本文關(guān)鍵詞： 缺血性腦卒中 芬戈莫德 S1PR調(diào)節(jié)劑 視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病 神經(jīng)干細(xì)胞 CFHR1　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:神經(jīng)系統(tǒng)炎癥的發(fā)生存在兩種激活模式,在經(jīng)典的神經(jīng)免疫疾病中,獲得性免疫反應(yīng)首先在外周被激活,然后靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抗原,引起疾病的發(fā)生,這是神經(jīng)系統(tǒng)免疫反應(yīng)激活的經(jīng)典途徑。另一種模式是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)首先受到破壞,然后再激活免疫系統(tǒng)的反應(yīng)。本研究旨在探討經(jīng)典的神經(jīng)免疫系統(tǒng)疾病以及腦血管病中,腦內(nèi)免疫炎癥的發(fā)生機(jī)制以及相應(yīng)的干預(yù)策略。Fingolimod是一種鞘氨醇1-磷酸受體(sphingosine 1-phosphate receptor,S1PR)調(diào)節(jié)劑,是第一個美國FDA批準(zhǔn)用于臨床治療復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化的口服藥物。前臨床研究顯示,fingolimod可以減輕缺血性腦卒中動物模型的腦損傷;在一個概念性臨床研究中,fingolimod用于治療急性缺血性腦卒中患者的安全性和有效性得到了初步證實。然而,在將S1PR調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步推向臨床前,有一些問題需要進(jìn)一步明確,這些問題包括:(1)如何避免S1PR調(diào)控的心臟副作用;(2)S1PR調(diào)控的非淋巴細(xì)胞依賴的機(jī)制;(3)S1PR調(diào)節(jié)劑用于減輕腦缺血急性損傷的時間窗尚未明確,而且不同類型的腦卒中對于S1PR調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)性也不明確。RP101075是第二代的S1PR調(diào)節(jié)劑,可以選擇性激動S1PR1。RP101075半衰期短,可以很快分布至腦內(nèi),心臟副作用明顯減輕。本研究將研究RP101075對于缺血性腦卒中的作用,并通過明確其治療時間窗,應(yīng)用多種不同的動物模型,來提高本研究的轉(zhuǎn)化價值。本研究將進(jìn)一步明確S1PR1調(diào)節(jié)對于缺血性腦卒中的治療機(jī)制。第二部分:視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病是一種主要累及脊髓和視神經(jīng)的炎性脫髓鞘疾病,其病程較多發(fā)性硬化進(jìn)展更快,致殘率更高,在亞洲的發(fā)病率高于歐美,主要發(fā)病人群是青年女性。視神經(jīng)脊髓炎最主要的病理特點是補體成分和Ig G在病灶部位沉積,造成星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷,繼而發(fā)生脫髓鞘。補體系統(tǒng)的激活在視神經(jīng)脊髓炎的病理改變中起了重要作用。干細(xì)胞具有不斷自我更新以及分化的能力,使得干細(xì)胞移植成為再生醫(yī)學(xué)中治療一些嚴(yán)重疾病的重要選擇。然而病灶部位的炎癥微環(huán)境是阻礙干細(xì)胞移植修復(fù)損傷組織的關(guān)鍵因素。在本研究中我們試圖探索神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病修復(fù)治療的策略。方法:在本研究中我們應(yīng)用了多種不同的小鼠腦缺血動物模型,包括阻斷不同時間(30 min,60 min,90 min)的大腦中動脈阻塞(MCAO)模型,以及光化學(xué)法皮層梗塞模型。RP101075通過灌胃給予小鼠,劑量0.6mg/kg,每日一次。梗死灶大小通過2,3,5—氯化三苯基四氮唑(TTC)染色或者核磁來計算,神經(jīng)功能缺損評分通過m NSS評分評價。首先我們檢測了不同劑量的RP101075以及不同的給藥頻率對于60min MCAO腦梗死灶大小以及神經(jīng)功能缺損評分的影響,然后明確了在三次給藥后治療效果是否可以持續(xù)到第7天。我們通過延遲開始給藥時間至不同的時間點,來明確RP101075對于急性腦缺血損傷的治療時間窗。通過觀測RP101075對于不同梗死類型小鼠的效果,我們來評價不同梗死類型對于S1PR1調(diào)節(jié)的反應(yīng)性。對于機(jī)制研究,首先我們通過評價Rag2-/-gc-/-小鼠腦缺血后對于RP101075治療的反應(yīng)來明確S1PR調(diào)節(jié)對于腦缺血的治療效果是否依賴于對外周淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)。通過質(zhì)譜-液相色譜儀檢測了給藥后藥物在腦內(nèi)和外周血的分布。流式細(xì)胞術(shù)用來檢測外周血和腦內(nèi)的淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)用來檢測不同腦區(qū)的炎癥因子濃度來明確腦內(nèi)的炎癥水平。Western blot用于檢測腦內(nèi)滲出的血漿蛋白纖維蛋白原的量來評價血腦屏障破壞程度。進(jìn)一步我們通過免疫組化的方法分析了腦內(nèi)微血管中纖維素和血小板的沉積,以及微血管結(jié)構(gòu)收縮的情況來明確RP101075的作用機(jī)制。在第二部分研究中:實驗性視神經(jīng)脊髓炎小鼠動物模型的建立,我們通過給小鼠腦內(nèi)立體定位注射純化的抗水通道蛋白4(AQP4)抗體強(qiáng)陽性的視神經(jīng)脊髓炎(NMO)患者的血清Ig G(NMO-Ig G)和人補體(h C),在小鼠腦內(nèi)模擬NMO樣病灶。