本文關(guān)鍵詞：平喘顆粒通過(guò)NOTCH信號(hào)通路調(diào)節(jié)哮喘大鼠樹突細(xì)胞免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:觀察平喘顆粒對(duì)哮喘大鼠樹突細(xì)胞免疫功能的影響,探討平喘顆粒治療哮喘的機(jī)制方法:1.40只Wistar大鼠被隨機(jī)分為空白組、模型組、地塞米松組、平喘顆粒組。除空白組外,其余各組用卵蛋白建立哮喘大鼠模型。地塞米松組給予地塞米松(0.45mg/kg)灌胃,平喘顆粒組大鼠予平喘顆粒(5.4g/kg)灌胃,空白組、模型組給予生理鹽水(5ml/kg)灌胃。觀察平喘顆粒對(duì)哮喘大鼠肺組織、肺DCs遷移的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)哮喘大鼠肺 DCs CD80、CD86、MHCII表達(dá)變化。Realtime-PCR 檢測(cè)肺 DCs Notch1、Jag-1 mRNA 的表達(dá)水平。Western blot 法檢測(cè)肺 DCs EGR1、PKC蛋白表達(dá)水平。初步探討平喘顆粒對(duì)哮喘大鼠DCs免疫功能調(diào)節(jié)作用。2.無(wú)菌獲得大鼠骨髓樹突細(xì)胞,加入rmGM-CSF(10ng/ml)、rmlL-4(10ng/ml)聯(lián)合培養(yǎng)7天,獲得DCs。將獲得的DCs分別給予不同濃度LPS、DAPT刺激,確定最佳LPS、DAPT濃度。將獲得的DCs隨機(jī)分為空白組、LPS組、DAPT+LPS組、平喘顆粒+LPS組、空白血清+LPS組。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs CD80、CD86、MHCII表達(dá)變化。RealtimePCR檢測(cè) DCs Notchl、Jag-1 mRNA 的表達(dá)水平。Western blot 法檢測(cè) DCs EGR1、PKC蛋白表達(dá)水平。初步探討平喘顆粒對(duì)DCs免疫功能調(diào)節(jié)作用。探討平喘顆粒在LPS誘導(dǎo)DCs成熟過(guò)程中對(duì)Notch信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果:1.平喘顆�？梢越档拖笫蠓谓M織炎性浸潤(rùn),改善肺臟病理狀態(tài),降低DCs向肺組織的遷移程度。每視野肺組織平均DCs浸潤(rùn)個(gè)數(shù)為32.00±6.16個(gè),與模型組比較有明顯差異(P0.05),與地塞米松組比較無(wú)明顯差別(P0.05)。2.平喘顆�？梢越档拖笫蠓蜠Cs表型分子的表達(dá),CD80、CD86、MHCII的表達(dá)率分別為 62.04±4.57%、54.66±4.40%和57.64±4.26%。與模型組比較有顯著差異(P0.05)。3.平喘顆�？梢越档拖笫蠓蜠Cs Notch1、Jag-1mRNA表達(dá),與模型組比較有顯著差異(P0.05)。4.平喘顆粒能降低PKC蛋白表達(dá),促進(jìn)EGR1蛋白表達(dá),兩者表達(dá)量與模型組比價(jià)有顯著差異(P0.05)。5.1.5μg/mlLPS刺激12h,是DCs成熟的最佳刺激條件,與2.5μg/ml LPS在刺激DCs成熟度和細(xì)胞抑制率方面沒(méi)有差異(P0.05)。6.DAPT的最佳抑制濃度是20umol/L,與其他濃度比較有較顯著差異(P0.05)。7.平喘顆粒血清能降低LPS誘導(dǎo)的DCs CD80、CD86、MHCII表達(dá),陽(yáng)性率分別為 62.26±4.44%、67.69±5.33%和 63.77±4.58%,與 LPS 組比較有顯著差異(P0.05)。8.平喘顆粒血清能降低LPS誘導(dǎo)的DCsNotch1、Jag-1mRNA表達(dá),與LPS組比較有顯著差異(P0.05)。9.平喘顆粒血清能降低LPS誘導(dǎo)的PKC蛋白表達(dá),減輕LPS對(duì)EGR1蛋白表達(dá)的抑制,兩種蛋白在表達(dá)程度與LPS組比較有顯著差異(P0.05)。結(jié)論:1.平喘顆粒能改善哮喘大鼠肺組織病理改變程度。2.平喘顆粒能抑制哮喘發(fā)病中DCs成熟。3.平喘顆粒能降低哮喘發(fā)病中DCs Notch1、Jag-1mRNA表達(dá)。4.平喘顆粒通過(guò)抑制DCs Notch1 mRNA表達(dá),調(diào)節(jié)哮喘大鼠DCs免疫功能。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of Pingchuan granule on the immune function of dendritic cells in asthmatic rats and to explore the mechanism of Pingchuan granule in the treatment of asthma. One hundred and forty Wistar rats were randomly divided into blank group and model group. Dexamethasone group, Pingchuan granule group. With the exception of blank group, the other groups were used to establish asthmatic rat model with ovalbumin. The dexamethasone group was given dexamethasone 0.45 mg / kg intragastrically. The rats in the Pingchuan granule group were given 5. 4 g / kg Pingchuan granule by stomach, while in the blank group, the model group were given 5 ml / kg normal saline. The lung tissue of asthmatic rats was observed by observing the effect of Pingchuan granule on the lung tissue of asthmatic rats. Effect of lung DCs migration. Lung DCs CD80 CD86 was detected by flow cytometry in asthmatic rats. The changes of MHCII expression. Realtime-PCR were used to detect lung DCs Notch1. The expression level of Jag-1 mRNA. Western blot method was used to detect DCs EGR1 in lung. Expression level of PKC protein. To investigate the effect of Pingchuan granule on the immune