本文關鍵詞：趨化因子受體CCR4在非小細胞肺癌的表達、作用及其機制的研究　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 非小細胞肺癌 CCR4 調節(jié)性T細胞 TGF-? NK細胞

【摘要】：肺癌是全球和我國死亡率最高的惡性腫瘤,最新數(shù)據(jù)顯示,我國每年新發(fā)病65.3萬例,死亡率高達45.57/100,000。目前針對肺癌主要治療方案是以手術、放療、化療和分子靶向治療為基礎的綜合治療。雖然近年來惡性腫瘤的治療取得了很大的進步,但由于肺癌發(fā)病率高、治療效果有限、去醫(yī)院看病時已是中晚期肺癌患者,而且5年生存率非常低,往往不到20%。隨著免疫學和腫瘤學的研究,宿主的免疫系統(tǒng)功能緊密相關與腫瘤的發(fā)生和進展,即使我們人體擁有免疫監(jiān)視系統(tǒng),但是仍然不能阻止惡性腫瘤的發(fā)病,癌細胞可通過某些機制躲過機體的免疫監(jiān)視,在機體內生長、轉移,給社會和家庭產生不良后果。趨化因子是一類小分子蛋白細胞因子家族成員中的一員,分子量大小為7-12k Da,具有能夠誘導相關白細胞定向趨化移動的功能。大量研究證實,趨化因子受體CCR4在各種腫瘤如ATLL、乳腺癌、胃癌、頭頸部癌中呈高表達,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中承擔著重要角色。目前關于CCR4與非小細胞肺癌關系的報道較少。主要研究方法:1.利用免疫組織化學法分析78例非小細胞肺癌患者的腫瘤組織和癌旁組織中CCR4的表達情況,綜合分析NSCLC患者臨床病例資料,探尋CCR4表達與非小細胞肺癌(NSCLC)臨床病理特征之間的關系,運用流式細胞術和ELISA分析CCR4表達與非小細胞肺癌患者全身免疫狀況和腫瘤組織免疫微環(huán)境的關系,初步探討CCR4作為NSCLC預后標志和治療靶點的可能性。2.利用ELISA和Realtime-PCR法檢測腫瘤組織趨化因子CCL17和CCL22的表達,Transwell細胞趨化實驗分析CCR4對腫瘤組織中Treg細胞的趨化作用,流式細胞術檢測腫瘤組織培養(yǎng)上清誘導CD4+CD25-T細胞轉化為CD4+CD25+調節(jié)性T細胞的能力,并探究NSCLC患者調節(jié)性T細胞對自身效應性T細胞增殖的抑制作用及其調節(jié)機制。3.采用流式細胞術檢測NSCLC病人腫瘤組織和癌旁組織中NK細胞表面表達的活化型受體(NKG2D、NKp30、NKp46)和抑制型受體(NKG2A)的受體表達譜情況,分析腫瘤組織NK細胞與CCR4表達和TGF-?1濃度的相關性,觀察腫瘤組織培養(yǎng)上清是否影響NK細胞表型受體NKG2D的表達,流式細胞術檢測CD69+NK細胞的表達以探究CD4+CD25+T細胞對NK細胞的活化調控及其機制,流式細胞術檢測CD107?+NK細胞的表達以探究CD4+CD25+T細胞對NK細胞細胞毒作用的調控及其機制。實驗結果與結論:1.在78例NSCLC肺癌組織標本中,CCR4的陽性表達率為57.7%;在癌旁組織標本中,陽性表達率為32.1%,統(tǒng)計分析顯示非小細胞肺癌組織中CCR4的表達明顯高于癌旁組織,差異有高度統(tǒng)計意義(P??0.01)。非小細胞肺癌組織中CCR4的陽性表達與NSCLC患者臨床分期相關,而與患者的年齡、性別、組織學分型、病理分級、腫瘤大小、淋巴結狀態(tài)均無關。NSCLC患者外周血NK細胞數(shù)量較正常對照組沒有差異,CD8+細胞的數(shù)量和CD4+/CD8+比例較正常對照組存在差異,特別是Treg細胞和CCR4+Treg細胞的數(shù)量存在顯著升高,這些細胞亞群的數(shù)量缺陷反映了肺癌患者的全身免疫功能狀態(tài)。CCR4陽性NSCLC患者外周血細胞因子TGF-β1和IL-10濃度較正常對照組明顯增高,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);而IL-2和IFN-γ濃度較正常對照組顯著降低,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01)。在CCR4陽性NSCLC患者腫瘤微環(huán)境中,NK細胞、Treg細胞、CCR4+Treg細胞的表達水平較癌旁組織存在顯著差異,這些細胞亞群的數(shù)量改變可能與肺癌患者腫瘤組織免疫微環(huán)境的免疫功能狀態(tài)有關。腫瘤組織中細胞因子TGF-β1和IL-10濃度較癌旁組織明顯增高,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);而IL-2和IFN-γ濃度較癌旁組織顯著降低,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01)。腫瘤組織CCR4 m RNA較癌旁組織表達明顯增高,差異有顯著統(tǒng)計意義(P0.01);腫瘤組織TGF-β1 m RNA表達較癌旁組織明顯增高,差異有顯著統(tǒng)計意義(P0.01)。腫瘤組織中CCR4和TGF-β1的表達與Treg細胞水平呈明顯正相關。將78例NSCLC患者分成CCR4陽性組和CCR4陰性組,采用Kaplan-Meier法分析NSCLC患者三年生存期的比較,隨訪結果顯示CCR4陰性組患者較CCR4陽性組具有更長的生存期,差異有統(tǒng)計意義(P0.05),提示非小細胞肺癌患者CCR4陰性表達可預示患者生存期的改善。2.免疫磁珠分選后的CD4+CD25+T細胞和CD4+CD25-T細胞純度均在90%以上,細胞獲得率較高。