本文關(guān)鍵詞：結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性及常染色體顯性遺傳性視神經(jīng)萎縮的臨床與基礎(chǔ)研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:對結(jié)晶樣視網(wǎng)膜變性(Bietticrystallinedystrophy,BCD)的臨床表現(xiàn)進行總結(jié)分析,通過分子遺傳學(xué)研究確定致病突變,并探討表型與基因型的聯(lián)系。對部分患者進行血漿脂代謝組分析,試圖探索BCD患者特異的脂代謝異常。方法:納入1998年—2017年3月在北京協(xié)和醫(yī)院眼科遺傳門診就診的BCD患者及家系。1.臨床研究:詳細詢問患者病史,家族史并繪制家系圖。行一般眼科檢查(視力,屈光度,眼前節(jié)及眼底等),共聚焦顯微鏡檢查角膜緣,眼底彩色照相,光學(xué)相干斷層掃描(optical coherence tomography,OCT),眼底自發(fā)熒光成像,視野(visualfield,VF)以及視網(wǎng)膜電流圖(electroretinogram,ERG)檢查。2.分子遺傳學(xué)研究:采集患者及家族成員靜脈血,提取基因組DNA。對先證者CYP4V2基因的11個外顯子及外顯子-內(nèi)含子交界處進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴增及直接測序。直接測序未發(fā)現(xiàn)突變者將行多重連接依賴探針擴增(multiplex ligation-dependent probe amplication,MLPA)檢測。表現(xiàn)不典型的 BCD患者將進行二代測序。3.脂質(zhì)組學(xué)分析:采集不同年齡組的BCD患者及無親緣關(guān)系正常對照的血漿,采用超高效液相色譜-質(zhì)譜法進行非靶向脂代謝組分析。結(jié)果:共納入來自139個家系共168名BCD患者。139名患者(先證者)中,男性65例,女性74名,年齡17～75歲。發(fā)現(xiàn)有近親結(jié)婚史的家系11個(8.3%),假顯性遺傳14個(10.6%)及假X連鎖遺傳家系2個(1.5%)。1.臨床表現(xiàn):BCD患者中位發(fā)病年齡27歲。62.1%以夜盲為首發(fā)癥狀,19%以視力下降為首發(fā)癥狀,16.0%主訴視力下降伴夜盲為首發(fā)癥狀,3例患者無自覺癥狀(2%),1例患者主訴眼前黑影飄動。BCD患者最佳矯正視力介于LP～1.5。40.4%合并輕度近視,35.1%合并中度近視,15.8%合并高度近視,約一半的患者合并散光。17.8%的患者在裂隙燈下觀察到角膜緣結(jié)晶顆粒。配合了角膜緣共聚焦顯微鏡檢查的16例BCD患者(其中包括10例在裂隙燈下未觀察到結(jié)晶的患者,及6例眼底偶見或未見結(jié)晶顆粒的患者)均觀察到結(jié)晶顆粒。結(jié)晶顆粒位于角膜上皮層及淺基質(zhì)層,結(jié)晶形態(tài)有針尖樣,桿狀或點狀。BCD患者的眼底表現(xiàn)為數(shù)量不等的結(jié)晶顆粒沉積于視網(wǎng)膜,位置可以集中于后極部或散在分布,視網(wǎng)膜色素上皮層(retinal pigment epithelium,RPE)層及脈絡(luò)膜毛細血管層不同程度萎縮,伴不規(guī)則色素團塊沉積。共14例患者合并眼底并發(fā)癥(9.5%),其中8例為黃斑區(qū)脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)(57.1%),4 例為黃斑裂孔(macular hole,MH)網(wǎng)脫(28.6%)。OCT表現(xiàn)為橢圓體帶不連續(xù)或消失,RPE萎縮,透見脈絡(luò)膜大血管及鞏膜信號,平均黃斑中心凹厚度116.6μm。依據(jù)疾病進展模式將132例BCD患者(先證者)分為中央型(24例,占18.2%),周圍型(87例,占66.9%)2個類型。21例患者因處于疾病晚期而無法分型(占15.9%)。中央型BCD以后極部視網(wǎng)膜受累為主,逐漸累及周邊部視網(wǎng)膜。周圍型BCD周邊視網(wǎng)膜首先受累,逐漸發(fā)展累及后極部視網(wǎng)膜,進展過程類似于視網(wǎng)膜色素變性。兩者在首發(fā)癥狀,平均視力,合并眼底并發(fā)癥的風(fēng)險,VF缺損類型及視網(wǎng)膜總體功能方面存在顯著差異(P0.001)。2.分子遺傳學(xué)研究:一代測序聯(lián)合MLPA共確定了 96.4%患者的CYP4V2致病突變,IVS6-8del17bp/insGC是最常見的突變等位基因(61.7%)。確定CYP4V2致病突變共33個,其中51.5%為新發(fā)突變。尚未發(fā)現(xiàn)不同突變與表型的相關(guān)性。二代測序發(fā)現(xiàn)2例多基因共同作用的CYP4V2相關(guān)性視網(wǎng)膜變性。此外,還報道了 1例合并手指異常的BCD患者,為IVS6-8de117bp/insGC和c.A761G復(fù)合雜合突變。