zhǔn)。②Western blot技術(shù)檢測U251和U87細胞自噬主要標(biāo)志性蛋白LC3B和P62表達水平。③倒置熒光顯微鏡觀察GFP-LC3B穩(wěn)定表達U251和U87細胞中熒光自噬小體陽性細胞,并統(tǒng)計計算陽性細胞比例。④自噬小體和溶酶體融合抑制劑巴弗洛霉素A1(BafilomycinAl,BAF)藥物應(yīng)用于自噬流的檢測。(5)M i R224-3p下游調(diào)控靶點預(yù)測以及熒光素酶報告基因?qū)嶒灷胢iRNA靶基因數(shù)據(jù)庫(如:targetscan、PicTar、miRanda等)篩選出miR224-3p最可能直接作用的自噬相關(guān)靶基因。之后通過q-PCR和Western blot進行驗證。最后,分別對U251和U87細胞進行miR224-3p mimics和含有靶基因突變型或野生型結(jié)合位點的熒光素酶報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后,進行雙熒光素酶基因報告實驗確定miR224-3p直接作用的靶基因。(6)膠質(zhì)瘤細胞增殖和凋亡檢測分別對 U251 和 U87 細胞進行 miR224-3p mimics 和 miR224-3p inhibitor 瞬時轉(zhuǎn)染,然后用CCK-8和EdU試劑盒檢測不同時間點GBM細胞活力和增殖能力。用Annexin V-FITC雙染流式試劑盒和抗裂解的caspase3免疫細胞化學(xué)方檢測低氧誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染miR224-3p mimics的U251和U87細胞凋亡水平。(7)裸鼠皮下人腦GBM細胞成瘤實驗用U87細胞系建立裸鼠皮下異位成瘤模型。U87細胞在皮下成瘤后,行瘤內(nèi)注射lenti-miRNA224-3p mimics和lenti-NCm慢病毒,同時間隔1天測量miR224-3p mimics組和NCm組腫瘤體積以及終末腫瘤重量。3.結(jié)果(1)低氧誘導(dǎo)GBM明細胞自噬水平的增強Western blot和GFP-LC3B穩(wěn)定細胞系熒光自噬小體檢測分別顯示,與常氧組相比,GBM細胞U251和U87在低氧下自噬水平增強(LC3BⅡ升高,P62降低,自噬小體陽性細胞比例升高),且呈處理時間梯度依賴效應(yīng)。BAF自噬流阻斷實驗顯示低氧誘導(dǎo)U251和U87細胞自噬流被明顯阻斷(LC3BⅡ和P62表達均明顯升高),進一步驗證了以上結(jié)論。(2)在GBM細胞中,低氧誘導(dǎo)miR224-3p表達下調(diào);在人腦膠質(zhì)瘤組織中,miR224-3p呈低水平表達U251細胞miRNA表達譜芯片分析結(jié)果顯示,miR224-3p為篩選出的低氧下調(diào)最顯著的mmmiRNA。Q-PCR檢測結(jié)果進一步驗證,低氧下U251和U87細胞中miR224-3p表達水平明顯下降。30例臨床膠質(zhì)瘤組織(14例低級別膠質(zhì)瘤,WHOⅠ,Ⅱ級和16例高級別膠質(zhì)瘤,WHO Ⅱ,Ⅳ級)和6例正常腦組織q-PCR結(jié)果顯示,與正常腦組織相比,miR224-3p在膠質(zhì)瘤組織中明顯低表達。(3M i R224-3p參與調(diào)控低氧誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤母細胞瘤細胞自噬水平的增強透射電子顯微鏡、Western blot和GFP-LC3B細胞系熒光自噬小體檢測分別發(fā)現(xiàn),常氧下,敲除內(nèi)源性miR224-3p的U251和U87細胞自噬及自噬流水平明顯增強;低氧下,過表達miR224-3p能夠阻斷U251和U87細胞自噬水平的升高。(4)MiR224-3p通過直接作用于下游靶基因ATG5和FIP200調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤母細胞瘤細胞的自噬水平Q-PCR和Western blot檢測顯示,在眾多miR224-3p預(yù)測的自噬相關(guān)靶基因中,過表達和敲除miR224-3p分別同時明顯降低和升高FIP200和ATG5表達。而且,共同過表達FIP200和ATG5能夠逆轉(zhuǎn)miR224-3p過表達對低氧誘導(dǎo)自噬的阻斷作用。更進一步的雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果發(fā)現(xiàn),miR224-3p能夠分別與FIP200和ATG5的3' UTR中的互補序列結(jié)合發(fā)揮直接靶向抑制作用。(5)在人腦膠質(zhì)瘤組織中,m i R224-3p含量與FIP200和ATG5的表達水平具有負性相關(guān)關(guān)系免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),膠質(zhì)瘤組織中低氧標(biāo)志物HIF1 α和自噬標(biāo)志物L(fēng)C3B較正常腦組織明顯高表達。