腫瘤組織中趨化因子CCL17和CCL22的濃度較癌旁組織均明顯增高,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01)。在rh CCL17和rh CCL22的作用下,Transwell板下室的CD4+CD25+T細胞數(shù)量較空白對照組明顯增多,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);CCR4中和抗體與rh CCL17/rh CCL22共同作用組,Transwell板下室的CD4+CD25+T細胞數(shù)量較rh CCL17或rh CCL22單獨作用組明顯降低,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01),證明腫瘤組織中Treg細胞數(shù)量增多,可能與CCL17和CCL22的高濃度有關,通過趨化因子受體CCR4募集Treg細胞進入腫瘤組織。腫瘤組織Treg細胞數(shù)量的增多,還可能與腫瘤微環(huán)境中TGF-?1誘導CD4+CD25-T細胞轉化為CD4+CD25+調節(jié)性T細胞有關,中和性抗TGF-?1單克隆抗體能顯著降低其誘導作用。腫瘤組織組和癌旁組織組調節(jié)性T細胞(CD4+CD25+T細胞)均能抑制效應性T細胞(CD4+CD25-T細胞)增值功能,而且腫瘤組織來源的Treg細胞抑制作用比癌旁組織組明顯增強;隨著Tregs:Teffs的比例由0:1、0.25:1、0.5:1向1:1增高,效應性T細胞(CD4+CD25-T細胞)的增殖指數(shù)逐漸降低,調節(jié)性T細胞對效應性T細胞的抑制率也呈現(xiàn)逐漸增大,證明調節(jié)性T細胞對效應性T細胞增值的抑制作用表現(xiàn)為濃度依耐性;當Tregs對Teffs比例相同條件下,腫瘤組織組調節(jié)性T細胞對效應性T細胞的抑制率強于癌旁組織組,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.001)。中和性抗TGF-?1單克隆抗體組Tregs對Teffs增值的抑制率較未加入組明顯降低,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01),證明Treg細胞可能通過TGF-?途徑發(fā)揮其對Teff細胞增殖的抑制作用。3.腫瘤組織NK細胞較癌旁組織組低表達表面活化型受體NKG2D,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01),其他活化型受體NKp30、NKp46及抑制型受體NKG2A較癌旁組織組無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05),鑒于NKG2D是自然殺傷細胞的表面重要的活化性受體,在自然殺傷細胞發(fā)揮細胞毒作用時起關鍵因素,其表達下降可能會導致NK細胞沒有足夠量的活化型受體識別相應的配體,進一步導致NK細胞的活化程度不夠,影響NK細胞在腫瘤微環(huán)境中的功能,進而介導了腫瘤的免疫逃逸。腫瘤組織中CCR4 m RNA與NK細胞的百分比呈顯著負相關(P0.01),該結果提示腫瘤組織中CCR4 m RNA高表達可負向調控了NK細胞的數(shù)量。以肺癌組織TGF-?1濃度與NK細胞數(shù)量進行線性相關性分析,結果顯示腫瘤組織中TGF-?1濃度與NK細胞的百分比呈顯著負相關(P0.01),結果提示腫瘤組織中TGF-?1高濃度可能負向調控了NK細胞的數(shù)量。腫瘤組織培養(yǎng)上清混合培養(yǎng)基組NKG2D的表達較單純1640培養(yǎng)基組顯著下降,差異有顯著統(tǒng)計意義(P0.01);中和性抗TGF-?1單克隆抗體(20μg/ml)組NKG2D的表達較混合培養(yǎng)基組明顯上升,差異有高度統(tǒng)計學意義(P0.01),證明腫瘤微環(huán)境可通過TGF-?通路誘導NK細胞活化型受體NKG2D的下調,進而抑制NK細胞的免疫學功能。rh IL-2單獨作用時腫瘤組織組NK細胞CD69+NK百分率較癌旁組織組降低,差異無統(tǒng)計意義(P0.05),但較未刺激組明顯升高,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);CD4+CD25+T細胞混合培養(yǎng)后,CD69+NK細胞百分率較rh IL-2單獨作用組明顯降低,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);使用中和性抗TGF-?1單克隆抗體可以減弱Treg對NK細胞活化的抑制作用,結果提示腫瘤組織中Treg細胞可能通過TGF-?通路調控NK細胞的活化。rh IL-2單獨作用時,腫瘤組織組NK細胞對K562細胞的細胞毒作用較癌旁組織組明顯降低,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);腫瘤組織Treg細胞混合培養(yǎng)均能明顯降低兩組NK細胞的細胞毒作用,差異有高度統(tǒng)計意義(P0.01);加入中和性抗TGF-?1單克隆抗體可部分逆轉Treg對NK細胞細胞毒作用的抑制作用,結果提示Treg細胞能通過TGF-?1信號通路抑制NK細胞細胞毒作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 任忠梅,楊秋安,張玉晶;晚期非小細胞肺癌患者外周血TNF-α檢測的臨床意義[J];山東醫(yī)藥;2000年18期

