本文關(guān)鍵詞： 高胰島素血癥 子宮內(nèi)膜容受性 子宮內(nèi)膜蛻膜化 胰島素　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:激素在胚胎植入過(guò)程及妊娠的維持中均起著重要的調(diào)控作用。以往對(duì)妊娠中激素的研究多集中于雌激素和孕激素與子宮內(nèi)膜功能的關(guān)系,關(guān)于胰島素是否參與了妊娠早期子宮內(nèi)膜容受性及蛻膜化建立的研究報(bào)道甚少�，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜上存在胰島素受體。臨床高胰島素血癥的育齡婦女(如肥胖患者),大多數(shù)伴有不孕和早期流產(chǎn)。因此,本研究擬從子宮內(nèi)膜容受性和子宮內(nèi)膜蛻膜化兩個(gè)角度,探討高胰島素對(duì)早孕小鼠子宮內(nèi)膜功能的影響,以了解胰島素對(duì)妊娠過(guò)程的調(diào)節(jié),為臨床高胰島素血癥導(dǎo)致的不孕癥、自然流產(chǎn)的診斷與治療尋求新的手段。方法:1、建立高胰島素小鼠模型:實(shí)驗(yàn)組采用長(zhǎng)效胰島素長(zhǎng)時(shí)間梯度劑量皮下注射,對(duì)照組用同等劑量生理鹽水皮下注射的方法構(gòu)建動(dòng)物模型。監(jiān)測(cè)小鼠血糖及體重。23天后,采用Elisa方法對(duì)小鼠血清胰島素水平進(jìn)行檢測(cè),判斷高胰島素小鼠模型是否建立成功。2、建立小鼠妊娠模型:高胰島素小鼠模型建立成功后,將胰島素處理組和對(duì)照組的雌性小鼠與正常雄性小鼠交配,晚上8點(diǎn)左右合籠(雌性:雄性,2:1),次日早上8點(diǎn)左右檢查陰栓�？吹疥幩ǖ臑槿焉锏�1天(d1),苦味酸標(biāo)記受孕小鼠。收集d4、d5、d6、d7和d8天孕鼠子宮內(nèi)膜組織。人工誘導(dǎo)蛻膜化模型:將胰島素處理組和對(duì)照組的雌性小鼠與輸精管結(jié)扎的雄性小鼠合籠交配,次日看到陰栓的為假孕第1天(pd1)。小鼠假孕4天(pd4)一側(cè)宮角注射玉米油100μl誘導(dǎo)蛻膜化,對(duì)側(cè)宮角不注射作為對(duì)照,于pd8處死,收集子宮組織。3、高胰島素對(duì)早孕小鼠子宮內(nèi)膜功能的影響:elisa方法檢測(cè)小鼠血清胰島素、孕酮和雌二醇水平;解剖觀察子宮大體形態(tài);he染色法觀察子宮的微細(xì)結(jié)構(gòu);實(shí)時(shí)定量熒光pcr,蛋白質(zhì)印跡法和免疫組織化學(xué)檢測(cè)d4和d5天小鼠子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)標(biāo)記物esr1、esr2、pgr和hoxa10的表達(dá)及d6、d7和d8天小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化相關(guān)標(biāo)記物pgr、esr2、bmp2和prl的表達(dá)。westernblot對(duì)mtor信號(hào)通路子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)分子的表達(dá)進(jìn)行分析。最后,計(jì)數(shù)并比較胰島素處理組與對(duì)照組孕鼠的妊娠天數(shù)及每窩幼崽數(shù)。結(jié)果:1、高胰島素小鼠模型的構(gòu)建及血清激素分析:胰島素處理組小鼠血糖及血清胰島素水平顯著高于對(duì)照組,模型構(gòu)建成功。此外,胰島素處理組小鼠血糖和homa值顯著高于對(duì)照組,提示胰島素處理組小鼠出現(xiàn)胰島素抵抗。血清激素檢測(cè)結(jié)果顯示,胰島素處理組血清e(cuò)2顯著低于正常對(duì)照組(p0.05),p4顯著高于對(duì)照組(p0.05)。2、高胰島素影響妊娠早期小鼠的子宮內(nèi)膜容受性:胰島素處理組與對(duì)照組比較,d4和d5天子宮的大體形態(tài)及微細(xì)結(jié)構(gòu)沒(méi)有顯著差異,且d5天的胚胎著床點(diǎn)數(shù)量也沒(méi)有顯著改變(p0.05)。但是進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn),d4天胰島素處理組孕鼠子宮內(nèi)膜組織的esr1、pgr和hoxa10mrna表達(dá)較對(duì)照組顯著增高(p0.05),而esr2mrna表達(dá)下降。d5天胰島素處理組esr2和hoxa10mrna表達(dá)較對(duì)照組顯著增高(p0.05),esr1mrna表達(dá)較對(duì)照組顯著降低(p0.05),westernblot檢測(cè)到其蛋白表達(dá)量與基因表達(dá)一致。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:d4天對(duì)照組esr1、esr2、pgr和hoxa10在子宮上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核均顯現(xiàn)為棕黃色,表達(dá)均為陽(yáng)性,胰島素處理組esr1、pgr和hoxa10為棕黑色,表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性,而esr2顯現(xiàn)棕黃色,表達(dá)為陽(yáng)性。