本文關(guān)鍵詞： 小鼠 椎間盤退變 動(dòng)物模型 p27 基因敲除 椎間盤退變 p27基因 Sonic Hedgehog信號(hào)通路 椎間盤退變　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一章小鼠椎間盤退變動(dòng)物模型的建立目的建立一種操作簡(jiǎn)單、方便、實(shí)用的小鼠椎間盤退變動(dòng)物模型。方法4周齡SPF級(jí)野生型(Wild Type,WT)小鼠72只,隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組(Con)和懸尾組(Tail Suspension,TS),分別于2周、4周、8周時(shí)間點(diǎn),通過(guò)X光攝片機(jī)行小鼠腰椎正側(cè)位掃描(CR),計(jì)算椎間盤高度指數(shù);HE染色觀察小鼠椎間盤髓核和纖維環(huán)改變情況。Western-blot檢測(cè)椎間盤組織中P27蛋白的表達(dá)。結(jié)果小鼠腰椎X線表明:從4周開(kāi)始,懸尾組小鼠開(kāi)始出現(xiàn)椎間隙變窄,椎體結(jié)構(gòu)不穩(wěn);至8周時(shí)椎間隙進(jìn)一步變窄,并出現(xiàn)脊柱側(cè)凸畸形,椎體邊緣及椎體上下軟骨終板可見(jiàn)不同程度的鈣化,并可見(jiàn)少量的骨贅形成。而正常對(duì)照組僅在8周表現(xiàn)為椎間隙輕度狹窄。統(tǒng)計(jì)學(xué)表明:懸尾組小鼠椎間盤高度指數(shù)(Disk Height Index,DHI)隨著時(shí)間的延長(zhǎng),呈逐漸下降趨勢(shì)。與正常對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HE染色結(jié)果顯示:尾部懸吊組小鼠椎間盤髓核細(xì)胞減少,基質(zhì)中膠原纖維排列紊亂,發(fā)生了嚴(yán)重的髓核和纖維環(huán)退變。而正常對(duì)照組小鼠的椎間盤僅發(fā)生輕度退變,膠原纖維排列尚整齊。Western-blotting檢測(cè)懸吊組小鼠椎間盤組織中P27蛋白的表達(dá)較對(duì)照組明顯增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論采用小鼠尾部懸吊8周的方法,可以有效構(gòu)建小鼠椎間盤退變動(dòng)物模型。該方法具有無(wú)損傷、操作簡(jiǎn)單,穩(wěn)定性和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。第二章p27基因在小鼠椎間盤退變中的作用目的明確P27基因在小鼠椎間盤退變過(guò)程中的作用。方法將4周齡野生型(WT)和p27基因敲除(p27-/-)小鼠,通過(guò)第一部分所建立的小鼠椎間盤退變動(dòng)物模型制作方法,持續(xù)懸吊8周后誘導(dǎo)兩組(TS-WT,TS-p27-/-)小鼠椎間盤發(fā)生退變。分別設(shè)置未懸吊WT(Con-WT)和未懸吊p27-/-小鼠(Con-p2-/-)為對(duì)照組。通過(guò)X光攝片機(jī)拍攝兩組小鼠腰椎正側(cè)位(CR),計(jì)算椎間盤高度指數(shù)(DHI),明確腰椎及椎間盤退變情況;HE染色觀察小鼠椎間盤髓核和纖維環(huán)退變情況。結(jié)果小鼠腰椎X線表明,Con-p27-/-組和Con-WT組小鼠腰椎序列整齊,椎體邊緣無(wú)明顯骨贅形成,椎間隙無(wú)明顯狹窄。而TS-WT則表現(xiàn)為腰椎序列不整,椎體邊緣骨質(zhì)增生明顯,椎間隙變窄,部分小鼠甚至出現(xiàn)腰椎側(cè)彎畸形。椎間盤高度指數(shù)(Disk Height Index,DHI)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明:TS-p27-/-組小鼠DHI高于TS-WT小鼠組,兩組DHI相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HE染色顯示,Con-p27-/-和Con-WT小鼠組椎間盤纖維層次分明,與髓核界線清楚,視野內(nèi)有豐富的空泡細(xì)胞和小的類軟骨樣細(xì)胞,膠原蛋白排列成規(guī)則;TS-27-/-小鼠組纖維環(huán)排列尚整齊,而TS-WT小鼠組椎間盤纖維環(huán)排列嚴(yán)重紊亂,部分發(fā)生撕裂,髓核細(xì)胞減少甚至消失等退變表現(xiàn);Con-p27-/-和Con-WT小鼠組椎間盤組織學(xué)評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);TS-p27-/-組椎間盤組織學(xué)評(píng)分低于TS-WT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論p27基因缺失后可明顯延緩椎間盤的退變,p27基因在椎間盤退變過(guò)程中發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用。第三章p27基因敲除通過(guò)激活Shh信號(hào)通路發(fā)揮椎間盤退變保護(hù)作用目的明確p27基因是否通過(guò)Sonic Hedgehog(Shh)信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控小鼠腰椎間盤退變。方法在實(shí)驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二的基礎(chǔ)上,將實(shí)驗(yàn)二收集的各組小鼠腰椎和椎間盤,采用免疫熒光法檢測(cè)Shh信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá);Western-blotting檢測(cè)椎間盤組織中Shh信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)含量,采用Image圖像分析軟件對(duì)熒光光密度值和蛋白灰度值進(jìn)行定量分析,采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果免疫熒光及Westen-bloting結(jié)果均表明,四組小鼠椎間盤組織中Shh、Smo、Patched及Gli-2蛋白均不同程度的表達(dá),Con-p27--組小鼠椎間盤組織中Shh、Smo、Patched及Gli-2蛋白表達(dá)及含量最高;TS-p27-/-組上述蛋白含量有所降低,但仍高于Con-WT組;TS-WT小鼠組蛋白表達(dá)水平最低,各組間相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);結(jié)論p27基因缺失后,可激活Shh信號(hào)通路,減緩椎間盤退變,對(duì)小鼠椎間盤退變起到保護(hù)作用。
[Abstract]:In the first chapter , we established a simple , convenient and practical animal model of intervertebral disc degeneration in mice . The results showed that there was no significant difference between the two groups ( P0.05 ) . The results showed that there was no significant difference between the two groups ( P0.05 ) . the degeneration of the intervertebral disc is slowed down , and the degeneration of the intervertebral disc of the mouse is protected .

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R681.53

【參考文獻(xiàn)】

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1 Dhungana Hemanta;Xiao-xing Jiang;Zhen-zhou Feng;Zi-xian Chen;Yuan-wu Cao;;Etiology for Degenerative Disc Disease[J];Chinese Medical Sciences Journal;2016年03期

2 Xu-wei LUO;Kang LIU;Zhu CHEN;Ming ZHAO;Xiao-wei HAN;Yi-guang BAI;Gang FENG;;生長(zhǎng)分化因子-5(GDF-5)促進(jìn)人退行性變髓核細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)情況的研究（英文）[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2016年01期

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本文編號(hào)：1491076