分離胎鼠腦皮層獲得神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs),然后用補體因子H相關(guān)蛋白1(CFHR1)修飾NSCs(CFHR1-NSCs)以GFP空載體修飾的NSC為對照(GFP-NSCs)。將CFHR1-NSCs和GFP-NSCs分別移植入小鼠腦內(nèi),在第7天通過7T MRI(T2WI和T1WI+Gd-DTPA)以及免疫熒光檢測小鼠腦內(nèi)病灶的大小、滲出以及炎癥細(xì)胞的侵潤和膜攻擊復(fù)合物(MAC)的沉積。在體外,我們用分離的原代小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞來進(jìn)一步驗證CFHR1-NSC的治療機(jī)制,向培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞以及誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化而來的星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中加入NMO-Ig G和h C在體外模擬NMO病理環(huán)境,然后用含有CFHR1的培養(yǎng)基替代原培養(yǎng)基。通過檢測LDH以及免疫熒光觀察細(xì)胞的破壞程度和形態(tài)的改變。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn),RP101075可以減小C57BL/6小鼠腦缺血后梗死灶的大小并改善神經(jīng)功能缺損評分,其治療效果具有劑量依賴性而不依賴于給藥頻率。RP101075在缺血后12小時內(nèi)給藥可以抑制梗死灶的擴(kuò)大,而在24小時給藥可以減輕腦水腫的發(fā)展并改善神經(jīng)功能評分。RP101075對于不同梗死灶大小和梗死位置的小鼠具有相似的治療效果。RP101075在給藥后12小時可以明顯的富集于腦內(nèi),RP101075可以抑制淋巴細(xì)胞向腦內(nèi)的浸潤和腦內(nèi)局部的炎癥反應(yīng),但其治療效果并不完全依賴于對外周免疫的調(diào)控。RP101075增加了血腦屏障的完整性以及腦內(nèi)微血管結(jié)構(gòu)的通暢,保護(hù)了腦缺血后微循環(huán)的功能。在第二部分中:我們構(gòu)建的CFHR1-NSCs可以穩(wěn)定合成并分泌CFHR1,而其增殖和分化能力與神經(jīng)干細(xì)胞相比并不受影響,而且由CFHR1-NSCs分化而來的星形膠質(zhì)細(xì)胞仍然可以穩(wěn)定分泌CFHR1。與模型對照組相比,GFP-NSCs并不能抑制MRI上病灶的擴(kuò)大和對比劑的滲出,AQP4、GFAP和髓鞘的脫失以及炎癥細(xì)胞的侵潤、激活,和MAC的沉積,而移植CFHR1-NSCs的小鼠腦內(nèi)的病灶明顯比模型組和GFP-NSCs移植組小,對比劑滲出減少,炎癥細(xì)胞的侵潤和激活以及MAC的形成明顯受抑制,保護(hù)了星形膠質(zhì)細(xì)胞和髓鞘,移植的CFHR1-NSCs向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化以修復(fù)病灶,并保護(hù)了內(nèi)源性星形膠質(zhì)細(xì)胞免受NM-Ig G和h C的攻擊。體外實驗表明:原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,以及NSCs和GFP-NSCs分化而來的星形膠質(zhì)細(xì)胞均可被NMO-Ig G和h C破壞,而CFHR1-NSCs分化的星形膠質(zhì)細(xì)胞不受影響。當(dāng)我們給CFHR1-NSCs分化的星形膠質(zhì)細(xì)胞更換新的培養(yǎng)基后,NMO-Ig G和h C可對其造成破壞,此外,CFHR1-NSCs的培養(yǎng)上清可以保護(hù)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞不被NMO-Ig G和h C破壞,驗證了體內(nèi)實驗的結(jié)果。結(jié)論:RP101075,做為新一代的S1PR調(diào)節(jié)劑,具有優(yōu)良的的藥代動力學(xué)特點和安全性,可以減少淋巴細(xì)胞向腦內(nèi)浸潤并保護(hù)腦內(nèi)微循環(huán)的完整性和功能。S1PR1調(diào)節(jié)劑可作為缺血性腦卒中安全的潛在治療方式。干細(xì)胞具有向病灶部位趨化的特性,其在修復(fù)損傷的同時,更是一個理想的載體。我們通過補體抑制基因修飾神經(jīng)干細(xì)胞使其可以在病灶部位合成并分泌CFHR1,從而特異性地調(diào)控局部的炎癥微環(huán)境,促進(jìn)外源性及內(nèi)源性的神經(jīng)修復(fù)。為促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病細(xì)胞替代療法的有效性提出了新的方案和理念。
[Abstract]:Objective : To study the effect of S1PR regulator on ischemic stroke . In the second part , we evaluated the effects of RP1010 - 75 on the size of cerebral blood and peripheral blood . We evaluated the effects of RP1010 - 75 on brain and peripheral blood by observing the effects of different doses of RP1010 75 on cerebral ischemia - reperfusion . In vitro experiments have shown that the astrocytes , and the astrocytes of CFHR1 - can be destroyed by NMO - Ig G and h C . The results of experiments in vivo have been verified .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R741