2 許運龍,郭昭揚,張云興,許賢榮;血管內皮生長因子在人非小細胞肺癌中表達的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

3 王繼營,高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細胞肺癌37例[J];中國肺癌雜志;2000年02期

4 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細胞肺癌的化療:一種新趨勢[J];中國肺癌雜志;2000年05期

5 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細胞肺癌[J];中國肺癌雜志;2000年05期

6 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細胞肺癌病人的一項預后因素[J];國外醫(yī)學(內科學分冊);2000年11期

7 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J];泰山醫(yī)學院學報;2000年04期

8 朱建英;預計2009年非小細胞肺癌藥物市場將達20億美元[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);2001年02期

9 張利偉,劉樹秋,陳海英,萬錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2001年05期

10 王肇炎;晚期非小細胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

相關會議論文 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強;;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其意義[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國腫瘤核醫(yī)學新技術研討會論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛;邊海蓉;盧振國;楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復發(fā)非小細胞肺癌[A];2007第六屆全國放射腫瘤學學術年會論文集[C];2007年

4 馮耘;萬歡英;高蓓莉;項軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉換酶二在非小細胞肺癌腫瘤生長和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學會第五屆全國胸部腫瘤及內窺鏡學術會議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細胞肺癌術后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會肺癌專業(yè)委員會2011年學術年會論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細胞肺癌患者多因素預后分析[A];第13屆全國肺癌學術大會論文匯編[C];2013年

7 張華;;術前中性粒細胞和淋巴細胞比值對非小細胞肺癌患者預后的影響[A];第13屆全國肺癌學術大會論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細胞肺癌治療思考[A];第三屆中國腫瘤內科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細胞肺癌個體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對中國非小細胞肺癌患者效果佳[N];科技日報;2007年

2 曉白;非小細胞肺癌研究獲重大進展[N];人民日報;2008年

3 記者 張文天;非小細胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進展順利[N];科技日報;2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細胞肺癌的治療進展[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

6 上海長海醫(yī)院呼吸科 夏陽 整理 邱志濤;非小細胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報;2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細胞肺癌發(fā)生機制[N];健康報;2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日報;2014年

9 白京麗;非小細胞肺癌最佳治療方案[N];中國醫(yī)藥報;2000年

10 ;表皮生長因子受體抑制劑在治療非小細胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經濟報;2005年

相關博士學位論文 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測用于非小細胞肺癌轉移及預后評估的研究[D];復旦大學;2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達影響非小細胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機制[D];復旦大學;2012年

3 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細胞肺癌的實驗研究[D];南京大學;2014年

4 張沛;ILT4在非小細胞肺癌中的作用及分子機制研究[D];山東大學;2015年

5 王世坤;RBP2誘導非小細胞肺癌和食管鱗癌表皮間質化[D];山東大學;2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細胞肺癌預后評估中的應用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 邱晨;影響非小細胞肺癌手術后遠期生存的相關因素分析[D];山東大學;2015年

8 姜遠矚;術前血液學指標與淋巴結轉移陰性非小細胞肺癌患者預后關系的研究[D];山東大學;2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因對非小細胞肺癌生物學行為調控機制的初步實驗研究[D];山東大學;2015年

10 周菊;HPV-16感染對非小細胞肺癌和A549細胞的影響及miRNAs表達改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 王勇;誘導型一氧化氮合酶在非小細胞肺癌中表達的臨床意義[D];中國醫(yī)科大學;2006年

2 陳婷;非小細胞肺癌調強放射治療預后因素分析[D];福建醫(yī)科大學;2015年

3 王波;單向式全胸腔鏡下解剖性肺葉切除術治療早期非小細胞肺癌的學習曲線[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 施桂清;血管內皮抑制素聯(lián)合放化療治療非小細胞肺癌的療效及安全性研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 王靜;Eg5、Ki-67在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 覃建穎;IL-21和Tc1細胞在非小細胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學;2015年

7 張瑞;ⅢA-N2期非小細胞肺癌手術治療和放射治療的療效對比及相關預后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 石姣姣;基于多肽構建抗腫瘤靶向藥物的應用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

9 胡世霖;非小細胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達的相關性研究[D];福建中醫(yī)藥大學;2015年

10 王婷婷;細胞因子活化殺傷細胞治療非小細胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：1355216