3.血漿脂質(zhì)組學(xué)分析:初步分析發(fā)現(xiàn)有10余種脂類化合物在BCD患者血漿中較正常對照明顯升高,這些脂類化合物主要屬于�；视秃陀坞x脂肪酸。結(jié)論:BCD患者具有較特異的眼部表現(xiàn),但輕重、形態(tài)各有差異。眼底并發(fā)癥在BCD患者中并不少見。新的分型方法可以較好地解釋臨床表型及判斷預(yù)后。共聚焦顯微鏡有助于BCD的診斷。一代測序可以確定絕大多數(shù)BCD患者的致病突變。中國BCD患者中也存在CYP4V2基因大片段改變的現(xiàn)象。對于表型不典型的BCD患者,采用二代測序的方法有助于發(fā)現(xiàn)潛在的多基因缺陷。CYP4V2等位基因突變頻率在中國人群中較高,應(yīng)建議BCD患者的配偶進行CYP4V2基因篩查。BCD患者血漿脂代謝組研究為進一步探究BCD發(fā)病機制,診斷與治療提供了新的線索。目的:常染色體顯性遺傳性視神經(jīng)萎縮(ADOA)是遺傳性視神經(jīng)萎縮最常見的類型之一。大部分ADOA是由OPA1基因突變導(dǎo)致的。本研究的目的在于分析一組中國ADOA家系的臨床特征及基因突變情況。方法:對來自8個ADOA家系共17名患者進行了詳細的臨床評估。從患者外周血中提取基因組DNA。對7個典型ADOA家系進行OPA1基因全部外顯子及外顯子/內(nèi)含子交界處進行Sanger測序。對1個表型不典型的ADOA家系進行外顯子捕獲聯(lián)合二代測序。RT-PCR用于檢測剪切突變mRNA的改變。結(jié)果:所有17名患者均表現(xiàn)為視力低下及視盤蒼白,然而他們臨床表型的輕重程度卻各有差異。其中2名患者合并聽力下降。本研究共確定6個OPA1新發(fā)突變及 2 個已知突變,包括 4 個錯義突變(c.T2235G,c.T2340G,c.T1468C and c.A1 567G),2 個剪切突變(c.2984-1_2986del and c.2983+5GA),1 個小片段缺失(c.2960_2968delGCGTTCAAC)以及 1 個小片段插入突變(c.3009_3010insA)。RT-PCR 結(jié)果顯示 c.2984-1_2986del 將導(dǎo)致 mRNA 堿基缺失(r.2819_2824del)。結(jié)論:17名ADOA患者臨床表型差異較大,其中2名患者合并聽力下降。共確定6個OPA1新發(fā)突變及2個已知突變。二代測序有助于確診具有不典型表型的ADOA患者。
[Abstract]:Objective : To investigate the clinical manifestation of crystalline retinal degeneration ( BCD ) , and to determine the relationship between phenotype and genotype by molecular genetics . The results showed that the crystalline particles were located in the posterior polar part or in the superficial stroma . The results showed that the crystalline particles were not continuous or disappeared . All 17 patients showed poor vision and paleness , but the severity of their clinical phenotype was different . The results showed that there were six new mutations and two known mutations , including four missense mutations ( c.T2235G , c.T2340 , c.T1468C and c.A1 567g ) , two shear mutations ( c.2984 - 1 _ 2986del and c.2983 + 5GA ) , one minor fragment deletion ( c.2960 _ 2968delGCGTTCAAC ) , and one small fragment insertion mutation ( c.3009 _ 3010insA ) . Conclusion : There are six new mutations in the OPA1 and two known mutations . Second - generation sequencing can help diagnose ADOA patients with atypical phenotype .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R774.63

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