發(fā)布時(shí)間：2018-02-02 09:02

  本文關(guān)鍵詞： 癢 TRPV1 組胺依賴性癢 慢性癢 蛇床子素　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景和目的:癢是區(qū)別于痛的不愉快感覺,會(huì)引起機(jī)體搔抓的欲望。癢不僅是臨床各種皮膚病的常見癥狀也是系統(tǒng)性疾病的伴隨癥狀。日常生活中,蚊蟲叮咬、接觸過敏原、服用藥物等均能導(dǎo)致瘙癢的發(fā)生。而瘙癢經(jīng)久不愈,多伴有抑郁、失眠、焦慮等癥狀。可以說,瘙癢做為一種常見的疾病,不僅嚴(yán)重影響人們的日常生活,也嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。但目前瘙癢的機(jī)制還不清楚,臨床也缺乏有效的止癢藥物。TRPV1是瞬時(shí)開放的非選擇性的陽離子通道,能夠被熱(43℃)、弱酸、辣椒素及一些內(nèi)源性的配體激活。TRPV1在疼痛的起始和傳導(dǎo)中起重要作用。但現(xiàn)在越來越多的研究發(fā)現(xiàn):TRPV1在瘙癢中扮演著重要的角色。比如:TRPV1在組胺依賴性癢中起到重要作用。首先,TRPV1與組胺受體在背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元上共表達(dá),大多數(shù)能被組胺激活的神經(jīng)元也能被辣椒素激活;其次,在TRPV1-1-小鼠或應(yīng)用TRPV1阻斷劑時(shí)能明顯抑制組胺依賴性癢;最后,激活DRG組胺H1受體可通過磷脂酶C(PLC)β3打開TRPV1離子通道,使神經(jīng)元興奮,傳導(dǎo)癢覺信號(hào)。但是組胺除了 H1受體外還有一個(gè)重要的癢相關(guān)受體-H4受體。TRPV1在組胺H4受體介導(dǎo)的急性癢中的作用并不清楚,而且TRPV1是否參與慢性癢也不清楚。研究發(fā)現(xiàn)慢性痛與慢性癢的界限在病理?xiàng)l件下是模糊的,慢性癢條件下,在正常情況下會(huì)導(dǎo)致疼痛的有害刺激反而會(huì)引發(fā)更加明顯的瘙癢,但是這種現(xiàn)象是如何產(chǎn)生的并不清楚。在疼痛與瘙癢中都起到重要作用的TRPV1,在有害刺激下,痛感覺向癢感覺轉(zhuǎn)化的過程中扮演了什么樣的角色都是有待研究的問題。中藥蛇床子Cnidium monnieri(L.)Cuss為一年生傘形科植物蛇床的干燥成熟果實(shí),具有溫腎壯陽,祛風(fēng)燥濕和殺蟲止癢的功效。在對(duì)古今中醫(yī)癢相關(guān)方劑進(jìn)行篩選時(shí)發(fā)現(xiàn):中藥蛇床子長期被用于治療多種瘙癢癥,療效顯著。蛇床子的醇提液能有效抑制P物質(zhì)和皮炎模型誘導(dǎo)的搔癢行為。而蛇床子中含量最高的香豆素成分-蛇床子素,對(duì)48/80化合物誘導(dǎo)的急性癢和二硝基氯苯(DNCB)誘導(dǎo)的慢性癢具有抑制作用。這提示我們蛇床子素可能對(duì)組胺依賴性癢有效,但是蛇床子素的止癢機(jī)制是什么并不清楚,作為癢覺信號(hào)通路下游的TRPV1通道是否是蛇床子素止癢的靶點(diǎn)都有待研究。因此,本研究目的主要有以下幾點(diǎn):1.研究TRPV1在組胺H4受體介導(dǎo)的急性癢中的作用。2.研究TRPV1離子通道是否參與慢性瘙癢及在慢性癢形成過程中的功能,探討慢性癢條件下痛刺激-癢行為轉(zhuǎn)換的機(jī)制。3.研究蛇床子素的止癢機(jī)制及TRPV1在其中的功能。實(shí)驗(yàn)方法:第一章的實(shí)驗(yàn)研究中,利用野生型小鼠急性培養(yǎng)的DRG神經(jīng)元,通過鈣成像實(shí)驗(yàn)研究組胺H4激動(dòng)劑immepip對(duì)神經(jīng)元的作用,及G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)、PLC通路、TRPV1離子通道、TRPA1離子通道的阻斷劑對(duì)immepip引起的神經(jīng)元興奮性的影響;通過行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究PLC通路和TRPV1離子通道阻斷劑是否影響immepip介導(dǎo)的搔癢行為。在第二章的實(shí)驗(yàn)研究中,利用AEW(丙酮/乙醚和水)模型模擬慢性瘙癢癥-干皮癥,利用野生型小鼠和TRPV1-/-小鼠研究AEW造模后皮下注射辣椒素的疼痛行為和搔癢行為的變化。利用TRPV1-PLP+/-轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行堿性磷酸酶染色,觀察TRPV1在皮膚及三叉神經(jīng)節(jié)(TG)上的表達(dá)變化;應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和免疫印跡法(WB)檢測小鼠AEW造模后TRPV1在TGs中的mRNA水平和蛋白水平;在鈣成像實(shí)驗(yàn)中,利用Pirt-GCaMP3+/-小鼠研究在培養(yǎng)的TG細(xì)胞和分離得到的整個(gè)TG中,造模側(cè)與對(duì)照側(cè)神經(jīng)元對(duì)辣椒素刺激的敏感性變化。在第三章的實(shí)驗(yàn)研究中,應(yīng)用行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究蛇床子素的止癢效果;應(yīng)用鈣成像實(shí)驗(yàn)研究蛇床子素對(duì)組胺和組胺H1、H4受體激動(dòng)劑HTMT、VUF8430引起的癢覺信號(hào)傳導(dǎo)的影響;應(yīng)用鈣成像和全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究蛇床子素對(duì)TRPV1離子通道活性的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.