本文關(guān)鍵詞： 低頻超聲清創(chuàng) 聚己雙胍 骨感染 金葡菌　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景戰(zhàn)創(chuàng)傷等高能量損傷常造成嚴(yán)重開放性骨折并易繼發(fā)感染。早期清創(chuàng)是治療的關(guān)鍵,也是后續(xù)其他治療的基礎(chǔ)。目前臨床最常見清創(chuàng)技術(shù)即銳性手術(shù)切除結(jié)合鹽水沖洗或者碘伏消毒液和雙氧水沖洗,沿用多年。對于傷后細(xì)菌沾染效果較好,但對于細(xì)菌已經(jīng)定植并已經(jīng)形成感染的情況,在能否有效減少組織中的細(xì)菌載荷方面,效果值得懷疑。近年來創(chuàng)面的清創(chuàng)的有了一些新的器械和方法,如高壓脈沖沖洗、低壓脈沖沖洗、以及Versajet水刀系統(tǒng)等等。而脈沖沖洗對于組織的損傷也是不可忽視的,Versajet水刀系統(tǒng)更適用于創(chuàng)面的清創(chuàng),目前對于清創(chuàng)術(shù)中是否需應(yīng)用低毒性的消毒劑尚有爭議。低頻超聲波作為一種獨特的能量釋放方式(空化效應(yīng))也已經(jīng)用在各種急性創(chuàng)傷和慢性感染創(chuàng)面的治療中,其清除作用的機(jī)理以及能否直接殺菌目前還不十分清除。需要進(jìn)行研究驗證。研究目的1、明確低頻超聲與聚己雙胍(PHMB)在清除和殺滅體外浮游態(tài)和生物膜態(tài)金葡菌單獨和協(xié)同效應(yīng);2、設(shè)計建立全新可靠的脛骨局限性骨感染兔動物模型;3、檢驗超聲清創(chuàng)聯(lián)合PHMB對金葡菌接種后48小時兔骨感染模型的治療效果。研究方法實驗1.(1)將金黃色葡萄球菌接種于LB培養(yǎng)基中,形成含有浮游菌的菌液,給與不同時間梯度(0秒?5秒?10秒?20秒?30秒?60秒?120秒?300秒?600秒)的低頻超聲暴露后,行細(xì)菌涂板計數(shù)和液體培養(yǎng)混濁度定性觀察評估。(2)向含有金黃色葡萄球菌的LB培養(yǎng)基中加入由20%PHMB溶液經(jīng)不同比例稀釋的PHMB溶液(1:100、1:200、1:500、1:100、1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:20000、PBS液),作用1小時后,行細(xì)菌的定量檢測。(3)將LB培養(yǎng)基中的浮游態(tài)金黃色葡萄球菌接受30秒低頻超聲作用,再與由20%PHMB溶液經(jīng)不同比例稀釋的溶液(1:100、1:200、1:500、1:100、1:1000、1:2000、1:5000、1:10000、1:20000、PBS液)作用,檢測不同濃度梯度下的細(xì)菌剩余量和定性評估。(4)在接種有金葡菌的培養(yǎng)孔板底部通過隔日換液培養(yǎng)形成金葡菌生物膜。然后使其接受由20%phmb溶液經(jīng)不同比例稀釋的phmb溶液(空白對照、1:5000、1:2000、1:1000、1:500、1:200、1:100、1:10)處理。再對各處理組進(jìn)行細(xì)菌定量測定。(5)在接種有金葡菌的培養(yǎng)孔板底部通過隔日換液培養(yǎng)形成金葡菌生物膜。細(xì)菌生物膜接受30秒超聲輻照與由20%phmb溶液經(jīng)不同比例稀釋的phmb溶液(空白對照、1:5000、1:2000、1:1000、1:500、1:200、1:100、1:10)作用后進(jìn)行細(xì)菌計數(shù)。(6)在接種有金葡菌的培養(yǎng)孔板底部通過隔日換液培養(yǎng)形成金葡菌生物膜。將孔分成4組,每組9個。分別行pbs液沖洗,30秒超聲作用,0.05%phmb作用以及30秒超聲聯(lián)合0.05%phmb作用后,行結(jié)晶紫染色。測定結(jié)晶紫染色后數(shù)碼照片的灰度值,并在各組之間進(jìn)行比較。實驗2(1)配制金葡菌接種菌液。采用麥?zhǔn)媳葷岱ㄖ苽鋖og10(cfu/ml)為8的細(xì)菌生理鹽水懸液作為浮游菌接種液。(2)將兔骨塊置入含有金葡菌的lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時形成載菌骨。涂板法測定每塊載菌骨含菌量為log10(cfu/塊)為6.9±0.5。(3)實驗動物分成2組,每組10只,a組以菌液接種,b組以載菌骨接種,觀察兩種動物模型的感染成功率,病死率,體溫和crp反應(yīng)特點,局部創(chuàng)口愈合情況,以及x片的表現(xiàn)和病理切片檢查。實驗3(1)將兔骨塊置入含有金葡菌的lb培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時形成載菌骨。(2)50只雄性新西蘭白兔,完全隨機(jī)法分成5組。所有動物于右脛骨近端鉆孔接種載菌骨,術(shù)后48小時后按分組進(jìn)行清創(chuàng)。