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃其林,蔡文琴,張可成;培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性膠質(zhì)化的研究[J];中華實驗外科雜志;2000年02期

2 項紅兵,田玉科;星形膠質(zhì)細(xì)胞與疼痛敏化調(diào)控[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2003年09期

3 劉慧,王小軍,胡榮,楊忠,蔡文琴;星形膠質(zhì)細(xì)胞[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2004年01期

4 張敬軍;;星形膠質(zhì)細(xì)胞的研究[J];中國藥理學(xué)通報;2006年07期

5 陳彬;劉寬;王偉;;成年大鼠神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子表達(dá)的差異研究[J];卒中與神經(jīng)疾病;2007年05期

6 沈維高;何欣;王振江;;星形膠質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)功能及其與疾病的關(guān)系研究進(jìn)展[J];北華大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年06期

7 ;英國科學(xué)家確定星形膠質(zhì)細(xì)胞新功能[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2010年27期

8 靳哲;趙忠新;;星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇發(fā)病中的作用研究[J];世界臨床藥物;2012年01期

9 李軍杰,張致身;短暫性腦缺血發(fā)作后海馬區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1998年04期

10 解旭東,田國紅;星形膠質(zhì)細(xì)胞與癲癇[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;1999年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉慶瑩;趙珠峰;朱長庚;;星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇復(fù)發(fā)中的作用[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