function of DCs in asthmatic rats. 2. To obtain rat bone marrow dendritic cells from aseptic rats and add rmGM-CSF10 ng / ml). After 7 days of co-culture of rmlL-4ng / ml, the obtained DCs was stimulated with different concentrations of LPS-DAPT to determine the best LPS. The concentration of DAPT. The obtained DCs was randomly divided into two groups: the control group, the control group, the control group, the control group, the control group, the control group, the control group and the LPS group. In blank serum LPS group, DCs Notchl was detected by flow cytometry. The expression level of Jag-1 mRNA. Western blot method was used to detect DCs EGR1. The effect of Pingchuan granule on the immune function of DCs and on the signal pathway of Notch in the process of DCs maturation induced by LPS were studied. 1. Pingchuan granule can reduce the inflammatory infiltration of lung tissue in asthmatic rats. The average number of DCs infiltration per field of lung was 32.00 鹵6.16. Compared with the model group, there was a significant difference between the model group and the dexamethasone group. Compared with the dexamethasone group, there was no significant difference between the two groups. Pingchuan granule could reduce the expression of DCs molecule in the lung of asthmatic rats. The expression rate of CD86MHCII was 62.04 鹵4.57% respectively. 54.66 鹵4.40% and 57.64 鹵4.26.The difference was significant compared with the model group. Pingchuan granule could reduce the DCs Notch1 in the lung of asthmatic rats. Compared with the model group, the expression of Jag-1mRNA was significantly different from that of the model group. Pingchuan granule could decrease the expression of PKC protein and promote the expression of EGR1 protein. There was a significant difference between the two groups and the model group. P0.05, 5.1.5 渭 g / ml LPS was the best stimulation condition for DCs maturation for 12 h. There was no difference between 2.5 渭 g / ml LPS and 2.5 渭 g / ml LPS in stimulating DCs maturity and cell inhibition rate. The optimal inhibitory concentration of DAPT was 20umol / L. Compared with other concentrations, the serum of Pingchuan granule could decrease the expression of DCs CD80, CD86 and MHCII induced by LPS. The positive rates were 62.26 鹵4.44 and 67.69 鹵5.33% and 63.77 鹵4.58%, respectively. Compared with LPS group, the serum of Pingchuan granule could decrease the expression of LPS induced DCsNotch1 Jag-1 mRNA. Compared with LPS group, the serum of Pingchuan granule could decrease the expression of PKC protein induced by LPS and reduce the inhibition of EGR1 protein expression by LPS. There was significant difference in the expression of the two proteins between the LPS group and the LPS group (P0.05). Conclusion 1. Pingchuan granule can improve the pathological changes of lung tissue in asthmatic rats. 2.Pingchuan granule can inhibit DCs maturation. 3. Pingchuan granule can reduce DCs in asthma. Notch1. Jag-1mRNA expression. 4. Pingchuan granule regulates the DCs immune function of asthmatic rats by inhibiting the expression of DCs Notch1 mRNA.
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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