(3)nacl組行清創(chuàng)后生理鹽水沖洗;us組,清創(chuàng)后采用低頻超聲波結(jié)合生理鹽水沖洗;phmb組為清創(chuàng)后性0.1%phmb溶液輕柔沖洗,us+phmb組為清創(chuàng)后采用低頻超聲波結(jié)合0.1%phmb聯(lián)合沖洗。碘伏組為清創(chuàng)后應(yīng)用0.1%稀釋碘伏溶液沖洗。(4)觀察指標(biāo)為術(shù)后動物的體溫、體重、術(shù)后6周時局部創(chuàng)口外觀評分,x線評分,以及病理評分進(jìn)行組間比較。結(jié)果實驗1(1)浮游態(tài)細(xì)菌在不同低頻超聲暴露時間后,細(xì)菌計數(shù)變化不顯著。(2)對于浮游態(tài)細(xì)菌由20%phmb經(jīng)不同倍數(shù)稀釋的溶液作用,細(xì)菌的減少量呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性,于1/200稀釋組(濃度為0.1%),實現(xiàn)了全部殺菌。(3)對于浮游表型的金葡菌,不同稀釋倍數(shù)的PHMB結(jié)合超聲殺菌后的定量檢測發(fā)現(xiàn),殺菌效能仍然隨著濃度的升高而增強(qiáng),但是僅在20%PHMB溶液稀釋2000倍(濃度為0.01%)時就可以將細(xì)菌全部殺滅。(4)孔板對于0.04%PHMB與超聲處理單獨處理后,結(jié)晶紫染色后灰度值都有升高,聯(lián)合處理后更明顯。經(jīng)方差分析,0.04%PHMB與超聲處理之間存在協(xié)同效應(yīng)。實驗2(1)涂板法測定每塊載菌骨含菌量為log10(CFU/塊)為6.9±0.5。(2)A組動物,術(shù)后體溫波動較B組動物更大,而且有3只死亡,而B組動物在4周觀察時間內(nèi)都有存活。AB兩組動物體重變化不大。A組動物中成功形成骨髓炎5只,B組成功形成骨髓炎10只。A組X線表現(xiàn)為髓內(nèi)型,而B組X線表現(xiàn)為局部型。A組動物CRP檢測波動大于B組動物。兩組動物病理學(xué)檢查都成典型骨髓炎表現(xiàn)。細(xì)菌培養(yǎng)A組存活動物7只中2只陰性,5只陽性。B組存活動物10只,均陽性。實驗3所有接種載菌骨動物術(shù)后48小時均存活,局部出現(xiàn)紅腫滲出。NaCl組、PHMB組、PHMB+US組、碘伏組、動物均有1只在第6周實驗終點前死亡,而US組有2只死亡。各組動物術(shù)后體溫變化、體重變化差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。PHMB+US組在局部創(chuàng)面評分、X片表現(xiàn)視覺評分以及病理評分,都優(yōu)于其他各組,而其他各組之間差異不顯著。結(jié)論1、低頻超聲本身對于體外金黃色葡萄球菌的幾乎沒有殺菌作用。2、PHMB可殺滅體外浮游態(tài)與生物膜態(tài)金葡菌。藥物濃度越高,殺菌效果越好。生物膜態(tài)金葡菌對于PHMB具有更強(qiáng)耐藥性。3、無論對于浮游態(tài)細(xì)菌還是生物膜態(tài)細(xì)菌,PHMB與低頻超聲在殺滅細(xì)菌作用上都存在協(xié)同,但生物膜態(tài)細(xì)菌仍然難以完全殺滅。4、采用載菌骨植入法可建立兔局限性骨髓炎模型。該模型具有建模成功率高,全身反應(yīng)輕,死亡率低的優(yōu)點�？梢阅M人類外傷所致的局部局限性骨髓炎。5、單獨應(yīng)用超聲對于早期局限骨感染清創(chuàng)并不能有效控制感染,而超聲聯(lián)合PHMB有利于早期局限性骨感染的控制。
[Abstract]:In recent years , some new instruments and methods , such as high pressure pulse flushing , low pressure pulse flushing , and flow water knife system , have been used in the treatment of various acute wound and chronic infections . The results were as follows : ( 2 ) The rabbits were inoculated with 0 . 1 % phmb solution at the proximal end of right tibia . ( 2 ) The bactericidal efficacy was increased with the increase of concentration , but only 20 % PHMB solution was diluted 2000 times ( the concentration was 0.01 % ) . In group A , there was no significant difference in body weight between group A and group B .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R68

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