d5天對(duì)照組esr2、pgr和hoxa10在子宮上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核均顯現(xiàn)為棕黃色,表達(dá)均為陽(yáng)性,胰島素處理組esr2、pgr和hoxa10為棕黑色,表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性,而esr1顯現(xiàn)棕黃色,表達(dá)為陽(yáng)性。3、高胰島素抑制孕鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化:d6天胰島素處理組子宮形態(tài)與對(duì)照組比較無(wú)顯著差別,d7和d8天胰島素處理組子宮部分胚胎著床點(diǎn)形態(tài)與對(duì)照組相比體積變小。d6、d7和d8天胚胎著床點(diǎn)數(shù)量顯著減少(p0.05),且微細(xì)結(jié)構(gòu)可見(jiàn)部分胚層發(fā)育不全。人工誘導(dǎo)蛻膜化模型小鼠子宮形態(tài)不規(guī)則,可見(jiàn)胞質(zhì)空泡化的蛻膜細(xì)胞。在d6、d7和d8天人工誘導(dǎo)蛻膜化模型中,胰島素處理組孕鼠子宮蛻膜組織的prl、bmp2、pgr和esr2mrna表達(dá)均較對(duì)照組顯著降低(p0.05);westernblot檢測(cè)到prl、bmp2、pgr和esr2蛋白表達(dá)量也均較對(duì)照組顯著降低(p0.05)。pgr和esr2表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:在d6、d7和d8天,對(duì)照組子宮上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核均顯現(xiàn)為棕黃色,表達(dá)為陽(yáng)性,而在胰島素處理組顯示淺黃色,表達(dá)為弱陽(yáng)性。在d6和d7天,bmp2在d6和d7天對(duì)照組子宮上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核均顯現(xiàn)為棕黃色,表達(dá)為陽(yáng)性,d8天顯現(xiàn)為棕黑色,表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性,但在d6、d7和d8天胰島素處理組均顯現(xiàn)為淡黃色,表達(dá)為弱陽(yáng)性。prl在d6、d7和d8天對(duì)照組子宮上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞核均顯現(xiàn)為棕黑色,表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性。而胰島素處理組均顯現(xiàn)為淡黃色,表達(dá)為弱陽(yáng)性。4、高胰島素影響妊娠早期子宮內(nèi)膜mtor通路:對(duì)d4、d5和d6天孕鼠子宮內(nèi)膜mtor信號(hào)通路的相關(guān)蛋白mtor、p-mtor、p70s6k和p-p70s6k的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),胰島素處理組的p-mtor和p-p70s6k蛋白表達(dá)均較對(duì)照組顯著增高(p0.05)。5、高胰島素導(dǎo)致小鼠妊娠延長(zhǎng)和產(chǎn)仔數(shù)減少:胰島素處理組的小鼠平均妊娠天數(shù)(21±0.71天)顯著高于對(duì)照組(18±0.50天)(p0.05);胰島素處理組的小鼠平均每窩生的幼崽數(shù)量(10±0.50只)顯著低于對(duì)照組(13±1.12只)(p0.05)。結(jié)論:1、胰島素處理組小鼠血糖和homa值顯著高于對(duì)照組,提示在高胰島素的作用下,小鼠出現(xiàn)胰島素抵抗。e2顯著低于對(duì)照組,p4顯著高于對(duì)照組,提示高胰島素導(dǎo)致孕鼠體內(nèi)激素紊亂。2、胚胎植入早期可以劃分為兩個(gè)關(guān)鍵的時(shí)期:第一期,子宮處于容受胚泡的狀態(tài)以使胚泡獲得著床的能力,此期也被稱(chēng)為植入“窗口期”;第二期,胚泡完全被包埋入子宮內(nèi)膜,子宮內(nèi)膜蛻膜化反應(yīng)。在植入“窗口期”,胰島素處理組孕鼠胚胎個(gè)數(shù)和子宮內(nèi)膜的微細(xì)結(jié)構(gòu)與對(duì)照組沒(méi)有顯著變化,但是子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)基因及蛋白Esr1、Esr2、Pgr和Hoxa10表達(dá)異常,提示盡管在高胰島素的作用下胚胎可以著床,但早孕小鼠子宮內(nèi)膜容受性輕微受損。3、在子宮內(nèi)膜蛻膜化期,胰島素處理組孕鼠胚胎個(gè)數(shù)顯著減少,且部分孕鼠胚胎著床點(diǎn)的大體形態(tài)異常,且子宮內(nèi)膜蛻膜化的相關(guān)基因及蛋白Prl、Bmp2、Pgr和Esr2均表達(dá)異常。說(shuō)明高胰島素能夠影響子宮內(nèi)膜蛻膜化。4、孕鼠血液中胰島素水平增高會(huì)導(dǎo)致延長(zhǎng)妊娠,并且導(dǎo)致產(chǎn)仔率下降。5、胰島素處理組的孕鼠子宮內(nèi)膜p-mTOR、p-p70S6K蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng),提示mTOR信號(hào)通路可能參與了高胰島素引起的孕鼠子宮內(nèi)膜容受性受損這一過(guò)程,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R714

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本文編號(hào)：1498737