通過鈣成像實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在外周感覺神經(jīng)元上,組胺H4受體激動(dòng)劑immepip可以興奮DRG神經(jīng)元,且能和組胺、辣椒素激活同一神經(jīng)元。而PLC通路的阻斷劑U73122和TRPV1離子通道的阻斷劑capsazepine/AMG9810能夠抑制immepip對(duì)神經(jīng)元的興奮作用。雖然釕紅能夠阻斷immepip引起的胞外鈣離子內(nèi)流,但是TRPA1的阻斷劑HC-030031并無此作用,這表明TRPV1是組胺H4受體癢覺信號(hào)傳導(dǎo)的下游離子通道。而行為學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了這一點(diǎn):PLC通路的阻斷劑U73122和TRPV1離子通道的阻斷劑AMG9810明顯抑制了immepip引起的搔抓行為。2.利用AEW的造模方法,本研究模擬了慢性瘙癢模型-干皮癥。而在行為學(xué)中還發(fā)現(xiàn)一個(gè)有意思的現(xiàn)象:AEW小鼠造模側(cè)皮下注射辣椒素引起了搔癢行為的增加而疼痛行為不變。也就是說:在慢性癢條件下,辣椒素激活TRPV1使原本的疼痛刺激向癢行為轉(zhuǎn)化。TRPV1-PLAP+/-轉(zhuǎn)基因小鼠AEW造模染色后發(fā)現(xiàn):TRPV1陽性纖維在造模側(cè)皮膚密度增大,TRPV1陽性神經(jīng)元在TG表達(dá)增多。熒光實(shí)時(shí)定量PCR和WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明無論是TRPV1的mRNA水平還是蛋白水平在TG上的表達(dá)都明顯上調(diào)。而鈣成像實(shí)驗(yàn)則進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)AEW造模敏化了 TRPV1離子通道,對(duì)辣椒素刺激更加敏感。3.通過行為實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蛇床子素能夠抑制組胺和組胺受體H1激動(dòng)劑HTMT、組胺H4受體激動(dòng)劑VUF8430誘導(dǎo)的搔癢,但是對(duì)8mM CQ誘導(dǎo)的非組胺依賴性癢無抑制作用。表明蛇床子素的止癢作用主要是針對(duì)組胺依賴性癢。在鈣成像實(shí)驗(yàn)中,蛇床子素對(duì)組胺、HTMT、VUF8430引起的胞外鈣離子內(nèi)流都有抑制作用,表明蛇床子素并不是特異性的作用于組胺某一受體,而有可能是作用于組胺癢覺信號(hào)傳導(dǎo)的下游。鈣成像實(shí)驗(yàn)和全細(xì)胞膜片鉗記錄表明蛇床子素能夠抑制辣椒素引起的鈣離子內(nèi)流和內(nèi)向電流。也就是說蛇床子素可以抑制TRPV1離子通道的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:綜上所述,通過行為學(xué)、鈣成像及相關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和電生理實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):TRPV1在瘙癢中起到重要作用。1.TRPV1和PLC通路參與組胺H4受體介導(dǎo)的急性瘙癢。2.在AEW慢性癢模型中,TRPV1的表達(dá)上調(diào)并敏化,可能是使辣椒素引起的痛刺激向癢感覺轉(zhuǎn)換的原因。3.蛇床子素對(duì)組胺依賴性癢具有止癢作用,主要是通過調(diào)控TRPV1離子通道的活性實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : The itch is not only a common disease of various skin diseases , but also has an important role in the initiation and conduction of pain . In the second chapter , the effects of immepip on neurons were studied by means of calcium imaging . the expression up - regulation and sensitization of trpv1 may be the reason for the pain stimulus caused by capsaicin to the itch sensation conversion . 3 . osthol has an itch - relieving effect on histamine - dependent itching , mainly by regulating the activity of the TRL ion channel .

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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