同時經(jīng)過定量和統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn),30例不同病理級別膠質(zhì)瘤組織FIP200和ATG5的表達水平分別和miR224-3p的含量呈現(xiàn)出有明顯統(tǒng)計學(xué)意義的負相關(guān)關(guān)系。(6)MiR224-3p減弱膠質(zhì)瘤母細胞瘤細胞增殖能力,并且能夠增加低氧誘導(dǎo)的GBM細胞的凋亡。CCK-8法和EdU法檢測分別顯示,過表達miR224-3p的U251和U87細胞活力和增殖能力明顯增強,反之亦然。Annexin V-FITC雙染流式試劑盒和抗裂解的caspase3免疫細胞化學(xué)方法檢測發(fā)現(xiàn),過表達miR224-3p能夠顯著提高低氧誘導(dǎo)的U251和U87細胞凋亡水平。(7)在體內(nèi)實驗中,m i R224-3p抑制GBM的生長利用U87細胞系建立裸鼠皮下人腦膠質(zhì)瘤異位成瘤模型進行體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn),miR224-3p mimics慢病毒組腫瘤平均體積和平均終末重量均顯著低于對照慢病毒組。4.結(jié)論(1)通過miRNA表達譜分析,首次篩選出并且證實了 miR224-3p在低氧誘導(dǎo)的GBM細胞自噬增強中起到關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用。(2)低氧能夠明顯降低GBM細胞miR224-3p的表達水平。(3)MiR224-3p通過抑制自噬相關(guān)基因FIP200和ATG5的表達來負性調(diào)節(jié)GBM細胞的自噬水平。(4)MiR224-3p通過結(jié)合FIP200和ATG5 mRNA的3' UTR直接抑制靶基因的表達水平。(5)在膠質(zhì)瘤組織中,miR224-3p較正常腦組織表達水平低;并且miR224-3p分別與FIP200和ATG5的表達量成負相關(guān)的關(guān)系。(6)MiR224-3p能夠減弱GBM細胞的增殖能力以及增強低氧誘導(dǎo)的GBM細胞凋亡敏感性。(7)MiR224-3p能夠抑制GBM細胞體內(nèi)的生長。第二部分MIF在低氧誘導(dǎo)膠質(zhì)母細胞瘤EMT和血管擬態(tài)生成中的作用以及其具體機制的研究1.目的(1)在膠質(zhì)瘤臨床組織中,研究低氧指標(biāo)HIF1α分別與MIF和MIF受體CXCR4表達量之間的相關(guān)性。(2)在膠質(zhì)瘤臨床組織中,揭示HIF1α,MIF,CXCR4和VM四者之間的相關(guān)性;并且對MIF、CXCR4的表達水平以及VM陽性對膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響進行統(tǒng)計學(xué)分析。(3)明確低氧對GBM細胞EMT以及VM生成的影響。(4)闡明MIF在低氧誘導(dǎo)GBM細胞EMT和VM形成中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。(5)通過特異性藥物阻斷MIF的下游CXCR4相關(guān)信號通路,探究MIF在低氧誘導(dǎo)的GBM細胞EMT和VM生成中的具體作用機制。(6)應(yīng)用裸鼠皮下GBM細胞成瘤實驗,在體內(nèi)水平驗證MIF在EMT中的作用及其下游的具體通路機制。2.方法(1)細胞低氧處理及mRNA和蛋白水平的檢測常氧和低氧下,對U251和U87兩種GBM細胞進行相應(yīng)的rhMIF、AMD3100、LY294002,ISO-1處理刺激后,分別提取總RNA和總蛋白。然后使用q-PCR和Western blot方法檢測U251和U87細胞內(nèi)需要檢測的相關(guān)EMT標(biāo)志物mRNAs和蛋白分子的表達水平。(2)細胞轉(zhuǎn)染用Lipofectamine 2000對siMIF進行瞬時轉(zhuǎn)染,用于敲除U251和U87細胞內(nèi)源性MIF的表達,進而檢測各種相關(guān)EMT標(biāo)志蛋白表達水平的變化。(3)臨床組織標(biāo)本免疫組化和免疫熒光收集臨床不同WHO級別的膠質(zhì)瘤組織[25例臨床膠質(zhì)瘤組織(12例低級別膠質(zhì)瘤,WHO Ⅰ,Ⅱ級和13例高級別膠質(zhì)瘤,WHO Ⅲ,Ⅳ級)和6例正常腦組織],制備石蠟切片。然后應(yīng)用免疫組化檢測不同級別膠質(zhì)瘤組織中HIF1 α、MIF、CXCR4的表達水平及血管擬態(tài)的生成[CD34與PAS(過碘酸希夫反應(yīng))共染陽性]情況。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和免疫熒光檢測連續(xù)石蠟切片中HIF1 α、MIF、CXCR4以及血管擬態(tài)的共定位現(xiàn)象。(4)細胞免疫熒光對U251和U87細胞分別進行低氧以及相應(yīng)的rhMIF、AMD3100、LY294002、ISO-1處理刺激。然后用4%多聚甲醛固定,通過免疫熒光方法檢測細胞中MIF、CXCR4、上皮表型標(biāo)志物E-Cadherin的表達水平。