2 唐愛輝;王同飛;王世強(qiáng);;星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣活動:腦細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中的第二興奮系統(tǒng)?[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

3 池美珠;陳超;錢燕;李劍敏;吳步猛;;產(chǎn)前重復(fù)激素治療對星形膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育的影響[A];浙江省圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

4 魏爾清;;半胱氨酰白三烯受體對星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

5 吳建云;王鮮忠;王劍;諶劍波;范光麗;張家驊;;大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 趙玉武;程曉娟;;星形膠質(zhì)細(xì)胞與腦水腫的形成[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國神經(jīng)免疫大會2013論文匯編[C];2013年

7 董其平;柴真;;谷氨酸對培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的鈣活動的影響[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會暨中國生理學(xué)會第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2009年

8 曾俊;李康生;;柯薩奇病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞因子變化研究[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2010年

9 鮑歡;徐曉云;顧曉波;徐霞紅;胡暉;;缺氧后水通道蛋白4在體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)變化的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

10 熊加祥;白云;宋敏;王艷艷;楊曉亞;;星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)免疫分子維持大腦免疫穩(wěn)態(tài)[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 胡德榮;星形膠質(zhì)細(xì)胞由“天使”變“魔鬼”原因找到[N];健康報;2012年

2 記者 劉海英;星形膠質(zhì)細(xì)胞可調(diào)節(jié)呼吸強(qiáng)度[N];科技日報;2010年

3 劉霞;腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞在實驗室培育成功[N];科技日報;2011年

4 汪敏華;大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞有兩種新功能[N];解放日報;2003年

5 吳一福;黃芪可調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞“時間模式”[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 胡德榮;“抑制蛋白”可控制神經(jīng)干細(xì)胞提前分化[N];健康報;2007年

7 孫國根　白毅;靈長類腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2011年

8 孫國根;阻礙卒中后神經(jīng)干細(xì)胞再生的“元兇”被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2013年

9 ;我國科學(xué)家成功地在體外培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

10 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 史凱斌;神經(jīng)系統(tǒng)疾病免疫干預(yù)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年

2 曾招;離子通道TRPM7調(diào)節(jié)細(xì)胞生理的分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

3 黃維一;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌因子對缺血性腦卒中后星形膠質(zhì)細(xì)胞活性及功能的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

4 楊俊華;星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的ATP促進(jìn)丘腦中的突觸刪除[D];浙江大學(xué);2015年

5 鄧雅婷;龍膽苦苷鎮(zhèn)痛與抗抑郁的中樞作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 李新;星形膠質(zhì)細(xì)胞NDRG2在七氟烷預(yù)處理神經(jīng)保護(hù)作用中的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 鐘志宏;亞鐵離子對星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷作用及香芹酚在實驗性腦出血中的神經(jīng)保護(hù)作用[D];上海交通大學(xué);2014年

8 洪洋;孕酮對Aβ所致星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 凌云志;帕瑞昔布減輕過氧化氫誘導(dǎo)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 徐進(jìn);腦出血后星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4內(nèi)化及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 龔佩佩;磷酸化MSK1在星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥活化過程中的作用的研究[D];南通大學(xué);2013年

2 何潔玉;糖皮質(zhì)激素對星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的調(diào)控機(jī)制[D];西南大學(xué);2015年

3 張麗麗;脂肪基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞過程中線粒體凋亡與自噬的關(guān)系[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 燕茹;高同型半胱氨酸血癥致ApoE~(-/-)小鼠腦血管、星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元損傷作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

5 米鵬霞;P物質(zhì)對星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊志奇;小鼠皮層內(nèi)移植膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及功能重建研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 陳雅南;敲除星形膠質(zhì)細(xì)胞的dicer對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響[D];杭州師范大學(xué);2015年

8 馬輝;星形膠質(zhì)細(xì)胞上酸敏感離子通道1a在顳葉癲癇發(fā)生中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 周亞蘭;IFN-γ介導(dǎo)T細(xì)胞參與炎性痛慢性化機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 鄧子輝;瘦素抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接蛋白-43表達(dá)改善腦缺血再灌注損傷的機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號：1467513