(5)膠質(zhì)瘤細胞血管擬態(tài)形成實驗利用基質(zhì)膠3D環(huán)境,對低氧以及rhMIF、AMD3100、LY294002、ISO-1分別處理后的U87細胞進行血管擬態(tài)形成實驗,檢測不同處理因素對U87細胞形成血管擬態(tài)能力的影響。(6)裸鼠體內(nèi)試驗用GBM細胞系U87建立人腦膠質(zhì)瘤荷瘤裸鼠皮下異位模型。U87細胞在皮下成瘤后,隨機分為五組,分別行瘤周注射PBS,rhMIF,rhMIF和AMD3100,rhMIF和LY294002,ISO-1。三周后進行終末腫瘤體積的測量,并且對腫瘤進行石蠟包埋切片,進行免疫組化染色,檢測組間N-cadherin(間充質(zhì)表型標(biāo)志物)和E-cadherin(上皮表型標(biāo)志物)的表達水平。3.結(jié)果(1)在臨床膠質(zhì)瘤標(biāo)本中,MIF和CXCR4的表達水平與HIF1 α含量呈正相關(guān)關(guān)系免疫組化檢測結(jié)果顯示,MIF、CXCR4和HIF1α的表達水平在膠質(zhì)瘤中明顯高于正常腦組織,并且高級別膠質(zhì)瘤高于低級別膠質(zhì)瘤。同時,定量統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果表明,HIF1α分別與MIF和CXCR4的表達水平呈線性正性相關(guān)關(guān)系。連續(xù)石蠟切片免疫熒光檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),MIF和CXCR4的表達與HIF1 α在膠質(zhì)瘤組織中存在共定位現(xiàn)象。(2)在膠質(zhì)瘤組織中,血管擬態(tài)的形成與MIF和CXCR4的共同高表達密切相關(guān)PAS染色和CD34免疫組化共染結(jié)果顯示,VM形成標(biāo)本陽性率在高級別膠質(zhì)瘤中明顯高于低級別,并且共同高表達MIF和CXCR4與VM的形成明顯正相關(guān)。連續(xù)石蠟切片免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),MIF、CXCR4、HIF1α和VM在膠質(zhì)瘤組織中存在共定位現(xiàn)象。進一步的生存分析結(jié)果顯示,VM陽性的膠質(zhì)瘤患者生存期明顯低于VM陰性患者。(3)MIF和CXGR4的表達水平在低氧下升高,并且低氧和MIF誘導(dǎo)EMT和VII的形成Western blot、q-PCR和細胞免疫熒光檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),MIF和CXCR4的表達在低氧下明顯升高,以及低氧和MIF促進EMT(上皮樣表型標(biāo)志物E-cadherin的下降和間充質(zhì)表型標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin的升高)。VM形成實驗結(jié)果表明,低氧和MIF能夠促進GBM細胞VM形成。(4)低氧通過MIF-CXCR4-AKT-EMT通路促進膠質(zhì)瘤母細胞瘤細胞的VM形成Q-PCR、Western blot檢測和VM形成實驗結(jié)果顯示,MIF誘導(dǎo)的EMT和VM形成能夠被CXCR4和AKT抑制劑阻斷。而且,低氧誘導(dǎo)的EMT和VM形成能夠被MIF、CXCR4和AKT抑制劑阻斷。(5)在體內(nèi),MIF促進GBM的EMT和生長。裸鼠皮下成瘤實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),MIF處理組皮下腫瘤體積明顯高于PBS組、MIF+AMD3100組和MIF+ LY294002組,并且ISO-1組腫瘤體積小于PBS組。裸鼠皮下腫瘤免疫組化結(jié)果顯示,MIF組腫瘤細胞有顯著的EMT表現(xiàn)(E-cadherin降低,N-cadherin升高),而其它組無明顯影響。4.結(jié)論(1)膠質(zhì)瘤組織中存在抗內(nèi)皮細胞血管新生治療的補償途徑VM。(2)在膠質(zhì)瘤組織中,HIF1α分別與MIF和CXCR4的表達水平呈正相關(guān)關(guān)系。(3)在膠質(zhì)瘤組織中,HIFIα、MIF、CXCR4和VM四者存在共定位的密切聯(lián)系。(4)低氧能夠分別增強GBM細胞MIF和CXCR4的表達水平,并且促進GBM細胞EMT和VM的形成。(5)MIF在低氧誘導(dǎo)的GBM細胞EMT和VM形成中起到關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用。(6)低氧下MIF和CXCR4表達水平的共同升高激活了 GBM細胞CXCR4下游AKT通路,促進了 EMT的發(fā)生,進而增強了 VM形成的能力。(7)MIF通過CXCR4-AKT-EMT通路促進了 GBM細胞體內(nèi)的惡性生物學(xué)進展。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41
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本文編號：1530309